克雷伯脂肪酶产生菌产酶条件优化及其粗酶性质研究

７ ２ ｈ。
能在有机溶 剂 中催 化酯合 、 酯交 换等一 系列反应 ， 因而在轻 工、 工、 化 医药 、 品 等 行 业 具 有 应 用 和 潜 在 的 应 用 前 景 … 。 食 脂肪酶的来源非常广泛 ， 在动物组织 、 植物 的种 子都有报道 。
而 微 生 物 中 的 脂 肪 酶 由于 来 源 广 泛 ， 类 繁 多 ， 于 分 离 、 种 易 纯 化 且适 于工 业 化 生 产 而 越 来 越 受 到 了 人 们 的 重 视 。 。 因 此 ， 找 和 分 离 能产 生 新 型脂 肪 酶 的微 生 物 菌 种 成 为 当 前 脂 寻 肪 酶研 究 领 域 的热 点 之 一 ， 徐 同 成 等 从 南 极 假 丝 酵 母 中 如 克 隆 表达 了脂 肪 酶 Ａ， 萌 等 在 内蒙 古 锡 林 浩 特 地 区 盐 湖 张 菌 种样 品分 离 获 得 １ 嗜盐 脂 肪 酶 高 产 菌 并 对 其酶 学 性 质 做 株 了研 究 。本 实 验 室 从 山 东 的 油 田分 离 鉴 定 了 １ 产 脂 肪 酶 的 株 克 雷 伯菌 ， 就其 产 酶 条 件 及 其 酶 性 质做 报道 ， 丰 富脂 肪酶 现 以
江苏农业科学
谭有将 ， 小燕， 谢 王
２ １ 第 ４期 ０ ０年
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群， 等．克 雷 伯 脂肪 酶产 生 菌产 酶 条 件 优 化 及 其 粗 酶 性 质研 究 ［ ］ Ｊ ．江 苏 农 业科 学 ，０ ０ ４ ：５ ２ １ （ ）３ ５—３７ ５
克雷伯脂肪酶产生菌产酶条件优化及其粗酶 Ｉ质研究 生
１ ３ 粗 酶 制 备 及 其 酶 活 测 定 ．
将 发 酵 好 的培 养 基 经 ４℃ 、００ ０ｒｍｉ 心 ５ｍ ｎ倒 掉 １ ０ ｎ离 ／ ｉ，
上清液 ， 收集到菌体 ， ｐ 用 Ｈ值 ７ ０的 Ｐ Ｓ溶液重悬菌体 。重 ． Ｂ 悬 的菌体在冰上 ， 用功率为 ３０— ０ 间隔为 ２ｓ ０ ４ ０Ｗ、 的超声波
破 碎 １ｍ ｎ 即 制 得粗 酶液 。用 于 酶 性 质研 究 的粗 酶 还 要进 一 ｉ， 步 用 冷 冻 干 燥 剂 冷冻 干燥 为 粉 末 状 ， 后 溶 于 一 定 量 的无 菌 然 去 离 子 水 中。
酶活性测定 按照文献 ［ ］ 行 。脂 肪酶活性 定义 为 ： ３进 在
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
的来源及 为该酶的进一步开发利用奠定基础。
１ 材 料 和 方 法 １ １ 菌种 ．
２ １ １ 不 同 碳 源 对产 酶 的影 响 ．．
将 种 子 液 接种 到 以葡 萄 糖 、
克雷伯 氏菌 Ａ （ ｌ ｓｌ ｐ ２ 分离 自山东东 营油 田 ２ Ｋｅ ｉｌ ｓ．Ａ ） ｂ ｅａ
附近 ， 由本 实验 室保 存 。 １２ 培 养基 及 产 酶 条 件 优 化 ． 种 子 培 养 基 ： 白 胨 １ ． ／ ， 母 膏 ５ ０ ｇ Ｌ Ｎ Ｃ 蛋 ０ ０ｇＬ 酵 ． ／ ， ａ１ １ ． ／ 。 酵 培 养 基 ： 白 胨 １ ． ／ ， ｇ Ｏ ・ Ｈ Ｏ ０ ０ｇ Ｌ 发 蛋 ０ ０ ｇＬ Ｍ Ｓ ７ ０ ５ｇＬ Ｋ Ｈ Ｏ ０ｇ Ｌ Ｋ Ｏ ４ ５ｇ Ｌ 菜 籽 油 １ Ｌ ｐ ． ／ ， ２ Ｐ １ ／ ， Ｈ Ｐ ． ／ ， ０ ，Ｈ 值 为 自然 。 发酵 条 件 ： 选 单 克 隆 菌 落 接 种 到 种 子 培 养 基 中 ，Ｏｑ 挑 ３ Ｃ、 ２０ｒｍｎ摇 床 培 养 过 夜 。 按 １Ｏ 的接 种 量 接 种 到 ５ Ｌ的 ０ ｉ ／ ．％ ０ｍ 发 酵 培养 瓶 （５ Ｌ三 角 瓶 ） ，Ｏｏ ２ ０ｒｍ ｎ摇 床 培 养 ２０ ｍ 中 ３ Ｃ、０ ／ ｉ
制作用 。 关 键 词 ：克 雷伯 氏 菌 ； 肪 酶 ；酶学 性 质 脂
中 图分 类 号 ：Ｑ １ ． ８４ ９ 文献 标 志 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２—１０ （０ ０ ０ ０ ５ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）４— ３ ５— ３
脂 肪 酶 （ｉ ｓ ， Ｃ３ １ １３ 是 一 类 能 水 解 脂 肪 的 酶 类 ， １ ａｅ Ｅ ． ． ． ） ｐ
谭 有将 ， 小燕 ，王 谢 群 ，陈 芳 ，高剑锋
（ 河 子 大学 生命 科 学 学 院 ， 疆 石 河 子 ８ ２０ ） 石 新 ３０ ３
摘要 ： 对本 实验 室分 离的 １ 株产脂肪酶克雷伯 氏菌 Ａ （ ｌ ｓ ｌ ｐ ２ 的产酶条 件进行优化 ， ２ Ｋｅ ｉｌ ｓ ．Ａ ） ｂ ｅａ 并对其粗 酶性质
进 行 初 步 的研 究 ， 为该 酶 的进 一 步 开 发利 用 奠 定一 定基 础 。 该 菌 的 最 佳 产 酶 培 养基 为 （ ／ ） 蛋 白胨 １ ０ ， Ｓ ・ ｍＶ： ． ％ ＭｇＯ
７ ２ ．５ ， ２ Ｐ ４ ．％ ， Ｈ２ Ｏ ．５ ，．％ 的菜 籽油。发 酵条件 ：Ｈ值 ６５～ ． ２ Ｈ Ｏ０ ０ ％ Ｋ Ｈ Ｏ ０ Ｋ Ｐ ４ ４ ％ ２０ １ ０ ｐ ． ７５，８℃ ，０ ／ ｉ 床振荡 ２０ｒｍｎ摇 培养 ３ｄ 。酶学性质表 明： 酶的最佳 催化温度和最适催化 ｐ 该 Ｈ值分别为 ４ ０℃和 ｐ Ｈ值 ８ ０ 该酶 的热 稳定性较差 ， ．， 在 ６ ０℃保温１ｈ 时丧失 ５ ％的活性 。Ｍ ， ａ ０ ｇ ｃ “和 Ｋ 能刺激该酶 的活性 ， 而低 浓度 的 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ和 Ｓ Ｓ对该酶有明显的抑 Ｄ
测 定 条 件 下 ， １ｍｎ释 放 出 １Ｎ ｏ 脂 肪 酸 的 酶 量 定 义 为 １ 每 ｉ ｍｌ 个 酶 活 单 位 （ 。相 对 酶 活 是 指 在 实验 中所 测 得 的酶 活 力 值 ｕ） 与 最 高 酶 活 力值 的百 分 比 。
２ 结 果 与分 析
２１ ． 酶 的优 化