高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件研究

第１期徐昶等：高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件研究．１０９．

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图２接种量对酶产量的影响

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菌丝体徒长，产酶滞后；接种量过大，则菌丝体增长迅速，后期营养不良，且曲温升高，不利于产酶．因此最适接种量为６％．

３）不同底料与麸皮比对酶活力的影响

本研究以稻草粉为底料．将稻草粉与麸皮以不同比例混合，按６０Ａ接种量在固体发酵培养基３０＂Ｃ培养８４ｈ，结果见图３．

图３表明，当稻草粉／麸皮比为４：６时酶活力最高，ＣＭＣ酶活力比不加麸皮时提高３．６倍，麸皮的量对ＦＰＡ酶活力影响则更加显著．可见，麸皮对菌种酶活力的影响是双方面的：一方面为产酶提供必要的营养因子；另一方面’，其含量增加又会降低培养基的蓬松程度，使通气量降低，从而影响酶活力．

４）不同氮源对酶活力的影响

采用尿素、硫酸铵、氯化铵、硝酸钠、硝酸铵、蛋白胨、酵母粉作为氮源（总氮量为０．４％），研究其对酶活力的影响．以６％接种量３０℃培养８４ｈ，稻草粉／麸皮比为１：１，实验结果如图４．可知，氮源对酶活力的影响因素依次为：有机氮＞硝酸盐＞铵盐，采用蛋白胨作为氮源时效果最好．

５）培养温度对酶活力的影响

将６％菌丝体碎片悬浮液接入固体发酵培养基，分别于不同温度下培养，每隔２４ｈ测定ＣＭＣ酶活力，

图４不同氮源对酶活力的影响

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图３底料与麸皮的比例对酶活力的影响

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总时间为４ｄ．结果表明：灰绿曲霉ＸＣ９在较低温度（２５℃）下培养，菌体生长缓慢，孢子数量少，呈浅绿色，酶活力高峰期出现晚．在温度较高（３５℃）时培养，菌体生长旺盛，孢子多，呈绿色，酶活高峰期出现早，但酶量偏低．该菌株产酶比较适宜的温度为３０℃．

６）培养基起始ｐＨ值对酶活力的影响

将６％接种量接人起始ｐＨ值不同的固体发酵培养基，３０℃培养３ｄ，分别测其酶活力．结果表明，灰绿曲霉ＸＣ９产ＣＭＣａｓｅ最适起始ｐＨ值为５．５，ＦＰＡ最适起始ｐＨ值为６．０．

７）表面活性荆对酶活力的影响

在固体发酵培养基中加入０．１％～０．８％吐温８０（ＴＷ－８０）和立白洗衣粉（广东立白集团有限公司产品），以不加的为对照，培养３ｄ（接种量６％，３０℃），研究两种表面活性剂对灰绿曲霉ＸＣ９产纤维素酶的影响．结果表明：加入０．２％～Ｏ．４％的ＴＷ一８０和０．１％～ｏ．２％的洗衣粉能较大地促进菌体产酶，说明一定浓度的表面活性剂能提高细胞质膜的通透性。有利于胞内酶的不断排出．但浓度过高则菌体酶活力降低，可能菌体受到伤害，使产酶下降，这与文献Ｅ１４３报道的不同．

２．４灰绿曲霉ＸＣ９粗酶液酶促反应的最适ｐＨ和最适温度

不同菌株来源的纤维素酶在结构和性质上常有不同，酶的最适反应条件也往往有些差异．本实验主要研究了ｐＨ及温度对灰绿曲毒ＸＣ９酶活力影响．将粗酶液直接与不同ｐＨ值缓冲液配制的一系列底物５０℃保温，分别测定酶活力，得到ｐＨ对酶活力影响．实验结果表明：ＣＭＣａｓｅ在ｐＨ４．４＂－－６．０有较高的酶活力，最适ｐＨ为４．８ＦＰＡ在ｐＨ４．８～６．８酶活力较高，最适ｐＨ为６．０．

将粗酶液与底物在ｐＨ值为５．０缓冲液中，于不同温度下直接进行酶促反应。测酶活力，得酶的最适温度．实验表明ｔＣＭＣａｓｅ和ＦＰＡ最适反应温度均为

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