蓝莓花色苷提取与探究开题报告

pH2.5 pH2.5 7.5 6
A535
2、花色苷抗氧化性的测定
2.1 羟自由基清除能力的测定
反应体系中依次加入样品液1mL,浓度为 6mmol/LFeS04溶液2mL，浓度为6mmol/LH202溶 液2mL,将反应体系混合均匀放置l0min,再加入浓度为 6mmol/L水杨酸钠溶液2mL,静置30min后于510nm 波长下用蒸馏水调零,并测定吸光值A1;将上述体系中 的水杨酸钠溶液用相同体积的蒸馏水代替,其他操作相 同,测定吸光值A2;将上述体系中的样品溶液用相同体 积的蒸馏水代替,其他操作相同,测定吸光值A0。羟自 由基清除率(%) =[1-(A1-A2)/A0]*100%
实验操作方法与步骤
1、正交试验法确定最佳提取工艺
取 5g蓝莓果 ,以乙醇为提取溶剂依次对其进行溶剂浓度、料液比、 提取温度及pH的单因素试验。 正交试验如下：在相应的溶剂浓度、料液比、提取温度及pH下实验 后，以12000转、4℃离心10分钟。取1ml上清液，用Ph1.0缓冲液 0.2mol/L KCl-0.2mol/L HCl(25:67)定容至25ml容量瓶，通过示差 法计算，用吸光度A535表示花色苷的提取量, 根据吸光度大小确定优 化工艺条件。 然后以所得最适溶剂浓度、料液比、提取温度及料液比提取花色苷。 表格如下
表1+2
水平 1 2 3 试验号 乙醇浓度/% A 50 60 70 料液比 B 1：15 1：20 1：25 因素 温度C 25 40 50 Ph值 D 2 2.5 3
因素
1 2 3 4 5 6 7 8 9
A 1 2 3 2 1 3 3 1 2
B 1 1 1 2 2 2 3 3 3
C 1 2 3 1 2 3 1 2 3
2、花色苷抗氧化性的测定
2.3 DPPH自由基清除能力的测定
配制0.2mmol/LDPPH乙醇溶液,放在棕色试剂瓶中于 4°C保存,在试管中加入2mlDPPH乙 醇溶液及2mL样品溶液,混合均匀在室温避光放置30min, 于517nm波长下用无水乙醇调零,并测定吸光值A1;将 DPPH乙醇溶液用等体枳的无水乙醇代替,其他操作相同, 测定吸光值A2;将样品溶液用等体积无水乙醇溶液代替, 其他操作相同,测定吸光值 A0。DPPH 自由基清除率(%) =[l—(A1—A2)/A0]*100%
生物化学实验甲 自主设计实验与实践课题
蓝莓中花色苷的提取工艺 及其性质的研究
小组成员 专业班级 指导教师 钮冠华、周腾腾、蔡伟博、陈姝瑶 踩单车v 应生1301 ＿ 杨劲树 ＿
引言
蓝莓含有丰富的花色苷。
花色苷是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物, 有很强的抗 氧化活性, 具有促进视红素再合成、抗炎症、提高免疫力、抗心血 管疾病、抗衰老、抗癌等多种生理活性功能。 因此,基于蓝莓果中花色苷含量丰富, 以及花色苷具有较高的开发与 利用价值, 对蓝莓果中花色苷的提取工艺及其性质进行了研究。
D 1 2 3 1 3 2 2 3 1
表3
1 T/oC 蓝莓粉 末/g 纯乙醇 /ml HCl [pH] 7.5 pH2 7.5 12 pH2 8 17.5 9 4 25 7 2 5 40 1 10 pH3 10 12.5 pH3 12.5 10.5 pH3 4.5 14 pH2.5 6 15 pH2 10 8 3 6 50 9
3、纸层析及PH试纸的制作
3.2 PH试纸的制作
将27张1cm*5cm的滤纸浸泡在花色苷溶液中10s 迅速拿出滤纸用吹风机将其迅速吹干 配置PH为1~7的溶液，并取出七张自己制作的试纸在不 同PH溶液下显色，并记录颜色 剩下20张简易自助制作PH试纸
2、花色苷抗氧化性的测定
2.2 超氧自由基清除能力的测定
反应体系中依次加入浓度为50mmol/L Tris-HCl溶液 5.7mL,样品溶液0.2mL,浓度为6mmol/L邻苯三酚溶 液0.1mL,将混合物反应4rnin,滴入2滴HC1终止反应, 在320nm波长下测定吸光 值A1;将邻苯三酚用等体积的蒸馏水代替,其他操作相 同,测定吸光值A2;将样品溶液用等体积的蒸馏水代替， 其他操作相同,测定吸光值A0。超氧自由基清除率 (%)=[1-(A1-A2)/A0]*100%
实验目的和要求
1、用正交试验法确定蓝莓的最佳提取工艺
2、通过测定羟自由基、超氧自由、DPPH自由基、ABTS自由基
清除能力，来测定花色苷的抗氧化性。
3、制作pH试纸
实验器材与试剂
1、实验器材
恒温水浴箱、分光光度计、离心机
2、实验试剂
（1）50mmol/L Tris-HCl溶液 （2）6mmol/L邻苯三酚溶液 （3）0.2mmol/LDPPH乙醇溶液 （4）7.4mmol/ml ABTS储备液 （2.6mmol/ml过硫酸钾溶液 +ABTS甲醇溶液） （5）正丁醇 （6）乙酸 （7）2mol/L盐酸 （8）pH=12氢氧化钠 （9）甲醇 （10）无水乙醇 （11）pH=2盐酸 （12）0.2mol/L KCl-0.2mol/L HCl(25:67) （pH=1） （13）蓝莓粉末 （14）pH=3盐酸 （15）pH=2.5盐酸 （16）6mmol/LFeS04 （17）6mmol/LH202 （18）6mmol/L水杨酸钠溶液
2、花色苷抗氧化性的测定
2.4 ABTS自由基清除能力的测定
用2.6mmol/ml过硫酸钾溶液溶解ABTS甲醇溶液,配制成 7.4mmol/ml ABTS储备液,室温避光静置12~24h后4°C保 藏。现用时取1mL储备液用甲醇稀释54.7倍,在734nm吸光 值为0.700±0.020,甲醇调零。在试管中加入2.850mLABTS 测定液及0.150mL样品溶液,混合均匀在室温避光放置2h,于 734nm波长下用甲醇调零,并测定吸光值A1;将ABTS测定液 用等体枳的蒸馏水代替,其他操作相同,测定吸光值A2;将样 品溶液用等体积甲醇溶液代替,其他操作相同,测定吸光值A0。 ABTS自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]*100%
3、纸层析及PH源自文库纸的制作
3.1 纸层析
花色苷的分离常用新华 No。3或 WhatmanNo。3层析纸， 以水系溶液为展开剂 ，如酸化正丁醇水溶液 (BAW ：正丁 醇 一醋酸 一水 =4：l：5 v／v／v)。展开后，可 剪下色斑 ， 以酸化 甲(乙)醇洗涤 ，浓缩 ，即可得到样 品 。 苏红等人采用三次纸层析法得到甘蓝红色素 的主要花色苷 ： 矢车菊素 一3一双芥子酰槐二糖 一5 一 葡萄糖苷，三次的 展开剂分别为 BAW(正丁醇： 乙酸 ：水 =4：1：5 v／v／ v)，BAW(正丁醇 ：乙酸 ：水 = 4：1：5 v／v／v)，BH(正 丁醇 ：2mol／L盐 酸 =1：1 v／ v)，15×30cm新华 N0．3层析纸，上行法 。