受体的放射配体结合分析法

通常按C区和染色体DNA结合的结构特征，将核 受体分为三类： 1、 糖皮质激素受体类 包括糖皮质激素受体 （GCR）、盐皮质激素受体（MR）、孕激素受 体（PR）及雄激素受体（AR）等。 2、 甲状腺激素受体类 包括甲状腺激素受体 （ TR ）、维生素 D3 受体（ VDR ）、维甲酸受体 （RAR）及维甲酸X受体（RXR）等。 3、 雌激素受体类 主要为雌激素（ER）。
第八章 受体的放射配体结合分析法
第一节概述 受体（Receptor）
细胞膜上或细胞内的一些与生物活性物质相互作用并引 起特异性生物效应的大分子。
一、受体的分类及亚型
在细胞内的定位可将受体分为膜受体、核受体 （一） 膜受体（membrane receptors） 由胞膜外、胞膜内及跨膜区三部分组成，配体在 细胞外侧同受体的胞外部分或跨膜部分上的特定 结合位点结合后，受体的分子构型发生变化，通 过膜内部分启动相应的信息传递机制，引起细胞 功能变化。根据受体的分子结构和受体后信息传 递方式，膜受体又分为四种：
受体与配体相互作用的基本特点
1、 可饱和性（Saturabilty）--有限结合能力。 2、 特异性（Specificity）受体对配体应具有特异 性和立体特异性。配体可分为激动剂与拮抗剂 3、 适度的亲和力（Affinity）受体对它的配体的 亲和力，或配体占据受体的浓度范围，应该相当于 体内配体的生理浓度，通常是10-9mol/L。 4、 可逆性（Reversibility）受体与配体的结合反 应是可逆的。可逆性还表现在已经结合的配体可被 另一种与受体亲和力更高的配体取代。
[R]+[L]
1
k1 v1 k2 v2
[RL]
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v ---复合物形成速率 k ---复合物形成速率常数 v ---复合物解离速率 k ---复合物解离速率常数 v = K [R][L] v = K [RL] 反应平衡时v1= v2
1_ 2 2_ 1 1 2 2
反应平衡时v1= v2
k 1[ R][L] k 2[ RL]
平衡解离常数KD=
k2 k1
=
[ R ][L ] [ RL]
KD=1/KA，单位为：mol/L KD越大，亲和力越低
设 受体和配体的初始浓度分别 为[RT]、[LT] 则 [R]=[RT]-[RL] [L]=[LT]-[RL] 代入： KD= [ RT RL][L] [ RT RL][ LT RL]
定性RBA
通过反应量效关系，某 些参数的变化等判断受 体的类型，单位点和多 位点系统，受体与配体 相互作用的特点等。
第二节、单位点系统RBA 的基本原理
一、受体与配体相互作用的基本特点
二、简单单位点系统受体配体相互作用的基本规律
二、简单单位点系统受体配体相互作 用的基本规律
简单单位点系统: 受体与配体结合的系统只存在一种结合位点. 1.质量作用定律: 受体与配体的结合反应最基本的性质是服从可 逆反应的质量作用定律.
图8.1 受体示意图
（二）核受体（nucleus receptors ）
本类受体在细胞核上，与细胞核内特定的DNA结合，通 过这种结合影响遗传信息的转录。核受体都是分子量在 80～100KD的可溶性蛋白，不含糖基，无酶活性，由一 条氨基酸组成。分为四个功能区，A/B区、C区、D区和 E区。A/B区在不同受体中差异最大，主要功能是选择和 激活基因转录。D区主要作用是受体在核内的定位，是 与染色体DNA结合区，上面有一定的氨基酸序列，可以 和靶基因上一定的核苷酸序列（反应原件，response element）相结合。E区为配体的结合区，并有转录激活 作用
5、 识别能力（Recognition）和生物效应一致性 受体与配体的特异性结合保证了受体对机体内成千上万 生物活性物质的高度识别能力。这种能力与配体引起的 生理（药理）效应相一致。表现在：（ 1）、在组织分 布上的一致。（ 2 ）、在浓度上的一致。受体主要存在 于相应配体发挥生理或药理效应的器管，称之为靶器管。 有的配体生理或药理效应广泛，而另一些配体的作用则 有明显的器管专一性。配体和受体结合的有效浓度通常 也应该和该配体发挥生理或药理作用的浓度一致。 6、 需具有内源性配体 一般受体都有内源性配体，如果通过外源性配体发现某 种蛋白分子具有类似受体的结合特性，但未能找到内源 性配体，则称之为孤儿受体（ Orphan receptor ），还 不能看做肯定是真正的受体。
binding assay of receptors） 用放射性核素标记的配体与相应受体进行特异性 结合反应，从而对受体进行定性和定量，即称为受体 的放射配体结合分析法。
RBA（Radioligand
RBA
定量RBA
在已知配体—受体反应的 基础之上，通过结合反应 得知一定量的组织或细胞 能与该放射性配体结合的 受体数（又叫结合位点数， Number of binding site）和亲和力（以解离 常数KD表示）。
（三） 受体亚型
受体亚型是指受体分子结构上既有部分相同，也存在 一定差别，它们对同一配体具有不同的亲和力，生物 学上具有不同的效应。 1 、用药理学方法可见到，同一种受体的几种激动剂 （拮抗剂）对各亚型都有作用，但作用有相对的选择 性。如，对于α肾上腺受体，哌唑嗪对血管平滑肌收缩 的拮抗作用强（ α1 ），对胃肠道平滑肌舒张的拮抗作 用较弱（α2），而育亨宾则相反。 2、用放射配体结合分析法可观察到，同一种受体的某 些激动剂（拮抗剂）对各亚型都有特异性结合能力， 但是亲和力不同。 3、用分子生物学技术可观察到，同一种受体的不同亚 型的分子结构类似，但基因的编码和氨基酸序列有一 定的差异。
[ RL]
[ RL]
整理后得： [RL]2-[RL][RT+LT+KD]+[RT][LT]=0
因为 [RT] 、KD 为定值 所以[RL]仅随[LT]而变化，两者呈双曲线函数关 系
2.饱和曲线:简单单位点系统RBA具有典型的
饱和曲线--------------以[RL]为纵坐标[LT]为 横坐标, 得到的得到一条曲线(Saturation curve).