复方板蓝根颗粒化学成分的质谱研究_刘舒

182[ M + H - 3H 2O - CH2O ] +
337
319[ M + H - H 2O ] + , 301 [ M + H - 2H2 O ] + ,
257[ M + H - 3H 2O - CO 2 ] +
278
260[ M + H - H 2O ] + , 242 [ M + H - 2H2 O ] + ,
194[ M + H - 3H 2O - CH2O ] +
130
113[ M + H - NH 3 ] + , 84 [ M + H - SCH 2 ] + , 70 ( [M + H - SC2H4 ] + )
118
72[ M + H - H COOH ] +
180
162[ M + H - H 2O ] + , 144[ M + H - 2H 2O ] + ,
F ig. 1 Fu ll scan electrospry positive( A) and negative( B) ion m ass sp ectra of water ex trac t of C ompound Indigow oad R oot
N o. 6
刘 舒等: 复方板蓝根颗粒化学成分的质谱 研究
电喷雾质谱 ( E lectrospray m ass spectrom etry, ESI) 作为一种软电离质谱技术, 由于具有样品处理简 单、分析速度快、能对混合物进行直接分析且灵敏度高及实验重复性好等特点, 适宜于中药材有效成 分的鉴定 [ 4~ 7] . 本文采用电喷雾质谱技术对复方板蓝根颗粒经系统溶剂萃取后的 95% 醇提和水提部位 的化学成分进行了分析, 为探讨该部位免疫增强作用的药效物质基础提供了科学依据.
365
185[ M + N a- glc- H 2O ] + , 203[ M + N a- g lc] +
381
201[ M + K - g lc- H 2O ] + , 219 [M + K - glc] +
266
248[ M + H - H 2O ] + , 230 [ M + H - 2H2 O ] + ,
84[ M + H - 2H 2O - C2H 4O 2 ] +
342
324[ M + H - H 2O ] + , 306 [ M + H - 2H2 O ] + ,
246[ M + H - 2H 2O - C2H 4O 2 ] + , 180[ M + H - glc] + ,
162[ M + H - H 2O - g lc] + 133 115[ M - H - H 2O ] - , 71[ M - H - H 2O - CO2 ] -
乙醇为食用乙醇 ( 吉林市白酒厂 ) ; 蒸馏水为实验室自制. 葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、山梨糖、葡萄糖醛酸和蔗糖购自上海肯强仪器有限公司; 板蓝根
和大青叶药材均产自河北省安国市, 购于北京同仁堂长春药店, 经长春中医药大学药学院王淑敏教授 鉴定. 1. 2 样品制备
按照 中华人民共和国卫生部药品标准 中规定的方法制备复方板蓝根颗粒浸膏: 称取板蓝根 600 g, 大青叶 900 g, 加水煎煮 2次, 每次 1 h, 过滤, 合并滤液, 浓缩至适量, 加入 3倍量乙醇, 搅匀, 静 置 24 h, 过滤, 减压浓缩至稠膏状, 加入乙酸乙酯萃取, 减压浓缩并干燥, 得到复方板蓝根颗粒乙酸乙 酯提取物; 萃取后的部分再用正丁醇萃取, 上层浓缩得到复方板蓝根颗粒正丁醇提取物; 下层浓缩干 燥成膏状, 加入 95% ( 体积分数 ) 乙醇溶解, 混悬液减 压抽滤, 滤液经浓缩 干燥即为 95% 醇 提部位
根颗粒经溶剂萃取后的 95% (体积分数 )醇提和水提部位的化学成分进行 了系统研究, 鉴定出多 种氨基酸成
分、糖及其衍生物、有机酸、氨基酸和单糖的梅拉德反应初级产物以及含硫化合物表告依 春. 该 方法灵敏快
速, 适宜于中药提取物的化学成分分析.
关键词 复方板蓝根; 化学成分; 电喷雾多级串联质谱; 傅里叶变换离子回旋共振质 谱
中图分类号 O 657
文献标识码 A
文章编号 0251 0790( 2010) 06 1137 06
复方板蓝根颗粒原方是 中华人民共和国卫生部药品标准 所收载的中药成方方剂, 由板蓝根和大 青叶两味中药材组成, 具有清热解毒及凉血的功效, 可用于瘟病发热、出斑、风热感冒、咽喉肿烂、流 行性乙型脑炎、肝炎和腮腺炎的治疗 [ 1] . 经系统溶剂萃取后, 95% 醇提和水提部位具有很强的免疫增 强作用 [ 2, 3] , 对其化学成分的确定有利于进一步了解其作用机理, 为其质量控制提供了一定的理论依 据.
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Tab le 1 E SIM Sn data in the positive and negative ion mode of w ater and e thanol extract of Com pound Ind igowoad R oot G ranu le
m /z( + ) m / z( - )
分析柱为氨基柱 ( 15 mm ∀ 4 6 mm, 5 m ) , 大连依利特公司, 柱温 25 ! ; 流动相为乙腈 /水 (体积 比 80#20). 蒸发光检测器 ( ELSD) 参数: 漂移管温度 100 ! , N2 气流速 2 5 L /m in.
2 结果与讨论
2. 1 质谱分析 2. 1. 1 水提部位 ( ff4)化学成分的电喷雾质谱研究 图 1( A) 和 ( B) 分别为水提部位正、负离子扫描模 式下的电喷雾质谱. 由图 1( A) 可见, m /z 104离子在 ES IM Sn中产生 m /z 86和 m /z 60离子, 分别对应 于 [ M + H - H 2O ] + 和 [ M + H - CO2 ] + , 准分子离子峰和碎片离子信息表明, 该化合物含有羧基和氮原 子, 根据文献 [ 8, 9] 报道结果, 推定其为 氨基丁酸 ( GABA ). m /z 116 离子在 ES IM Sn中产生 [ M + H - HCOOH ] + ( m /z 70) [ 10 ] , m /z 175离子在 ESIM Sn 中产生 [ M + H - H2 O ] + ( m /z 157) , [ M + H H2 O - NH3 ] + ( m /z 140)和 [ M + H - HCOOH - NH 3 ] + ( m /z 112) , 与脯氨酸和精氨酸标准品的碎裂规 律相同, 推定其为脯氨酸 ( P ro)和精氨酸 ( A rg) . m /z 365和 m /z 381离子质量数相差 m /z 16, 应分别为 二糖的 [ M + N a] + 和 [ M + K ] + 峰 , [ 11] 其中 m /z 365裂解生成碎片 m /z 185[ M + N a g lc- H2 O ] + 和 m /z 203[ M + N a- g lc] + , m /z 381裂解生成碎片 m /z 201[ M + K - g lc- H2O ] + 和 m /z 219[ M + K - g lc] + , 与文献 [ 12, 13] 报道的碎片离子相同, 推定其为蔗糖. m /z 337离子所对应的化合物已有相关报道 [ 14] , 但其元素组 成和 在 正离 子 模式 下 的碎 裂 规律 与本 实 验并 不 相同, 文 献 [ 14] 报 道其 元 素组 成 为 C21H 22N 2 O2, 正谱中的主要碎片离子峰为 m /z 320, 303 和 207, 所以两者并不是同一种化合物. m /z 266离子所对应的化合物为首次在复方板蓝根中发现, m /z 337和 m /z 266 离子在 ESIM S2和 ESIM S3 中的碎裂方式相同, 均是先失去一分子水, 在 M S4中 m /z 266失去一分子水和甲醛, m /z 337失去一分 子 H2 O 和 CO 2, 结合高分辨质谱数据 (表 1) 推断它们为氨基酸和单糖的初级梅拉德反应产物 [ 15, 16] , 分 别对应 氨基丁酸和精氨酸与葡萄糖和果糖的反应产物 ( 结构见 Schem e 1) . m /z 130离子在 ESIM Sn 中产生 m /z 113( [M + H - NH3 ] + ) , m /z 84( [ M + H - SCH 2 ] + ) 和 m /z 70( [ M + H - SC2H 4 ] + ) 离子, 根据其碎片信息推定为表告依春 [ 12] . 在负谱 [ 图 1 ( B ) ] 中, m /z 133离子在 ESIM S2中产生 m /z 115 [ M - H - H2O ] - 离子, 与文献 [ 17]报道的碎片信息一致, 推定其为苹果酸的 [ M - H ] - 峰. 根据高分 辨质谱数据推测, m /z 195离子为葡萄糖醛酸的 [ M - H ] - 峰, 其在 ESIM Sn中产生 m /z 177( [ M - H H2 O ] + , m /z 159 ( [ M - H - 2H2 O ] - ), m /z 129( [ M - H - 2H 2 O - CH 2 O ] - ) 和 m /z 99 ( [ M - H 2H2O - 2CH2O ] - ), 碎片信息与推测相符. m /z 191离子在 ESIM S /MS中产生 m /z 173和 m /z 111的碎
1 实验部分
1. 1 仪器、试剂和药材 LCQTM电喷雾离子阱质谱仪 ( F innigan, U SA ) ; IonSpec7. 0T 傅里叶变换离子回旋共振质谱仪 ( 美国
Ionspec公司 ) , Z Spray电喷雾离子源; A lltech ELSD2000型液相色谱仪. 甲醇和乙腈为色谱纯试剂 ( 美国 F isher 公司 ) ; 乙酸乙酯和正丁醇均为分析纯试剂 ( 北京化工厂 );
高等学校化学学报
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( ff3) , 沉淀部分经浓缩干燥即为水提部位 ( ff4) . 称取 ff3和 ff4各 0 1 g, 分别置于 10 mL 容量瓶中, 加 少量水溶解后加入甲醇定容至刻度, 摇匀, 过 0 45 m 滤膜, 取续滤液, 即得所需样品. 1. 3 质谱条件
采用正、负离子扫描模式, 扫描范围 m /z 50~ 1000. 喷雾电压 4 5 kV, 壳气 ( N2气 )流速 50 L /m in, 金属加热毛细管温度 200 ! , 毛细管电压 30 V, 进样流速为 5 L /m in. 1. 4 液相条件
( 1. 中国科学院长春应用化 学研究所, 长春质谱中心, 长春 130022; 2. 吉林大学药学院, 长春 130021; 3. 中国科学院研究生院, 北京 100049)
摘要 利用电喷雾多级 串联质谱 ( ESI M Sn )和傅里叶变换离子回旋共振 质谱 ( FT ICR M S) 技术, 对复方板蓝
m / z, ES IM Sn
104
86[ M + H - H 2O ] + , 60[ M + H - CO 2 ] +
116
70[ M + H - H COOH ] +
Hale Waihona Puke 175157[ M + H - H 2O ] + , 140 [ M + H - H2 O - NH3 ] + ,
112[ M + H - H COOH - NH3 ] +
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2010年 6 月
高等学校化学学报
CHEM ICAL JOURNA L OF CH INESE UN IVER SIT IE S
No. 6
1137 ~ 1142
复方板蓝根颗粒化学成分的质谱研究
刘 舒 1, 3, 闫 峻 2, 李惠琳 1, 宋凤瑞 1, 刘忠英2, 刘志强 1, 刘淑莹1
收稿日期: 2009 10 26. 基金项目: 国家科技支撑计划项目 ( 批准号: 2006BA I08B03 02) 资助. 联系人简介: 刘志强, 男, 博士, 研究员, 博士生导师, 主要从事天然药物化学和有机质谱学研究. E m ai:l liu zq@ ciac. j.l cn
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