免疫扩散技术——IgG测定

定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。
要 求
1. 实验结束后安排同学打扫卫生。
2. 实验报告与单扩实验分开写，下周上 课交报告。
• PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关： 2%PEG只能沉淀大分子，
4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物
大于5%PEG，选择性沉淀特性消失。
在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量 越大，用以沉淀的PEG浓度越小。
• 分离血清免疫复合物一般采用最终浓 度为3%~4%PEG。 • 血清中加入最终浓度约为3.5%的PEG 后，其浊度与血清中免疫复合物含量 相关，用分光光度计测定其A值，代表 免疫复合物相对含量。
胶乳凝集试验——RF测定
实验原理
以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验： 聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的
能力，借此将抗原（变性IgG）与胶乳颗粒结
合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体
（RF）发生凝集反应。
RF为抗变性IgG的抗体，因此 本实验使用的是人IgG致敏的聚
苯乙烯颗粒。
试剂和器材
• RF检测试剂（商品化试剂） • RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带） • 黑色反应板、滴管、搅拌棒等
0.1
3
操作方法
2. 将以上反应管充分混匀，置室温1小时。 3. 用721分光光度计在460nm波长下混匀
测定OD值。
4. 关机，清洁仪器，盖上布罩。
• 正常参考值：OD<0.15
• 结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。
• CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供
辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测
试剂和器材
• 试剂1：0.1mol/L PH8.6硼酸缓冲液
试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液 （已备好） • 仪器：721分光光度计
操作方法
1. 加样：对每一份标本，取两试管按下表操作 加入物（单位：mL） 对照管 测定管
待测血清
试剂1（硼酸缓冲液 ） 试剂2（PEG-硼酸缓冲液 ）
0.1
3
方法学评价
• 该试验方法简单、快速、特异性强、
结果清晰易观察判断。
• 观察时应注意排除非特异性凝集反 应。 • 如何进行半定量分析？
CIC测定
实验原理： PEG沉淀法
聚乙二醇（PEG），分子量
6000，具有较强的脱水作用，可引
起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对
蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度
测定技术中常用的增浊剂。
操作方法
1. 在黑色反应板上取3格，用滴管分 别加待测血清、阳性血清和阴性血
清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶
乳颗粒试剂。
2. 用搅拌棒充分混匀后，连续摇动
2~3min后与对照比较，观察结果。
结果Βιβλιοθήκη Baidu断
• 胶乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性， 胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性； • 首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果， 若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试 剂有效； • 然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴 阳性。