牧草种子生活力快速测定与发芽试验比较研究

Grassland department of GSAU LanZhou China（730070） Abstract
According to do conventional germination experiment and rapid viability testing experiment (TCC)for Avena sativa、Sorghum sudanense、Trifolium repens、Medicago sativa L、Poa pratensis L、Lolium pererme、Festuca arundinacea seven variety seeds of forage.Use the results of experimentation germination and rapid viability testing to analysis the correlation of the two experimentation .Adopt expressions r=100-(V-G)/y×100%、y=(V+G)/2 for data analysis .The experimental dataget shows ,the correlation of five variety seeds of forage from high to low are Sorghum sudanense(r=100)、Medicago sativa L(r=97)、Trifolium repens(r=89)、Poa pratensiscor(r=71)、Avena sativa(r=32). Keywords: seeds of forage, germination percentage, viability, TTC
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和胚乳完全着色的是有生活力的种子，还有些种子在种胚或胚乳上呈现未着色的斑块，表明 是一些坏死的组织，判断种子有无生活力主要是看坏死组织出现的部位和其大小，而不一定 在于染色的深浅。 1.3.2.2 四唑染色温度及浓度控制
同一品种牧草种子在其极限温度内欲达到相同的染色情况，温度越高染色时间相对较 短，反之越长；浓度越高染色时间相对较短，反之越长。
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色失败，原因有待进一步探讨。
4.6 试验中由于经验不足对生活力测定中有生活力种子的鉴定和发芽试验中幼苗鉴定出现
误差，影响试验结果。
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参考文献
[1]上海植物生理学会编.植物生理学手册[M].1985：328-338. [2]颜启传.种子检验原理和技术[M].2001.2. [3]1996 国际种子检验规程[M] . 国际种子检验协会（ISTA），1999.4. [4]阎富英.国内外种子生活力和活力测定技术的最新进展[J]. 种子，2005（6）， 24（6）：48-50. [5]颜启传，黄亚军. 种子四唑测定手册[M] .宁波市种子质检中心 .1992,5. [6]张木兰.几种牧草种子发芽方法的试验研究[J]. 内蒙古草业， 2005（9），17（3）:25-27. [7]戴铮.玉米种子发芽率与生活力的相关性研究[J].种子[J],2004 (9),23(9):68-69.
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牧草种子生活力快速测定与发芽试验比较研究
魏国君，王迅，张海钰，谢雅琦，张丽思，柳平，姜云森
甘肃农业大学草业学院， 甘肃兰州（730070）
E-mail：wangxun513@126.com
摘 要：对青海苏丹草、白三叶、陇东苜蓿、青海黄燕麦、草地早熟禾、多年生黑麦草、高 羊茅七种牧草种子样品分别进行常规发芽试验和生活力(红四氮唑)测定试验。用发芽试验和 四唑快速检测的结果测算两种试验间的相关性。采用公式:r=100-(V-G)/y×100%、y=(V+G)/2 进行数据分析。试验结果表明，5 种草种的相关性高到低依次为苏丹草(r=100)、陇东苜蓿 (r=97)、白三叶(r=89)、草地早熟禾(r=71)、青海黄燕麦(r=32)。 关键词：牧草种子，发芽率，生活力，TTC
1
2
3
4
5
100
90
80
70
G 60
G
V 50
V
r
40 30
r
20
10
0
1
2
3
4
5
注：横轴-品种，纵轴-百分比
图 1 生活力与发芽率相关性比较
图 2 生活力与发芽率相关性趋势
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3.对表 3、图 1、图 2 分析，结果如下
3.1 青海苏丹草的发芽率测定值和生活力测定值相差为 0，r 值为 100，相关性高。 3.2 白三叶的发芽率测定值和生活力测定值相差为 5，r 值为 89，相关性中。 3.3 陇东苜蓿的发芽率测定值和生活力测定值相差为 2，r 值为 97，相关性高。 3.4 青海黄燕麦的发芽率测定值和生活力测定值相差为 25，r 值为 32，相关性很低。 3.5 草地早熟禾的发芽率测定值和生活力测定值相差为 23，r 值为 71，相关性中。
The comparative study between Rapid Viability Testing and Experimentation of Germination of the seeds of Forage
Wei Guojun，Wang Xun，Zhang Haiyu，Xie Yaqi，Zhang Lisi，Liu Ping，Jiang Yunsen
1.3.3 数据统计方法 r=100-(V-G)/y×100% y=(V+G)/2 r--相关系数 V--发芽率测定值 G--生活力测定值 y--发芽率测定值与生活力测定值平
均值 (当 V 或 G 有一方为零时此关系式无意义)
2.试验结果与分析
由于多年生黑麦草、高羊矛多次染色失败无法比较，对青海苏丹草、白三叶、陇东苜蓿、 青海黄燕麦、草地早熟禾五个不同品种的发芽率测定值和生活力测定值进行分析，图表如下：
TP
20-30
L
TP
20-30
L
TP
20-30
L
TP
20-30
L
TP
20-30
L
5
7
12 日-19 日
3
14 13 日-27 日
4
14 13 日-27 日
5
15 13 日-28 日
7
23 13 日-05 日
5
23 13 日-05 日
7
17 13 日-30 日
注：TP――纸上； L――有光照
发芽试验发芽床管理：发芽床始终保持湿润，不断加入水，但不能在发芽床上有积水， 保证适宜的发芽条件。如发现霉菌滋生，应及时取出霉种子并将霉菌洗去。
表 2 生活力测定设计
水中浸泡时间 18h 18h 18h 18h 2h 3h 3h
染色时间 18h 18h 18h 18h 18h 18h 18h
染色预处理 切胚
除去内外稃 针刺
除去内外稃 除去内外稃
Hale Waihona Puke Baidu
1.3.2.1 染色鉴定 各种品种的判断标准也不完全一致。种胚和胚乳完全不着色的是无生活力的种子。种胚
1.3.2 生活力测定
生活力（四唑）测定参照国际种子检验规程生活力测定标准方法进行[2，3]。（表 2） 生活力（四唑）测定先将种子在室温（15~20℃）下在蒸馏水中浸泡，然后对不同种子 分别进行切胚和除去内外稃，在 30℃恒温下染色。
编号 1 2 3 4 5 6 7
样品名称 青海苏丹草 白三叶 陇东苜蓿 青海黄燕麦 草地早熟禾 多年生黑麦草 高羊矛
生活力测定结果与发芽率测定结果大于 70%时，两者相关性较高；当生活力测定结果与发 芽率测定结果低于 50%时，两者相关性很低。
4.3 发芽试验中部分种子发霉，可能是种子表层带菌，影响试验结果。特别是燕麦比较严重，
40%的种子都有不同情况的发霉。
4.4 发芽试验中部分种子可能有休眠、硬实，影响试验结果。如，陇东苜蓿。 4.5 生活力测定中对不同品种牧草种子最佳染色条件掌握不好，导致黑麦草和高羊茅多次染
1.3 试验方法
1.3.1 发芽试验
发芽试验参照国际种子检验规程进行 [2，3] 。
编
学名
表 1 种子发芽试验设计
发芽床
温度
光照
计数（天数）
持续时间
号
(℃)
初次 末次
1 青海苏丹草 2 白三叶 3 陇东苜蓿 4 青海黄燕麦 5 草地早熟禾 6 多年生黑麦草 7 高羊矛
TP
20-30
L
TP
20-30
L
种子发芽率是指种子在适宜条件下发芽并长成正常幼苗的百分率。种子生活力是指种子 发芽的潜在能力或种胚具有的生命力[1]。发芽试验对种子萌发阶段进行培养，通过鉴定种子 萌发的情况，确定种子发芽率，是应用最广泛的种子质量检验方法。生活力的四唑测定是通 过鉴定种子内部活组织的染色情况，确定种子生活力的快速、有效、准确的质量检验方法。
表 3 发芽试验与生活力测定结果对照
编号 品种中文名
G
V
V-G
r
1 青海苏丹草
93
93
0
100
2 白三叶
62
69
5
89
3 陇东苜蓿
73
75
2
97
4 青海黄燕麦
24
49
25
32
5 草地早熟禾
68
91
23
71
6 多年生黑麦草
77
-
-
-
7 高羊矛
69
-
-
-
100
90
80 70
60
50
40 30
20 10
0
4.小结与讨论
4.1 通过实验数据分析可知这五种牧草种子生活力与发芽率呈正相关关系（图 2）。5 种草种 的相关性高到低依次为苏丹草(r=100)、陇东苜蓿(r=97)、白三叶(r=89)、草地早熟禾(r=71)、
青海黄燕麦(r=32)。
4.2 五种牧草发芽率和生活力有一定的相关关系，生活力测定结果大于发芽率测定结果。当
1.材料和方法
1.1 材料
试验用种子是 2005 年的收获的青海黄燕麦（Avena sativa）、青海苏丹草(Sorghum sudanense)、白三叶（Trifolium repens）、多年生黑麦草（Lolium pererme）、陇东苜蓿（Medicago sativaL）、高羊茅（Festuca arundinacea）、草地早熟禾（Poa pratensisL）牧草种子样品 56 份。
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Na2HPO4·2H2O溶于 1000ml水中，得乙液；甲液和乙按 2:3 的容积比混合得缓冲液。称取四 唑 10g溶于 1000ml的缓冲溶液，配制浓度为 1.0%的四唑溶液 ，pH为 6.5-7.0。配成的四唑 溶液在黑暗环境中可以保存几个月，但只能使用一次[3] 。
恒温培养箱、培养皿（90 ㎜）、滤纸、蒸馏水、解剖镜、解剖针、烧杯、小镊子、量筒、 玻璃棒、胶匙。
1.2 试剂
1.0% 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC),磷酸二氢钾,磷酸氢二钠。 四 唑 药 品 配 制 ： 取 9.078g KH2PO4 溶 于 1000ml 水 中 ， 得 甲 液 ； 又 取 11.876g
通过对两种方法的比较，发芽试验通常出现以下几种原因导致结果不可靠:一重复间误 差超出规定范围;二细菌和真菌感染严重;三怀疑种子有休眠;四水分控制不好;五幼苗鉴定困 难[7];六种子休眠、硬实、损伤等。此外，牧草种子发芽试验持续时间相对较长。另一方面 生活力(四唑)测定是世界公认、广泛应用的一种生物化学方法,具有操作简单、省时快速、结 果准确、原理可靠、不受外界因素干扰、不受条件限制等优点,是一种室内检测的理想方法〔5〕 。如果能用生活力评定或替换发芽率,不仅使检测工作高效、快速、准确,而且能广泛应用于 种子生产和营销中,切实解决种子公司的实际问题,意义重大。种子生活力四唑测定和发芽实 验都是种子质量检验的重要指标，同时种子发芽率和生活力之间存在着内在的必然的联系， 这一趋势虽是必然,但目前由于对生活力的四唑测定方法掌握还有限,或由于检验经验不足， 在使用中对种子生活力与发芽率两者之间的相关性还缺乏统一标准，很难直接以生活力来估 测发芽率。因此，开展种子生活力和发芽率之间相关关系的定量研究在种子检验和生产中都 有重要的意义。本试验通过对 7 个不同牧草品种样品分别进行发芽试验和生活力(四唑）测 定, 用发芽试验和四唑快速检测的结果测算两种试验间的相关性。