(医疗药品)农药残留量测定法标准操作规程

序页/总页：1/7 ####制药有限公司GMP标准文件

目的：制定农药残留量测定法的检验标准，使检验有据可依。

范围：本公司药材农药残留量的测定。

责任人：质检中心负责人及检验员。

依据：《中国药典》2010年版一部。

内容：

1本法系用气相色谱法测定药材、饮片及制剂中部分有机氯、有机磷和拟除虫菊酯类农药，除另有规定外，按下列方法测定。

2有机氯类农药残留量测定

2.1仪器与用具：

2.1.1气相色谱仪带有63Ni-ECD电子捕获检测器，载气为高纯氮(纯度>99.9999%)，必须安装脱氧管(购自)。

2.1.2超声仪。

2.1.3离心机。

2.1.4旋转蒸馏发仪。

2.1.5色谱柱：SE－54或DB-1701弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)

2.1.6具塞刻度离心管00mI)，刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶100ml)，移液管等。

2.2试药与试液

2.1.1丙酮、石油醚(60~90℃)和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸馏馏装置重蒸馏馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。(有条件的实验室可使用进口的农残级的试剂)

2.1.2无水硫酸钠钠和氯化钠均为分析纯，硫酸钠为优级纯。

2.1.3农药对照品：六六六（BHC）[包括α-BHC，β-BHC，γ-BHC和δ-BHC四种异构体]，滴滴涕（DDT）[包括pp'-DDE，pp'-DDD，op'-DDT和pp'-DDT四种异构体]及五氯硝基苯(PB)，由中国计量科学研究院提供标示含量（浓度）的农药标准品，也可采用国际认可的农药标准品自行配制。

2.3色谱条件与系统适用性试验

2.3.1SE-54色谱柱：进样口温度：230℃。检测器温度：300℃，不分流进样。程序升温：

初始温度100℃，每分钟10℃升至220℃，再以每分钟8℃升至250℃，保持10min。

2.3.2DB-1701色谱柱：进样口温度：220℃，检测器温度：300℃，不分流进样。程序升温：初始温度140℃，保持lmin，以每分钟10℃升至210℃，再以每分钟20℃升至260℃，保持4min。

按上述条件操作，理论板数以α－BHC峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

2.4操作方法

2.4.1对照品储备液的制备精密称取六六六(BHC)[α-BHC，β-BHC，γ-BHC和δ-BHC]、滴滴涕（DDT)[PP'-DDE，PP'-DDD，OP'-DDT，PP'-DDT]及五氯硝基苯(PB)

农药对照品溶液适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每1ml含4~5μg的溶液。

2.4.2制备精密量取上述各对照品储备液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60~90℃)稀释至刻度，摇匀。

2.4.3混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚(60~90℃)制成每1L分别含0μg，1μg，5μg，10μg，50μg，100μg和250μg的溶液。

2.5.4供试品溶液制备

2.5.4.1方法1（药材）取供试品于60℃干燥4h，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15min，直至氯化铀完全溶解，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使水相与有机相完全分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠钠的100ml具塞锥形瓶中，脱水4h，精密量取35ml，置100ml旋转蒸馏发瓶中，40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60~90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60~90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60~90℃)精密稀释至5ml，小心加入硫酸钠1ml，振摇1min，离心(3000r/min)10min，精密量取上清液2ml，置刻度浓缩瓶中，连接旋转蒸馏发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。同法制备空白样品。

2.5.4.2方法2（制剂）取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量(相当于药材2g)，以下按方法1，制备供试品溶液。

2.6测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。

2.7注意事项

2.7.1本试验所用器皿应严格清洗(不能残存卤素离子)。

2.7.2供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。

2.7.3为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用予以确认。

2.7.4如样品中其它成分有干扰，可适当改变色谱条件也但需进行空白验证。

3有机磷类农药残留量测定

3.1仪器与用具

3.1.1气相色谱仪，带有氮磷检测器(NPD)，载气为高纯氮(纯度>99.9999%)。

3.1.2超声仪。

3.1.3旋转蒸馏发仪。

3.1.4多功能真空样品处理器。

3.1.5活性炭小柱120~400目，石墨碳填料0.25g，内径0.9cm，3ml)。

3.1.6氮吹仪(OrganomationAssociates，Inc.，N-EVAPTM112nitrogenevaporator)。

3.1.7色谱柱：DB-17MS或HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)或类似极性的毛细管柱。

3.1.8具塞锥形瓶、250ml平底烧瓶、棕色量瓶、移液管等。

3.2试药与试液

3.2.1无水硫酸钠为分析纯。

3.2.2乙酸乙醋、正己烷(农残级或分析纯试剂经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求)。