实验7-大豆分离蛋白的制备

综合实验7 大豆分离蛋白的制备

1. 实验目的

蛋白质是人们日常生活中必需的重要营养物质，通常可以从动物的乳汁或天然植物(如花生、大豆等)中提取。大豆（黄豆）是目前植物中蛋白质含量最为丰富的一种，蛋白质含量高达40 %以上，大豆蛋白含有人体必需的8种氨基酸，还含有丰富的不饱和脂肪酸、钙、磷、铁、膳食纤维等，不含胆固醇，具有很高的营养价值。蛋白的提取方法有许多种，例如: 碱提酸沉、酶提酸沉、超声酸沉、酶解提取、膜分离法等。

本实验采用超声波辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白，通过粉碎、正己烷低温浸提脱脂、纤维素酶酶解增溶等预处理方法，采用超声波辅助“碱提酸沉法”使蛋白质在等电点状态下析出。通过本实验，掌握超声波、酶解、离心分离、浸提、等电点析出等蛋白质分离手段，了解植物蛋白制备的常用技术。

2. 材料、仪器与设备

2.1 实验材料

黄豆，1mol/LNaOH、10% HCl、正己烷、纤维素酶

2.2 实验仪器

恒温水浴锅、粉碎机、高速离心机、超声波仪、pH计、烘箱、电子天平、250mL三角瓶、平皿、大烧杯、玻棒、药匙

3. 实验内容与步骤

3.1 实验流程

黄豆粉碎→正己烷低温浸提（脱脂）30min→离心分离→收集沉淀→烘干20min→纤维素酶酶解→离心分离→收集沉淀→碱溶（调pH11）→超声波处理20min→离心分离→收集上清→等电点酸沉析出（调pH4.5）→离心分离→收集沉淀→烘干30min称重→计算蛋白质粗提回收率

3.2 实验步骤

（1）黄豆预处理

选择果粒饱满，色泽明亮的黄豆为原料，称取黄豆250g用小型粉碎机粉碎，破碎粉末用60目的不锈钢网筛过筛，去除夹杂物，备用。

（2）溶剂低温浸出法制取脱脂豆粕粉

取250mL三角瓶，加入粉碎后的豆粉20g，100mL正己烷，瓶口用平皿覆盖，恒温水浴60℃浸提30min使大豆中的油脂溶出，5000rpm离心15min后去上清液，将沉淀收集后放烘箱内50℃，20min烘干，得脱脂豆粕粉样品。

以下周四完成

（3）纤维素酶酶解辅助提高大豆蛋白溶出率

取10g 烘干的脱脂豆粕粉，按1:15料液比加入150mL 蒸馏水，用10%HCl 溶液调至pH5.0，按0.5%(脱脂豆粉)的酶量加入纤维素酶，在恒温水浴锅里加热至48℃，并恒温酶解90min 。酶解结束后，将酶解液以5000rpm 离心15min 除去上清液，收集沉淀。

（4）超声辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白

收集酶解离心沉淀，按1:15料液比加入150mL 蒸馏水，用1mol/LNaOH 溶液将pH 调至11，用超声波仪进行辅助提取，超声设置200W 功率，超声时间5s 、间隙5s 、总工作时间20min ；超声结束后静置20min ，以5000rpm 离心15min ，通过离心分离除去浸提液中的细豆渣、淀粉，收集上清液，得澄清的蛋白质水溶液。

采用酸沉工艺，边搅拌边在澄清的蛋白质水溶液中缓慢加入10%的HCl 溶液，调节溶液的pH 至4.4～4.6，使蛋白质在等电状态下沉淀，此时蛋白质溶液由浅黄色的澄清溶液逐渐变成白色浑浊液。当溶液达到等电点时，立即停止搅拌，静置30min ，使蛋白质能形成较大的颗粒沉淀下来。

将酸沉后溶液得到的沉淀物用离心机5000rpm 离心15min ，弃去清液，收集沉淀，放烘箱内50℃，30min 烘干，得大豆蛋白粗提物。

3.3 计算大豆蛋白提取率

100100%⨯⨯大豆中蛋白的质量分数

原料大豆质量提沉淀质量碱提酸沉法获蛋白质粗）＝总蛋白质提取率（%

注意：

由于蛋白质高温下易变性，整个实验操作中有机溶剂脱脂、酶解、干燥等环节均要在60℃以下的低温下进行。

参 考 文 献

[1] 徐静. 大豆蛋白分离工艺研究[J]. 金山油化纤2006，25（3）：14-17

[2] 钟瑜，周欢，陈礼刚. 大豆蛋白提取工艺初探[J]. 轻工科技，2012，5：4-5

[3] 高红岩，石国，马永强. 纤维素酶解对高变性大豆蛋白溶出率影响的研究[J]. 食品科技，2001（1）：22-24

[4] 张杰，王振斌，王世清，等. 超声辅助碱提大豆蛋白工艺研究[J]. 大豆科学，2010，29（3）：498-501