超高效液相色谱串联质谱法测定果蔬中13种植物生长调节剂残留量

分析物
28；22 8 2，4-D
（+）294.0 69.9*；125.0 25；36 9 Cloprop
（+）292.1 70.0*；125.0 23；26 10 KT-30
（-）219.1 100.0*； 71.0 10；29 11 4-CPA
（-）345.1 143.1*；239.2 29；16 12 2，4，5-T
噻苯隆、赤霉素、2—奈乙酸、氯吡脲、2，4—D、调果酸、4—氯苯氧乙酸、2，4，5—三氯苯氧乙酸、6—BA 和氯苯胺灵在
质量浓度 1~20 μg/L 范围内线性良好，相关系数 r 均大于 0.99，样品在 10、20、50 μg/kg 等 3 个添加水平的平均回
收率为 81.2%~106%，变异系数为 2.13%~11.8%（n=6），方法的定量限为 0.022~16 μg/kg。该方法简便、特异性好，
Abstract：To develop a ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry（UPLC-MS/ MS）method for the determination of 13 plant growth regulator residues in fruits and vegetables. The sample was extracted with methanol–H2O and the chromatographic separation was performed on the Shim-pack XR C18 column （75 mm × 2.0 mm，1.6 μm），using acetonitrile-0.1% acetic acid as the mobile phase by gradient elution. The method applied electrospray ionization in positive and negative multiple reaction monitoring mode and quantified with peak area with matrix-matched external standard method. A good linearity of Chlormequat chloride， Paclobutrazol，Uniconazole，thidiazuron，gibberellic acid 2-naphthaleneacetic acid，Forchlorfenuron，2，4-D， Cloprop，4-Chloroph-enoxyacetic acid，2，4，5-Trichlorophenoxyacetic acid，6-Benzylaminopurine and isopropyl N-（3-chlorophenyl）carbamate were in the concentration range of 1.0-20 μg/L with a correlation coefficient above 0.99. The average recoveries from three different were with the range of 81.2% to 106% at spiked levels of 10，20， 50 μg/kg，and the relative standard deviations were between 2.13% to 11.8%（n=6）. The limit of quantification was in the range of 0.022~16 μg/kg. This method is simple，selectivity and suitable for determination of 13 residues in fruits and vegetables.
组分 编号
分析物
1 Chlormequatchloride
2
PP333
3 Uniconazole
4 TDZ
5 GA3
6 2-NAA
7 6-BA
注：“*”为定量离子。
表 1 13 种植物生长调节剂的质谱参数
母离子 （m/z） （-）124.2
子离子 （m/z） 58.0*；64.9
CE（eV）
组分 编号
近年来，植物生长调节剂应用日益广泛，在世界 农业市场中，植物生长调节剂销售比率逐年增加，我 国也是应用植物生长调节剂最为广泛的国家之一。 植物生长调节剂是与植物激素具有相似生理和生物
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学效应的人工合成物质。基于植物生长调节剂属于 农药一类，具有一定的毒性，各国对许多植物生长 调节剂的残留限量作了规定。因此，需加强对植物 生长调节剂的监管，建立植物生长调节剂的检测方 法必不可少，以保证植物生长调节剂的安全使用。目 前，植物生长调节剂的检测方法有气相色谱法［1］、 气 相 色 谱 质 谱 法［2-5］、液 相 色 谱 法［6-9］、液 相 色 谱 质 谱 联 用 法［10 -17］等。其中，气 相 色 谱 法 大 多 需 要 繁琐的衍生化前处理 ；液相色谱法选择性不高，因 此基质干扰大，对样品的净化要求高，高通量的检 测方法不容易实现 ；色谱质谱联用法既有色谱的 分离功能，又有质谱的定性功能，逐渐成为主流技 术，尤其是液相色谱质谱联用法应用较多，可以实 现 高 通 量的 检 测。本 试 验 在已有 文 献的 基 础 上 进 行研究，对样品的前处理方法进行摸索优化，建立 了超高效液相色谱质谱联用技术同时测定果蔬中 的 13 种植物生长调节剂，方法快速、简便、特异性 好，实用性强。
1 材料与方法
1.1 试验材料 试剂：乙腈、甲醇、乙酸（色谱纯）；13 种植物生
长调节剂标准品：矮壮素（Chlormequat chloride）、多 效唑（Paclobutrazol，PP333）、烯效唑（Uniconazole）、 噻 苯隆（t h i d i a z u r o n，T D Z）、赤 霉 素（g i b b e r e l l i c acid，GA3）、2—奈乙酸（2-naphthaleneacetic acid， 2 -N A A）、氯吡 脲（F o r c h l o r f e n u r o n，K T -30）、2， 4—滴（2，4-D）、调果酸（Cloprop）、4—氯苯氧乙酸 （4-Chlorophenoxyacetic acid，4-CPA）、2，4，5—三氯 苯氧乙酸（2，4，5-Trichlorophenoxyaceticacid，2，4， 5-T）、6—苄氨基嘌呤 6-Benzylaminopurine，6-BA）、 氯苯胺灵（isopropyl N-3-chlorophenyl carbamate， C P P M）。以 上 试 剂 纯 度 均 大 于 9 6 %，德 国 D r
LIN Hai-dan1，XIE Shou-xin1，WANG Lan1，XU Juan1，WU Si-yan2，ZOU Zhi-fei1
（1. Inspection and Quarantine Technology Center，Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau， Guangzhou 510623，China；2. Food Science and Engineering，Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510006，China）
Key words：liquid chromatography tandem mass spectrometry；fruits and vegetables；plant growth regulator
收稿日期：2014-11-24 基金项目：广东省科技计划项目（2011B010500015） 作者简介：林海丹（1970-），女，硕士，研究员，E-mail： linhd@iqtc.cn
适用于果蔬中 13 种植物生长调节剂的检测。
关键词：高效液相色谱串联质谱；果蔬；植物生长调节剂
中图分类号：O657.63
文献标识码：A
文章编号：1004-874X（2015）09-0082-06
Determination of 13 plant growth regulator residues in fruits and vegetables using ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
DOI:10.16768/j.issn.1004-87ຫໍສະໝຸດ Baidux.2015.09.007
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广东农业科学 2015 年第 9 期
超高效液相色谱串联质谱法测定果蔬中 13 种植物生长调节剂残留量
林海丹1，谢守新1，王 岚1，徐 娟1，吴思彦2，邹志飞1
（1. 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东 广州 510623； 2. 广东药学院食品科学与工程系，广东 广州 510006）
Ehrenstorfer 公司生产。 仪器：岛津 LCMS-8050 三重四级杆质谱，配岛
津 LC-30AD 超高效液相色谱仪（日本岛津公司）； Philips HR 2168 搅拌器（荷兰 Philips 公司）、IKA MS 3 涡旋振荡器（德国 IKA 公司）；Sigma 4K15 离心机 （德国 Sigma 公司）；Mill-Q 超纯水器（美国 Millipore 公司）。 1.2 试验方法 1.2.1 标准工作液的配制 分别精密称取适量的标 准品，用甲醇配制成 500 mg/L 的贮备液，冷冻保存。 量取各准贮备液用甲醇配制 10.0 g/L 的标准中间液， 以空白果蔬样品提取液逐级稀释为适当浓度的标准 工作液。 1.2.2 样品前处理 称取 5 g 已均质的试样于 50 mL 离心管中，加水至总量 20 mL（加水的量需扣除 样品含水量），涡旋振荡提取 2 min，加 30 mL 甲醇， 混匀，涡旋振荡提取 1 min，置于水平往复振荡提取 15 min，8 000 r/min 离心 5 min，上清液经 0.22 μm 有 机滤膜过滤后，供液相色谱 - 质谱测定。 1.2.3 色谱条件 色谱柱为 Shim-pack XR C18 柱 （70 mm×2.0 mm，1.6 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1% 乙酸（B），0~2 min，A 为 5%~95%；2~5 min，A 为 95%；5~8 min，A 为 5%；流速为 0.40 mL/min；柱温 为 40℃；进样量为 10 μL。 1.2.4 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI 源）； 扫描方式 ：多反应监测（MRM）；正离子电喷雾电 压：4 kV；负离子电喷雾电压：-3 kV；雾化气流速： 3 L/min；加热气温度和流速：300℃，10 L/min；反吹 气温度和流速：400℃，10 L/min；脱溶剂单元温度： 250℃；碰撞气压力：270 kPa；13 种植物生长调节剂 的定量和定性离子、碰撞能量（CE）参数见表 1。在 以上色谱和质谱实验条件下，13 种植物生长调节剂 的总离子流图（TIC）见图 1。
摘 要：建立了超高效液相色谱串联质谱法同时测定果蔬 13 种植物生长调节剂残留量的方法。样品经甲醇
水提取，用 Shim-pack XR C18 色谱柱（75 mm×2.0 mm，1.6 μm），以乙腈 -0.1% 乙酸溶液作为流动相梯度洗脱，采
用电喷雾离子化，正、负离子扫描，多反应选择离子监测，基质匹配外标法峰面积定量。矮壮素、多效唑、烯效唑、
（-）201.2 143.0*；115.0 17；37 13 CPPM
（+）226.1 91.0*；65.0 31；22
母离子 （m/z） （-）219.3 （-）199.3 （-）246.3 （-）185.4 （-）255.2 （+）214.1