药物透皮吸收常用实验方法概述

药物透皮吸收常用实验方法概述

李新圃,郁杰,罗金印,李宏胜,巩忠福--中兽医医药杂志 JTCVM2001（6）

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,甘肃兰州 730050)

治疗畜禽疾病的传统给药方式主要是采用注射、口服或将药物投入饮水或饲料中。随着制剂技术的不断发展,透皮制剂在兽医临床上的应用日趋广泛。透皮制剂与其他给药方式相比较,主要具有可产生持久、恒定及可控的血药浓度;避免肝脏对药物首过代谢的降解作用;给药方法简单、可减轻副作用、在发生问题时能及时停止给药;可减少给药次数和剂量等优点。鉴于此,透皮制剂在兽医临床领域倍受关注。近年来,兽医科技工作者通过不懈努力,已有许多兽用透皮制剂相继问世,使用最多的是杀虫剂。透皮实验法是研究透皮吸收药物必不可少的实验手段,笔者就几种常用的透皮吸收实验方法作一简述。

1 体内法

111 化学测定法〔1〕

该方法是根据药物透皮吸收的原理,直接将药膏涂在机体皮肤上,在不同间隔时间测定血、尿、粪中药物的含量,观察药物的透皮吸收情况。由于有些药物的透皮吸收量很小,药物在体内的分布和代谢很复杂,有时可用测定用药部位残存的药物量来反映药物透皮吸收情况。如魏雪纹等〔2〕在吡罗昔康涂膜剂的透皮吸收实验中,使健康家兔禁食24h,腹部备皮6×10cm2,涂药20ml,分别于2、4、6、8、10、20、24、25h耳静脉采血,经处理后在Κmax=352±1波长处测UV吸收值,经数据处理得制剂的透皮吸收为一级释药过程。归成等〔3〕将不同基质的几种硝酸甘油软膏涂布于受试者前臂内侧的皮肤上,分别于不同时间间隔取下皮肤上的药膏,测定其中残留的硝酸甘油含量,结果表明硝酸甘油与亲水性基质亲和力小、释放快、易被皮肤吸收;而与亲脂性基质亲和力大、释放慢、不易被皮肤吸收。

112 组织检查法

该方法是利用检查组织及其切片以测定某些药物应用于皮肤后所产生的对局部组织的影响作用。周一平等〔4〕在大鼠肉芽肿形成实验中,给鼠后颈部植入滤纸片一块,术后2～6d,在试验组及对照组动物滤纸片上方皮肤涂擦吲哚美辛擦剂和对照药液,7d后处死实验大鼠,剥离出肉芽肿称重,结果表明,含有Azone的吲哚美辛擦剂对肉芽肿重量的抑制率为71%,与对照组比较,P<0.01。

113 同位素示踪法

同位素示踪法是利用放射性同位素标记药物来研究药物释放、穿透和吸收,是一种比较精确的方法,可以直接测定用药部位放射量的变化,也可测定体内血液、尿液或器官中的放射物质的量。Bronaugh等在小鼠刮去被毛的皮肤上涂布含有放射性同位素标记物的药物软膏,用氰丙烯酯粘合剂在该皮肤上固定一尼龙环以保护这一部位,并在小鼠前腿后侧和后腿前侧系上橡胶管以防装置移动,将小鼠置于代谢笼中,连续24h收集尿样,同位素示踪测定含量。Wester〔5〕报道了应用类似Bronaugh的方法精确地评估了药物透过皮肤的穿透力。

114 生理反应法

此法是根据生理作用,测定药物产生局部或全身作用的时间与程度。

2 体外法

211 静态小室

21111 双隔室静态小室〔6〕该法适用于液状透皮制剂的体外透皮实验。置穿透剂水溶液于实验皮肤的一侧,使其向另一侧具有一定流速的水溶液中扩散,两侧同时配有搅拌器,经一定时间后,测定药物浓度的变化。吴谦等〔7〕介绍的简易T形管透皮吸收扩散模型,可以说是一种简化的双隔室静态小室。作者将实验皮片固定于直径1.0cm玻璃T形管两侧管口,上口为定期取样口,测定时管内加接收液至预定刻度,将T形管置于含有被测药液的容器中,药液高度与T形管内液体同一水平,再将上述T形管装置连同磁力搅拌器置32℃恒温、恒湿培

养箱中。

21112 单隔室静态小室将固定有实验皮片的释放池安装在单隔室的上侧,置药物透皮剂于离体实验皮肤上,在32℃水浴中恒温一定时间,吸取实验皮肤下隔室中被搅拌溶液进行测定,监测药物透过情况。Franz设计的扩散小室是目前常用的一种单隔室静态小室的前体。郭庆东等〔8〕使用改良Franz供给池,观察了介质pH、药物浓度、月桂氮唑酮对二氢埃托啡(DHE)透皮作用的影响,发现这三种因素均影响DHE的透皮吸收。高玉升等〔9〕在“透皮吸收促进剂对中药洋金花等药物释放的研究”中,参照Franz扩散小室制做了一种简易的透皮吸收实验装

置,实验表明,洋金花中东莨菪碱在受试动物离体皮肤的不同部位的透过率有很大差异。212 流通扩散小室〔10〕这种方法是一种比单隔室法更为先进的方法,主要模拟毛细血管的作用,在皮肤下加一灌注流以带走透过皮肤的物质,从而可获得更好的透皮吸收生理评价。该法虽好,但装置复杂,并未得到广泛应用。

213 简单扩散小室〔10〕将实验皮片夹在一根装有实验药物管的一端,并浸在一个大的含有接受液的池中。该装置十分简单,不需特殊的仪器设备,可因地取材,是一种常用的体外实验法,与上述装置相比,虽然不容易模拟体内的生理环境,但在一定程度上能反应体内的药物吸收情况。齐瑗晶等〔11〕用自制简单扩散小室装置,对离体小鼠皮进行了布洛芬软膏渗透促进剂的选择及体外透皮释放率的测定,并用体外累积释放率高的样品进行药效学实验,结果显示该样品的布洛芬软膏通过透皮吸收仍具有明显的止痛作用及轻度消炎作用,提示药物的透皮吸收已在体内达到了有效血药浓度。

214 实验皮片选择

体外法进行透皮实验,皮片的选择可以是离体动物皮肤,也可以是纤维素膜、硅胶膜、赛璐玢膜等,关于膜的种类可参考有关文献〔12〕。

3 结语

大量实验表明,体内法能客观反映药物透皮吸收情况及对生理效应的影响,但操作复杂,需饲养实验动物,一些新药也很难用体内法进行实验。体外法操作简单,可以控制环境、考查药物透皮吸收的特定影响因素,不足之处是不能真实反映体内生物环境的影响,但体内法与体外法之间有很好的相关性。岩左曜等〔13〕对小鼠所做的实验表明,无论是体内法还是体外法都反映出非离子表面活性剂POE分子数越小,越能促进双氯灭痛钠的透皮吸收作用。而CHEON等〔14〕

用小鼠进行体内体外法实验,表明用CH3CH2OH Panasate800(40

60)作为赋形剂都能有效提高亲水性药物的透皮性,并且药物透皮吸收量随药物亲水性增加而增加。

总之,开发研究药物的透皮制剂离不开透皮实验方法,体内法与体外法虽有较好的相关性,但在药物滞后时间、释放速率方面差别还是很大〔10〕。笔者通过对实验资料的分析认为,筛选透皮吸收药物,应首先进行体外实验法,了解药物透皮吸收能力,并选择合适的透皮促进剂,通过控制用药环境考察药物透皮吸收的特定影响因素,然后选择适当的动物进行体内实验,掌握药物经透皮给药后其用药量、药效及对皮肤的刺激作用,以确定临床疗效。

参考文献

〔1〕柳翠敬.软膏中药物的透皮吸收〔J〕.药学通报,1982,17(3):39

〔2〕魏雪纹,那郁英,郑刚等.吡罗昔康涂膜剂的研制及应用〔J〕.药学通报,1988,23(12):733〔3〕归成,王其涛,顾菊康.几种硝酸甘油软膏的人体透皮吸收试验〔J〕.药学通报,1982,17(11):39

〔4〕周一平,李悟君,夏春凤等.吲哚美辛擦剂的抗炎镇痛作用及毒性试验〔J〕.中国药学杂志,1991,26(6):346