免疫学检测技术
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第一节免疫学检测技术原理 1.2 抗原或抗体检测原理
抗原或抗体检测原理:借助抗原和抗体在体外特异性结合后 出现的各种现象,可对标本中抗原或抗体进行定性或定量检测。 定性检验:观察现象 的有无。 定量检验:反应产生 的免疫复合物的多少与 待检样品中含有相应抗 原(或抗体第二节 免疫荧光技术在食品检测中的应用 2.3 在食品检测中的应用 沙门氏菌
第三节 酶免疫技术在食品检测中的应用 3.1 基本原理 免疫酶技术:酶与抗原或抗体结合,制成酶标抗原或抗体, 既保持抗原或抗体特异性,又不影响酶本身活性,进行抗原 抗体特异反应后,再加入酶的底物,使其发生酶解作用,产 生显色反应,从而定性、定量测定样品中的抗原或抗体。 酶联免疫吸附法(ELISA):先将可溶性抗原或抗体吸附于 聚苯乙烯等固相载体表面,再加入被HRP标记的抗原或抗 体,加入HRP的底物,进行免疫酶法应,产生明显黄色产 物,以酶标仪测定OD值。
第四节 放射免疫技术在食品检测中的应用 4.1 基本原理 放射免疫分析,特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的精确 定量测定,是定量分析方面的一次重大突破。 将标记抗原、非标记抗原和特异性抗体三者置于一个系统内 的反应。再将抗原-抗体复合物 (B)与游离标记抗原(F)分开, 测量放射性强度,得到比值(B/F)。 由于标记抗原与特异性抗体的量是固定的,因此比值(B/F) 随非标记抗原的量而改变。改变非标记抗原的量,就可以绘 制出一条剂量-反应曲线。 受检标本在同样条件下进行测试,计算比值(B/F),在曲线 上查出标本中抗原的含量。
课程作业 1、什么是荧光免疫技术,其基本测定原理是什么?
2、什么是酶联免疫技术,其基本测定原理是什么?
3、什么是放射免疫技术,其基本测定原理是什么?
第二节免疫荧光技术在食品检测中的应用 2.2 免疫荧光技术的检测方法 直接法:滴加荧光抗体于待检标本片上,经反应和洗涤后在 荧光显微镜下观察,标本中如果有相应抗原村在,即与荧光抗 体特异结合,在荧光显微镜下可见有荧光的抗原抗体复合物。
间接法:将待测抗体(第一抗体)加在含有已知抗原的标本 片上作用一定时间,洗去为结合的抗体;再滴加标记抗体(第 二抗体),形成抗原抗原-抗体-标记抗体复合物,并显示荧光。
第四节 放射免疫技术在食品检测中的应用 4.1 基本原理
第四节 放射免疫技术在食品检测中的应用 4.2 放射免疫在食品检测中的应用 放射免疫分析敏感度高、特异性强、精密度高,不仅可以检 测经食品传播的细菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生虫, 还可测定小分子质量和大分子质量物质,在食品检验中应用 极广。
1.3 抗原或抗体检测原理 用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原,用于抗原或抗体检 测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。 荧光免疫技术:用化学方法使抗体(或抗原)标记上荧光素, 形成荧光标记的抗体(或抗原),再与组织或细胞中的相应抗 原(或抗体)结合,进行定性定位检查抗原或抗体。 酶联免疫分析法:将抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高 效催化作用结合起来,根据酶作用底物后显色,以颜色变化判 断实验结果,可经酶标测定仪做定量分析。 放射免疫分析法:应用竞争性结合的原理,使放射性同位素 标记抗原(或抗体)与相应抗体(或抗原)结合,通过测定抗 原抗体结合物的放射活性判断结果。
第二节免疫荧光技术在食品检测中的应用 2.1 免疫荧光技术的基本原理 原理:抗体与荧光素结合后,并不影响其和相应抗原发生特 异性结合反应,事先将待测抗原固定于载玻片上,滴加荧光标 记抗体,若荧光标记抗体与相应抗原发生特异性结合反应,不 能被缓冲液冲洗掉,在荧光显微镜下可以观察到荧光,否则荧 光抗体被缓冲液冲掉,在荧光显微镜下什么都观察不到。 荧光色素:一种能吸收及发光的光能产生荧光,并能作为染 料使用的有机化合物。
第三节 酶免疫技术在食品检测中的应用 3.1 基本原理
第三节 酶免疫技术在食品检测中的应用 3.1 基本原理
第三节 酶免疫技术在食品检测中的应用 3.2 测定方法 ELISA法必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定。 加样 保温 洗涤 比色 结果
第三节 酶免疫技术在食品检测中的应用 3.3 基本应用 在免疫学方面用于检测多种病原菌抗原或抗体,血液及其他 体液中微量蛋白成分、细胞因子等; 在食品加工领域用于测定蛋白质、激素、其他生理活性物质、 药物残留、抗生素等; 在食品安全方面用于检测果蔬农药残留、动物食品抗生素残 留、食源性病原菌及其毒素,真菌及毒素、病毒、寄生虫的 检测,例如沙门氏菌及其毒素等。
第七章 免疫学检测技术
免疫学检测技术原理
免疫荧光技术在食品检测中的应用 酶免疫技术在食品检测中的应用 放射免疫技术在食品检测中的应用 单克隆抗体技术在食品检测中的应用
第一节免疫学检测技术原理 1.1 抗原或抗体检测原理 免疫学检测技术中的荧光免疫技术、酶免疫技术、放射免疫 技术在食品检测中得到了广泛的应用。 利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、 寄生虫等,还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物 残留、抗生素等的检测。 抗原:能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞,并能与之结合 引起特异性免疫反应的物质。 抗体:在抗原刺激下产生的,并能与之特异性结合的免疫球 蛋白。
第五节 单克隆抗体技术在食品检验中的应用 传统方法制备抗体的效率低、产量有限,特异性差。 单克隆抗体技术:将能够合成专一性抗体的单克隆B淋巴细 胞与能够在体外生长繁殖的骨髓瘤细胞杂交,得到能够在体 外合成单一抗体的细胞。 单克隆抗体在食品检测中的最大优点是特异性强,不易出现 假阳性。
可用于检验经食品传播和引起食物中毒的细菌及毒素、真菌 毒素,病毒、寄生虫,农药,激素等。例如对瘦肉精(克伦 特罗)的检测。