实验十 植株中铁的测定

实验十植株中铁含量的测定

一、实验目的

1、掌握分光光度计的使用方法和测定原理。

2、掌握标准曲线的绘制方法。

二、实验原理

在pH2-9的溶液中，二价铁离子能与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm有最大吸收，其吸光度与铁的含量成正比，故可比色测定。反应式如下：

pH＜2时反应进行较慢，而且酸度过低又会引起二价铁离子水解，故反应通常在pH＝5左右的微酸条件下进行。此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+。

三、仪器和试剂

1、仪器：分光光度计

2、试剂

(1) 10％盐酸羟胺溶液（新配）

(2) 0.12％邻二氮菲水溶液：避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用

(3) 10％醋酸钠溶液

（4）铁标准贮备液：1000μg /mL。准确称取1.000g纯金属铁溶于1+1盐酸50mL 中，用水稀释定容至1000mL，或准确称取4.979g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)溶于l00m L 水中，加入5mL浓硫酸微热溶解，用水定容至l000mL，或准确称取7.020g 硫酸亚

铁铵((NH4)

2Fe(SO

4

)

2

·6H

2

O，溶于（1+1）硫酸50mL 中，转移至1000mL，摇匀，

得标准贮备液。

（5）铁标准工作液：10μg /mL。吸取铁标准贮备液10mL，定容至1000mL。

四、实验步骤

1、样品处理：称取均匀植物样品10.0g，干法或湿法消化后，加入2mL1+1盐酸，在水浴上蒸干，再加入5mL蒸馏水，加热煮沸后移入100mL容量瓶中，以水定容，混匀。

2、标准曲线绘制：吸取10μg／mL铁标准溶液(标准溶液吸取量可根据样品含铁量高低来确定)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于25mL容量瓶中，加入1mol／L盐酸溶液1mL，10％盐酸羟胺1m1，0.12％邻二氮菲lmL，然后加入10％醋酸钠5mL，用水稀释至刻度，摇匀，以不加铁的试剂空白溶液作参比液，在510nm 波长处，用1cm比色皿测吸光度，绘制标准曲线。

3、样品测定：准确吸取样液5-10mL (视含铁量高低而定)于25mL容量瓶中，以下按标准曲线绘制操作，测定吸光度，在标准曲线上查出相对应的铁含量(μg)。

五、结果计算

m0

X= --------------×100

V

1

m×------

V

2

式中：X---样品中铁的含量，ｕg/100g；

m0---从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，ｕg；

---测定用样液体积，mL；

V

1

V

---样液定容总体积，mL；

2

m---样品质量，g。