酪氨酸酚裂解酶的固定化与转化条件的优化
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微生物学杂志 ２０１９年 ２月第 ３９卷 第 １期 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹＦｅｂ．２０１９Ｖｏｌ．３９Ｎｏ．１
酪氨酸酚裂解酶的固定化与转化条件的优化
马文静１，２，３，周景文２，３，徐国强１，２，３
（１．江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏 无锡 ２１４１２２；２．江南大学 工业生物技术教育部重点实验室， 江苏 无锡 ２１４１２２；３．江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 ２１４１２２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１ｃａｒｒｙｉｎｇｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＥｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａｗａｓ ｕｓｅｄａｓａｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇＥ．ｃｏｌｉ．Ｕｓｉｎｇｓｏｄｉｕｍａｌｇｉ ｎａｔｅａｓｃａｒｒｉｅｒ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｇｅｌａｔｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｇｅｌａｔｉｎａｎｄａｄｊｕｖａｎｔ（ｓｉｌｉｃｏｎｄｉｏｘｉｄｅ，ｄｉａｔｏｍａ ｃｅｏｕｓｅａｒｔｈａｎｄｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）ｏｎＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｄｏｐｔｉｎｇｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘ ｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｅｌａｔｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｔｈｅｐｈｅｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅａｎｄｏｔｈｅｒｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｔｈｅｎｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｅｘｐｌｏｒｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｓｔｏｐｔｉｍａｌＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ４％ ｓｏｄｉｕｍａｌｇｉｎａｔｅａｎｄ ６％ ｇｅｌａｔｉｎａｓｍｉｘｅｄｃａｒｒｉｅｒ，０．０８ｍｏｌ／Ｌｐｈｅｎｏｌ，８ｈｏｕｒｓｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ａｎｄ０．６％ ｃａｌｃｉｕｍｃａｒｂｏｎａｔｅａｄｄｅｄｔｏｔｈｅ ｃａｒｒｉｅｒ，ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｏｕｔｐｕｔｏｆＬｔｙｒｏｓｉｎｅｗａｓａｔ６４．５ｇ／Ｌａｆｔｅｒ９ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ ４５１．３％ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｂｅｆｏｒｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｌｔｙｒｏｓｉｎｅ；ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅ；ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅＰｈｅｎｏｌＬｙａｓｅ
ＭＡＷｅｎｊｉｎｇ１，２，３，ＺＨＯＵＪｉｎｇｗｅｎ２，３，ＸＵＧｕｏｑｉａｎｇ１，２，３
（１．Ｎａｔｌ．Ｅｎｇｉｎ．Ｌａｂ．ｆｏｒＣｅｒｅａｌＦｅｒｍｅｎｔ′ｎ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２．ＫｅｙＬａｂ．ｏｆＩｎｄｕｓｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，Ｍｉｎｉｓｔ．ｏｆＥｄｕｃ．， ３．Ｓｃｈｌ．ｏｆＢｉｏｔｅｃｈ．，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉ．，Ｗｕｘｉ２１４１２２）
摘 要 以欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）来源的酪氨酸酚裂解酶的重组大肠埃希菌 ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１为研 究对象，研究固定化大肠埃希菌生产 Ｌ酪氨酸的条件。以海藻酸钠为载体，采用单因素实验分别考察了载体 材料、明胶浓度、反应时间、苯酚浓度和辅助剂（二氧化硅、硅藻土和碳酸钙）等因素对 Ｌ酪氨酸生产的影响， 发现明胶浓度、反应时间、苯酚和碳酸钙等因素的影响较为显著，进而通过正交实验探索最优条件。结果表 明，生产 Ｌ酪氨酸的最优条件：载体为 ４％海藻酸钠与 ６％明胶的混合载体，苯酚浓度 ０．０８ｍｏｌ／Ｌ，反应时间 ８ ｈ，于载体中添加 ０６％碳酸钙。此条件下，连续反应 ９次后 Ｌ酪氨酸的产量达到 ６４．５ｇ／Ｌ，比优化前提高了 ４５１．３％。 关键词 Ｌ酪氨酸；酪氨酸酚裂解酶；固定化技术；海藻酸钠 中图分类号 Ｑ８１４ 文献标识码 Ａ 文章编号 １００５－７０２１（２０１９）０１－００２６－０６ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－７０２１．２０１９．０１．００４
１期 马文静等：酪氨酸酚裂解酶的固定化与转化条件的优化
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Байду номын сангаас
的传递有重要关系［３］。它常被用来治疗忧郁症， 甲状腺机能降低，也有助于细胞长久保持年轻化， 提高身体免疫力。随着基因工程技术和酶工程技 术的发展，生物合成 Ｌ酪氨酸将具有更加广阔的 应用前景。固定化细胞是将具有生理功能的微生 物细胞包裹在水不容的载体里，使其可循环利用， 不断反应 发 酵 的 一 种 技 术，广 泛 应 用 于 食 品、医 学、制药、化学分析、环境保护、能源开发等多种领 域［４５］。１９８９年，赵景联［６］通过固 定 化 大 肠 埃 希 菌来生产 γ氨基丁酸，可以使 ９５％的谷氨酸被转 化成 γ氨基丁酸，也有人以聚乙烯醇作为固定化 载体生产 α淀粉酶［７］，还有通过固定化来生产乳 酸［８］，用 ２％的海藻酸钠固定乳杆菌，可以让固定 化球保持 １５０ｈ的完整性，没有破碎，使 Ｌ乳酸的 产量达到 ４５ｇ／Ｌ。本研究采用固定化细胞的方 式，用全细胞酶法技术，充分利用酶活以获得高产 量的 Ｌ酪氨酸。常用的固定化方法主要有吸附 法、共价法、交 联 法 和 包 埋 法 等 ［９１０］。 Ｌ酪 氨 酸 的 制备方法有 ３种：一种是从含有蛋白质的物质（酪 蛋白和玉米等）水解液中提取获得；一种是以葡萄 糖为原料，以短杆菌突变育种发酵生产获得；最后 一种是以苯酚、丙酮酸和氨为底物利用酪氨酸酚 裂解酶进行酶法催化生产。而最早对于酶法合成 Ｌ酪氨酸由 Ｙａｍａｄａ和 Ｋｕｍａｇａｉ进行 了研究［１１］。 酪氨酸酚裂解酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅ，ＴＰＬ），也称 β酪氨酸酶，是 依 赖 于 磷 酸 吡 哆 醛 （ＰＬＰ）的 多 功 能酶，该酶 能 够 催 化 一 系 列 的 反 应。 ＴＰＬ在 生 物 体外可将丙酮酸、氨和苯酚转化产生 Ｌ酪氨酸，在 生物体内可将 Ｌ酪氨酸催化生成氨、丙酮酸和苯 酚。该酶主要分布于肠细菌内，也存在于一些嗜 热菌和节肢动物体中，其中酶活较高的微生物主 要是弗氏柠檬酸菌 （Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉｉ）、草 生 欧 文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）以及嗜热菌（Ｓｙｍｂｉｏｂａｃ ｔｅｒｉｕｍｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）等［１２１３］。关于酶法合成 Ｌ酪 氨酸的 研 究 已 有 较 多 报 道［１４１５］，另 外，常 俊 俊 等［１６１７］利用 ＴＰＬ全细胞催化丙酮酸或者 Ｌ丝氨 酸合成酪氨酸，以 ０．１ｍｏｌ／Ｌ丙酮酸和 ０．１ｍｏｌ／Ｌ 苯酚为底物，反应 ２４ｈ后，酪氨酸产量为 １６．１７ｇ／ Ｌ，转化率达 ７８．６％。本研究考虑到固定化细胞 具有可循环利用、易于制备和分离等优势，将固定 化细胞技术与酶法生产 Ｌ��
Ｌ酪氨酸是 ２０种氨基酸中的一种，对人和动 物的生长发育及新陈代谢起着重要作用，常作为 营养增补剂、苯丙酮尿症患者的必需氨基酸及以
多巴、对羟基苯乙烯等医学化工产品的制备原料， 广泛应用于食品、医药和日化等领域［１２］。酪氨酸 也是构成甲状腺素的重要成分，酪氨酸与神经元
基金项目：国家自然科学基金重大项目（２１３９０２０４） 作者简介：马文静 女，硕士研究生。研究方向为发酵工程。Ｅｍａｉｌ：６０３５４４０９８＠ｑｑ．ｃｏｍ 通讯作者。男，博士，副教授，硕士生导师。研究方向为发酵工程。Ｔｅｌ：０５１０８５３２８７６１，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｇｕｏｑｉａｎｇ＠ｊｉａｎｇｎａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ 收稿日期：２０１８０４２７
微生物学杂志 ２０１９年 ２月第 ３９卷 第 １期 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹＦｅｂ．２０１９Ｖｏｌ．３９Ｎｏ．１
酪氨酸酚裂解酶的固定化与转化条件的优化
马文静１，２，３，周景文２，３，徐国强１，２，３
（１．江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏 无锡 ２１４１２２；２．江南大学 工业生物技术教育部重点实验室， 江苏 无锡 ２１４１２２；３．江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 ２１４１２２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１ｃａｒｒｙｉｎｇｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＥｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａｗａｓ ｕｓｅｄａｓａｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇＥ．ｃｏｌｉ．Ｕｓｉｎｇｓｏｄｉｕｍａｌｇｉ ｎａｔｅａｓｃａｒｒｉｅｒ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｇｅｌａｔｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｇｅｌａｔｉｎａｎｄａｄｊｕｖａｎｔ（ｓｉｌｉｃｏｎｄｉｏｘｉｄｅ，ｄｉａｔｏｍａ ｃｅｏｕｓｅａｒｔｈａｎｄｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）ｏｎＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｄｏｐｔｉｎｇｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘ ｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｅｌａｔｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｔｈｅｐｈｅｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅａｎｄｏｔｈｅｒｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｔｈｅｎｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｅｘｐｌｏｒｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｓｔｏｐｔｉｍａｌＬｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ４％ ｓｏｄｉｕｍａｌｇｉｎａｔｅａｎｄ ６％ ｇｅｌａｔｉｎａｓｍｉｘｅｄｃａｒｒｉｅｒ，０．０８ｍｏｌ／Ｌｐｈｅｎｏｌ，８ｈｏｕｒｓｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ａｎｄ０．６％ ｃａｌｃｉｕｍｃａｒｂｏｎａｔｅａｄｄｅｄｔｏｔｈｅ ｃａｒｒｉｅｒ，ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｏｕｔｐｕｔｏｆＬｔｙｒｏｓｉｎｅｗａｓａｔ６４．５ｇ／Ｌａｆｔｅｒ９ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ ４５１．３％ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｂｅｆｏｒｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｌｔｙｒｏｓｉｎｅ；ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅ；ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅＰｈｅｎｏｌＬｙａｓｅ
ＭＡＷｅｎｊｉｎｇ１，２，３，ＺＨＯＵＪｉｎｇｗｅｎ２，３，ＸＵＧｕｏｑｉａｎｇ１，２，３
（１．Ｎａｔｌ．Ｅｎｇｉｎ．Ｌａｂ．ｆｏｒＣｅｒｅａｌＦｅｒｍｅｎｔ′ｎ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２．ＫｅｙＬａｂ．ｏｆＩｎｄｕｓｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，Ｍｉｎｉｓｔ．ｏｆＥｄｕｃ．， ３．Ｓｃｈｌ．ｏｆＢｉｏｔｅｃｈ．，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉ．，Ｗｕｘｉ２１４１２２）
摘 要 以欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）来源的酪氨酸酚裂解酶的重组大肠埃希菌 ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１为研 究对象，研究固定化大肠埃希菌生产 Ｌ酪氨酸的条件。以海藻酸钠为载体，采用单因素实验分别考察了载体 材料、明胶浓度、反应时间、苯酚浓度和辅助剂（二氧化硅、硅藻土和碳酸钙）等因素对 Ｌ酪氨酸生产的影响， 发现明胶浓度、反应时间、苯酚和碳酸钙等因素的影响较为显著，进而通过正交实验探索最优条件。结果表 明，生产 Ｌ酪氨酸的最优条件：载体为 ４％海藻酸钠与 ６％明胶的混合载体，苯酚浓度 ０．０８ｍｏｌ／Ｌ，反应时间 ８ ｈ，于载体中添加 ０６％碳酸钙。此条件下，连续反应 ９次后 Ｌ酪氨酸的产量达到 ６４．５ｇ／Ｌ，比优化前提高了 ４５１．３％。 关键词 Ｌ酪氨酸；酪氨酸酚裂解酶；固定化技术；海藻酸钠 中图分类号 Ｑ８１４ 文献标识码 Ａ 文章编号 １００５－７０２１（２０１９）０１－００２６－０６ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－７０２１．２０１９．０１．００４
１期 马文静等：酪氨酸酚裂解酶的固定化与转化条件的优化
２７
Байду номын сангаас
的传递有重要关系［３］。它常被用来治疗忧郁症， 甲状腺机能降低，也有助于细胞长久保持年轻化， 提高身体免疫力。随着基因工程技术和酶工程技 术的发展，生物合成 Ｌ酪氨酸将具有更加广阔的 应用前景。固定化细胞是将具有生理功能的微生 物细胞包裹在水不容的载体里，使其可循环利用， 不断反应 发 酵 的 一 种 技 术，广 泛 应 用 于 食 品、医 学、制药、化学分析、环境保护、能源开发等多种领 域［４５］。１９８９年，赵景联［６］通过固 定 化 大 肠 埃 希 菌来生产 γ氨基丁酸，可以使 ９５％的谷氨酸被转 化成 γ氨基丁酸，也有人以聚乙烯醇作为固定化 载体生产 α淀粉酶［７］，还有通过固定化来生产乳 酸［８］，用 ２％的海藻酸钠固定乳杆菌，可以让固定 化球保持 １５０ｈ的完整性，没有破碎，使 Ｌ乳酸的 产量达到 ４５ｇ／Ｌ。本研究采用固定化细胞的方 式，用全细胞酶法技术，充分利用酶活以获得高产 量的 Ｌ酪氨酸。常用的固定化方法主要有吸附 法、共价法、交 联 法 和 包 埋 法 等 ［９１０］。 Ｌ酪 氨 酸 的 制备方法有 ３种：一种是从含有蛋白质的物质（酪 蛋白和玉米等）水解液中提取获得；一种是以葡萄 糖为原料，以短杆菌突变育种发酵生产获得；最后 一种是以苯酚、丙酮酸和氨为底物利用酪氨酸酚 裂解酶进行酶法催化生产。而最早对于酶法合成 Ｌ酪氨酸由 Ｙａｍａｄａ和 Ｋｕｍａｇａｉ进行 了研究［１１］。 酪氨酸酚裂解酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｅｎｏｌｌｙａｓｅ，ＴＰＬ），也称 β酪氨酸酶，是 依 赖 于 磷 酸 吡 哆 醛 （ＰＬＰ）的 多 功 能酶，该酶 能 够 催 化 一 系 列 的 反 应。 ＴＰＬ在 生 物 体外可将丙酮酸、氨和苯酚转化产生 Ｌ酪氨酸，在 生物体内可将 Ｌ酪氨酸催化生成氨、丙酮酸和苯 酚。该酶主要分布于肠细菌内，也存在于一些嗜 热菌和节肢动物体中，其中酶活较高的微生物主 要是弗氏柠檬酸菌 （Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉｉ）、草 生 欧 文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｈｅｒｂｉｃｏｌａ）以及嗜热菌（Ｓｙｍｂｉｏｂａｃ ｔｅｒｉｕｍｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）等［１２１３］。关于酶法合成 Ｌ酪 氨酸的 研 究 已 有 较 多 报 道［１４１５］，另 外，常 俊 俊 等［１６１７］利用 ＴＰＬ全细胞催化丙酮酸或者 Ｌ丝氨 酸合成酪氨酸，以 ０．１ｍｏｌ／Ｌ丙酮酸和 ０．１ｍｏｌ／Ｌ 苯酚为底物，反应 ２４ｈ后，酪氨酸产量为 １６．１７ｇ／ Ｌ，转化率达 ７８．６％。本研究考虑到固定化细胞 具有可循环利用、易于制备和分离等优势，将固定 化细胞技术与酶法生产 Ｌ��
Ｌ酪氨酸是 ２０种氨基酸中的一种，对人和动 物的生长发育及新陈代谢起着重要作用，常作为 营养增补剂、苯丙酮尿症患者的必需氨基酸及以
多巴、对羟基苯乙烯等医学化工产品的制备原料， 广泛应用于食品、医药和日化等领域［１２］。酪氨酸 也是构成甲状腺素的重要成分，酪氨酸与神经元
基金项目：国家自然科学基金重大项目（２１３９０２０４） 作者简介：马文静 女，硕士研究生。研究方向为发酵工程。Ｅｍａｉｌ：６０３５４４０９８＠ｑｑ．ｃｏｍ 通讯作者。男，博士，副教授，硕士生导师。研究方向为发酵工程。Ｔｅｌ：０５１０８５３２８７６１，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｇｕｏｑｉａｎｇ＠ｊｉａｎｇｎａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ 收稿日期：２０１８０４２７