水稻组培及农杆菌侵染的具体注意事项

水稻愈伤组织培养与植株再生(2) (2007-05-14 15:02:48)
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二、水稻愈伤组织培养
（一）实验室的建立
组织培养的实验室建立可以按照以下的草图进行规划，图例可以按照表1：
图2.植物生物技术实验室平面设计图
4.水稻愈伤组织的分化
挑选生长良好、结构致密的愈伤组织，先转到分化培养基上，26℃±2℃黑暗条件下培养2周。

然后转至26℃±2℃光照条件下培养，光强为400μmol/m2·s,每日光照16h，培养30～50 d，诱导不定芽，将产生绿芽的组织转至以1/2MS为基本培养基的无激素的壮苗培养基中，26℃±2℃光照条件下培养，使其生根长成完整植株[12]。

三、讨论
水稻胚性愈伤的诱导是水稻遗传转化中的重要环节，胚性愈伤的状态直接影响着遗传转化频率，所以提高良好生长状态的胚性愈伤的数量是提高转化频率的关键[13]。

为了提高水稻愈伤的出苗率，有采用干燥处理，辐射处理，添加铜[14-15]、银元素，添加脯氨酸，添加MET(多效唑)和添加活性碳等方法。

[16]
理论上愈伤组织是可以无限制继代，但愈伤组织继代次数增加，形态发生能力逐渐丧失。

原因是遗传因素即继代培养中通常出现染色体紊乱。

水稻成熟胚愈伤组织的诱导和再生是组织培养中的两个关键问题，它们涉及到外植体的脱分化过程和愈伤组织的再分化过程[17]。

影响水稻胚性愈伤组织形成和植株再生能力的因素包括基因型、外源激素、渗透压、外植体来源、固化剂、培养基其它成份以及温度、光周期和继代时间等多个方面，其中材料的基因型和外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素[18]。

植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。

光照是离体培养中比较复杂的调节因子,光照时间,强度以及光质对器官分化均有影响。

因为光照容易引起愈伤组织的老化坏死,所以对后续实验有很大的影响[19]。

认为除选择了合适的培养条件外，也与我们使用的是无菌苗作材料很有关系。

因为通过无菌苗的培养，可以提高烟草细胞对离体培养环境的适应性，实际上它相当于植物组织和细胞培养过程中材料的预处理，预处理能增进细胞活力，从而提高存活率。

[20]
四、参考文献
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