稳定性二氧化氯溶液杀灭霉菌孢子效果的研究

稳定性二氧化氯溶液杀灭霉菌孢子效果的研究

邱汉章

（漳州师范学院化学系环境科学01级363000）

摘要：本文就稳定性ClO

溶液的不同浓度、作用时间和温度对霉菌孢子进行杀灭试验。结果表明稳

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定性二氧化氯溶液对霉菌孢子的作用效果是多种因素的综合结果。而且霉菌对稳定性二氧化氯溶液的药效反应存在明显种属间的差异。不同存放时间杀灭霉菌孢子的实验也表明在静置条件下现配现用效果最佳。

关键词：二氧化氯稳定性霉菌

THE STUDY ON KILLING MILDEW SPORE EFFICACY OF STABLE CHLORINE DIOXIDE SOLUTION

Qiu hanzhang

(01environmental science in Chemistry Department, ZhangZhou Normal University 363000)

Abstract: It’s a germicidal experiment about stable chlorine dioxide under different concentrations, different time periods and temperatures towards fungi spore. The result indicates that the efficacy for stable chlorine dioxide killing fungi spore is a compound of many factors. Different species of mildew act diversely. The result of different time period on killing effect shows that newly make-up solution in stillness state has the best efficacy.

Key words: chlorine dioxide; stabilization; fungi

作为氯制剂的ClO2，不仅杀菌效果快速、可靠，而且毒性低[1-2]，运用范围广，对环境不产生影响的一种新型高效消毒剂，世界卫生组织（WHO）将其列为IA级高级安全消毒剂，工业发达国家将其称为“第四代消毒剂”。美国、日本、加拿大等发达国家早已将其作为氯制品消毒剂的一种最有前途和最理想的替代品而广泛应用，对稳定性ClO2科研开发和应用领域的研究也不断取得新进展[3]。在我国已广泛应用于医疗卫生、食品工业、果蔬保鲜、环境污染处理等方面。霉菌（mold）广布于外界环境中，它们在食品或许多制品上可以作为正常菌相的一部分，作为空气传播性污染物，常造成各类的食品、粮食及许多工农业制品由于遭受其侵染而霉坏变质；有些霉菌的有害代谢产物引起各种急性和慢性中毒，特别是有些霉菌毒素具有强烈的致癌性，实践证明，一次大量食入或长期少量食入，能诱发癌症[4]，特别随着霉菌毒素污染与肝癌发生特异性关系的确定，霉菌生态对人类的影响越来越受到关注

[5]。因此，加强对霉菌污染的预防和消毒，对人类健康具有重要的意义。对于稳定性ClO

2应用于产毒霉菌的消毒，罕见报道。本课题是在实验室条件下，对稳定性ClO2溶液杀死几种常见产毒霉菌孢子的浓度、作用时间、作用温度进行比较，结果报道如下。

1材料与方法

试验菌株培养与菌悬液的制备

试验菌株

黑曲霉(Asp.niger)

烟曲霉（Asp.fumigatus）

黄绿青霉（Penicillium citreoviride）

1.1.2 培养基配制与培养条件

本试验所用培养基均采用孟加拉红培养基，培养温度26±2℃。

1.1.3 菌悬液的制备

在无菌条件下操作，取生长丰满的霉菌培养皿1个，用接种环挑取霉菌孢子数环接入盛有10ml无菌水的试管中，振荡后。用无菌的单道移液器吹吸使孢子充分散开。将孢子过滤液用血细胞计数板测定孢子浓度，再用无菌水调整孢子液至0.5-1.5*106个孢子/毫升。

1.2 稳定性二氧化氯溶液和中和剂的配制

1.2.1 稳定性二氧化氯溶液的配制

取10mol 2%的二氧化氯溶液于一小烧杯中，称取0.5g柠檬酸加入小烧杯中活化3min。然后取不同体积活化后的二氯化氯溶液加入装有相应体积的无菌水的烧杯中，制成各种不同浓度梯度的二氧化氯溶液。

1.2.2 中和剂的配制

磷酸缓冲液：取Na2HPO4.12H2O 7.164g，用水定容至100ml为A液.NaH2PO4.2H2O 3.121g，用水定容至100ml为B液。取A液92ml,B液8ml,混合即成，0.2mol PH=5的缓冲液，临用时稀释10倍，即成0.02M PH=5的磷酸缓冲液。

称取0.155 g硫代硫酸钠晶体溶于100ml 0.02mol/l PH=5的磷酸缓冲液中，制成0.1%的Na2S2O3磷酸缓冲溶液作为试验所需的中和剂。

1.3 稳定性ClO2中和剂试验

1.3.1 中和剂选择的原则

实验设平行7组（见下表1），每组3次重复；试验结果，以第6、7组不长菌，第3、4、5三组间菌数误差率不超过10%；第1组不长菌或菌数远小于第2组，第2组菌数大于100 cfu/ml，则所用的中和剂及其浓度适宜。

1.3.2 操作步骤

取4.5ml消毒液于试管内，置20±2℃水浴中5min后，加菌悬液0.5ml，作用1min；取

0.5ml菌药混合液，加入4.5ml中和剂的试管内，混匀。中和作用5min，取该液或其稀释液

1.0ml接种平皿。倾注孟加拉红培养基并混匀。于28℃培养4-5d，观察结果。

用丙二酸—碘量法进行滴定，测定二氧化氯溶液与中和剂中和体积比。

1.4 不同药剂浓度和作用时间的杀灭霉菌孢子试验

取4.5ml不同浓度的消毒液于试管内，置20±2℃水浴中5min后，加菌悬液0.5ml，作用不同的设计时间后；迅速取0.5ml菌药混合液，加入4.5ml中和剂的试管内，混匀。中和作用5min，取该液或其稀释液1.0ml接种平皿。倾注孟加拉红培养基并混匀。于28℃培养4-5d，观察最终结果。

1.5 温度对霉菌孢子杀灭效果试验

取 4.5ml不同浓度的消毒液于试管内，置不同的设计温度水浴中5min后，加菌悬液0.5ml，作用不同的设计时间后；取0.5ml菌药混合液，加入4.5ml中和剂的试管内，混匀。中和作用5min，取该液或其稀释液1.0ml接种平皿。倾注孟加拉红培养基并混匀。于28℃培养4-5d，观察最终结果。

1.6 药剂存放时间对霉菌孢子杀灭效果试验

将配制好的80倍的二氧化氯溶液在室内常温条件下，每隔120min做一次对霉菌孢子杀灭效果试验。方法同上。

1.7 试剂与仪器

孟加拉红培养基(BP，北京陆桥技术有限责任公司)、2%的二氧化氯溶液（广东微生物研究所）、，NaH2PO4.2H2O（上海新化化工厂，分析纯）、Na2HPO4.12H2O（广东汕头市西陇化工厂，分析纯）、Na2S2O35H2O(广东汕头市西陇化工厂，分析纯)