种子真实性和品种纯度鉴定Gao
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人的DNA指纹分析很早就用于 亲缘鉴定和个体识别
利用DNA指纹进行种子检测：
不同基因型间存在着多态性非常丰富的DNA 差异，用分子生物学方法找出不同品种（组合、 个体）在DNA水平上的差异，从而有效的检测这 些品种。
DNA 结 构 解 析
DNA指纹
图
DNA 鉴定的主要优势：
准确性：不受时空表达影响； 谱带容易分辨 快捷性：实验持续时间短 方便性：操作简单快速
DNA分子标记技术检测方法 限制性片段长度多态性 （RFLP） 随机片段长度多态性 扩增片段长度多态性 单核苷酸多态性 简单序列重复 （RAPD） （AFLP） （SNP） （SSR） 序列特征片段长度多态性 (SCAR)
SSR标记：由1-5个碱基对为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列。
展望
定量PCR技术的应用； 检测芯片的研制与应用； 开发和利用与产量、株高、抗逆性等农 艺性状紧密连锁的标记，确保实验室检测 结果与田间观测结果的一致
现有关于分子检测的国家标准
其它检测标准的研制
杂交棉花及亲本真实性和纯度的DNA鉴定分析方法 20080958-T-326 杂交油菜及亲本真实性和纯度的DNA鉴定分析方法 20080959-T-326 油菜杂交种子真实性和品种纯度SSR分子技术鉴定方法
问题
相关检测标准研制、推广力度不够； 检测样本的容量； 检测结果的判读标准性
对b)的情况，再选用12个SSR位点进行分析，若新选用的12个SSR位点中 a) 与标准对照不一致位点数≥1，判定为异品种； b) 与标准对照不一致位点数＝0 ，判定为相同品种。
品种纯度检验结果按公式计算：
P（%）= பைடு நூலகம்中：
NT − N D × 100% NT
P—品种纯度； NT—为供检种子粒数（幼苗数、株数）； ND—为判定为异品种的种子粒数（幼苗 数、株数）。
种子真实性和品种纯度 检测技术简介
湖北省种子管理站 高明鑫
内容
种子真实性和品种纯度检测的现状 分子鉴定的基本原理及流程 现有的分子检测相关标准 分子鉴定存在的问题与展望
传统种子真实性及品种纯度检测方法
幼苗鉴定 籽粒形态鉴定 田间小区种植鉴定 同工酶电泳分析鉴定 贮藏蛋白质电泳分析鉴定
分子鉴定理论
真实性检测图片
示例8个标记中，B 与对照样品（A）的带型完全一致； C与对照样品（A）在3个位点上存在差异
1 2 3 掺入的不育系
掺入的恢复系
引物234对两优培九 (F1)人为掺杂种子纯度鉴定结果
M:：100bp标准分子量 1：不育系培矮64S 2：杂种F1两优培九 3：恢复系R9311.
聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
鉴定与判读 将受检样品的电泳谱带与标 准对照的电泳谱带比较，根据谱 带的一致性，鉴定受检样品的真 实性和品种纯度。
真实性
鉴定时，以多数个体具有即主带作为品种特征带进行统计分析： 先选择12个位点进行分析，在12个SSR位点中：
a) 与标准对照不一致位点数≥2，判定为异品种； b) 与标准对照不一致位点数＝1，判定为疑似品种； c) 与标准对照不一致位点数＝0，判定为相同品种。
优点 ：数量丰富 多个等位基因，信息含量高 呈孟德尔共显性遗传 操作简便、经济、重复性好 便于不同研究者交换使用
DNA提取及纯化
RAPD SCAR SSR SSR AFLP
PCR扩增
酶切
RFLP
DNA谱带
品种真实性和纯度鉴定
品种真实性和纯度的分子鉴定流程图
谱带示例
水稻F1 代杂交种具有双亲的互补带型
利用DNA指纹进行种子检测：
不同基因型间存在着多态性非常丰富的DNA 差异，用分子生物学方法找出不同品种（组合、 个体）在DNA水平上的差异，从而有效的检测这 些品种。
DNA 结 构 解 析
DNA指纹
图
DNA 鉴定的主要优势：
准确性：不受时空表达影响； 谱带容易分辨 快捷性：实验持续时间短 方便性：操作简单快速
DNA分子标记技术检测方法 限制性片段长度多态性 （RFLP） 随机片段长度多态性 扩增片段长度多态性 单核苷酸多态性 简单序列重复 （RAPD） （AFLP） （SNP） （SSR） 序列特征片段长度多态性 (SCAR)
SSR标记：由1-5个碱基对为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列。
展望
定量PCR技术的应用； 检测芯片的研制与应用； 开发和利用与产量、株高、抗逆性等农 艺性状紧密连锁的标记，确保实验室检测 结果与田间观测结果的一致
现有关于分子检测的国家标准
其它检测标准的研制
杂交棉花及亲本真实性和纯度的DNA鉴定分析方法 20080958-T-326 杂交油菜及亲本真实性和纯度的DNA鉴定分析方法 20080959-T-326 油菜杂交种子真实性和品种纯度SSR分子技术鉴定方法
问题
相关检测标准研制、推广力度不够； 检测样本的容量； 检测结果的判读标准性
对b)的情况，再选用12个SSR位点进行分析，若新选用的12个SSR位点中 a) 与标准对照不一致位点数≥1，判定为异品种； b) 与标准对照不一致位点数＝0 ，判定为相同品种。
品种纯度检验结果按公式计算：
P（%）= பைடு நூலகம்中：
NT − N D × 100% NT
P—品种纯度； NT—为供检种子粒数（幼苗数、株数）； ND—为判定为异品种的种子粒数（幼苗 数、株数）。
种子真实性和品种纯度 检测技术简介
湖北省种子管理站 高明鑫
内容
种子真实性和品种纯度检测的现状 分子鉴定的基本原理及流程 现有的分子检测相关标准 分子鉴定存在的问题与展望
传统种子真实性及品种纯度检测方法
幼苗鉴定 籽粒形态鉴定 田间小区种植鉴定 同工酶电泳分析鉴定 贮藏蛋白质电泳分析鉴定
分子鉴定理论
真实性检测图片
示例8个标记中，B 与对照样品（A）的带型完全一致； C与对照样品（A）在3个位点上存在差异
1 2 3 掺入的不育系
掺入的恢复系
引物234对两优培九 (F1)人为掺杂种子纯度鉴定结果
M:：100bp标准分子量 1：不育系培矮64S 2：杂种F1两优培九 3：恢复系R9311.
聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
鉴定与判读 将受检样品的电泳谱带与标 准对照的电泳谱带比较，根据谱 带的一致性，鉴定受检样品的真 实性和品种纯度。
真实性
鉴定时，以多数个体具有即主带作为品种特征带进行统计分析： 先选择12个位点进行分析，在12个SSR位点中：
a) 与标准对照不一致位点数≥2，判定为异品种； b) 与标准对照不一致位点数＝1，判定为疑似品种； c) 与标准对照不一致位点数＝0，判定为相同品种。
优点 ：数量丰富 多个等位基因，信息含量高 呈孟德尔共显性遗传 操作简便、经济、重复性好 便于不同研究者交换使用
DNA提取及纯化
RAPD SCAR SSR SSR AFLP
PCR扩增
酶切
RFLP
DNA谱带
品种真实性和纯度鉴定
品种真实性和纯度的分子鉴定流程图
谱带示例
水稻F1 代杂交种具有双亲的互补带型