通络糖泰颗粒质量标准研究

通络糖泰颗粒质量标准研究

作者：胡清等

来源：《中国中医药信息》2013年第12期

摘要：目的建立通络糖泰颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中黄连、芥子、玄参进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定通络糖泰颗粒中盐酸小檗碱含量。结果黄连、芥子、玄参薄层色谱斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰。盐酸小檗碱进样量在0.037 29～2.610 3 µg范围内呈良好的线性关系，r=1.000 0，平均回收率为98.85%，RSD=0.70%

（n=6）。结论该方法灵敏、简便、准确、重复性好，可作为通络糖泰颗粒的质量控制标准。

关键词：通络糖泰颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；盐酸小檗碱；质量标准

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.015

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0039-03

通络糖泰颗粒为成都中医药大学附属医院在研医院制剂，

该处方由黄连、丹参、玄参等组成，以汤剂运用于临床多年，具有清利湿热、活血祛毒的功效，治疗糖尿病周围神经病变阴虚内热、痰瘀阻络证，见肢体麻木、疼痛及感觉异常，或见潮热盗汗、五心烦热、面色晦黯、肌肤甲错者，且有通络糖泰对糖尿病周围神经病变相关的的实验研究[1-6]。为有效控制制剂质

量，确保疗效，本试验采用薄层色谱法对黄连、芥子、玄参进行定性鉴别，并用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中黄连小檗碱进行含量测定。

1 仪器与试药

HP-1100型高效液相色谱仪（G1322A在线真空脱气装置、G1311A四元梯度泵、G1313A 标准自动进样器、G1316A柱温箱、G1315A DAD检测器、Chemstation工作站），美国惠普公司；电子分析天平，SARTORIUS，Bp211D；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；AS10200超声波清洗器（功率250 W，频率40 kHz），天津奥特赛恩斯仪器有限公司。

盐酸小檗碱对照品（供含量测定用，纯度86.8%，批号1100713-200911）、哈巴俄苷对照品（批号111730-201106）、芥子碱硫氰酸盐对照品（批号111702-201102）、黄连对照药材（批号120913-201008）、玄参对照药材（批号121008-201007），均由中国药品生物制品检定所提供；通络糖泰颗粒样品（批号分别为20120901、20120902、20120903）及阴性样品均由成都中医药大学附属医院药剂科提供；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 黄连取本品1 g，研细，加甲醇10 mL，超声处理20 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.1 g、缺黄连阴性样品1 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述对照品溶液和对照药材溶液各1 µL，供试品溶液和阴性对照溶液各2 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（3∶

3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）为展开剂，置用浓氨水试液预饱和20 min的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰[7]。

2.1.2 芥子取本品2 g，研细，加甲醇30 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺芥子阴性样品2 g，同法制成阴性对照溶液。再取芥子碱硫氰酸盐对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述对照品溶液5 µL、供试品溶液和阴性对照溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（

3.5∶5∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[8]。

2.1.3 玄参取本品3 g，研细，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取玄参对照药材1 g、缺玄参阴性样品3 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 µL、供试品溶液10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[9]。

2.2 颗粒检查

2.2.1 水分参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅨH“水分测定法”烘干法项下的有关规定进行测定，取同一批通络糖泰颗粒，测得平均含水量为

3.48%（

2.2.2 溶化性取通络糖泰颗粒15 g，加热水200 mL，搅拌5 min，立即观察，颗粒能够全部溶解，该颗粒溶化性符合要求。

2.2.3 粒度照粒度测定法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅺ B第二法，双筛分法]测定，取通络糖泰颗粒45 g，不能通过1号筛和能通过5号筛的总和为2.6 g，未超过过15%，符合要求。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 Hypersil BDS（5 µm，4.6 mm×150 mm）色谱柱；流动相为A-B

（95∶5），A为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50，每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节pH值为4.0），B为水；检测波长345 nm；柱温30 ℃；进样量5 µL；流速1.0 mL/min。理论塔板数大于5000[10-14]。

2.3.2 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品4.41 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得（0.1530 mg/mL）。

2.3.3 供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.8 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）40 min，放冷，用盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过（0.45 µm），取续滤液，即得。

2.3.4 线性范围的考察分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（0.3729 mg/mL）0.1、0.5、1、2、3、5、7 µL，注入液相色谱仪。以峰面积对进样量进行回归，计算得回归方程

Y=2156.04X-8.89 626，r=0.999 96，结果表明，盐酸小檗碱在0.037 29～2.610 3 µg范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.3.5 专属性考察按照通络糖泰颗粒制备工艺方法制备缺黄连的阴性样品，按“2.3.3”项下方法制备阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5 µL，分别注入高效液相色谱仪中。结果阴性对照色谱图中，在盐酸小檗碱处无干扰峰。色谱图见图1。

2.3.6 精密度试验精密吸取对照品溶液5 µL，按“2.3.1”项下色谱条件，连续进样测定6次，RSD=0.79%，结果表明精密度良好。

2.3.7 稳定性试验精密吸取供试品溶液5 µL，于0、2、4、6、8、10 h进样，按上述色谱条件测定，RSD=0.37%，结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.3.8 重复性试验取同一批次样品6份，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，进样5 µL，按上述色谱条件测定，RSD=1.00%，结果表明该方法的重复性较好。

2.3.9 加样回收率试验精密称取已知含量的样品0.4 g，共6份，分别精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按“2.3.3”项下方法制备，进样5 µL，按上述色谱条件测定。结果盐酸小檗碱的平均回收率为98.85%，RSD=0.70%。见表1。