基因工程的基本操作程序ppt
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终止子是在非编码区内紧靠转录终点， 调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列，它 能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA 模板链上脱离下来，使转录终止。
基因工程的基本操作流程
基因组文库和部分基因文库
基因组文库
部分基因文库
基因组文库和部分基因文库
cDNA合成过程
第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互 补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。
外显子：能编码蛋白质 的DNA序列
内含子：不能编码蛋白
wenku.baidu.com
真核细胞基因
质的DNA序列
非编码区：与原核生物具有相似功能的启 动子、终止子
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
原核细胞 真核细胞
不同点
编码区是 连续的
编码区是间隔 的、不连续的
都由能够编码蛋白质的编 相同点 码区和具有调控作用的非
编码区组成的
基因的种类
真核细胞的基因结构
与原核细胞比较，真核细胞基因结构的主要特点是： 编码区是间隔的、不连续的。也就是说，能够编码
蛋白质的序列被不能够编码蛋白质的序列分隔开来，成 为一种断裂的形式。
其中，能够编码蛋白质的序列叫做外显子，一般不 能够编码蛋白质的序列叫做内含子。
真核细胞的基因结构
编码区 （间隔、不连续）
1. 获取目的基因
从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成
2. 构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因
3. 将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法、显微注射法
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译
基因操作的基本步骤
基因操作的基本步骤
（1）编码蛋白质的基因：包括结构基因和 调节基因。
（2）没有转译产物的基因：如rRNA基因 和tRNA基因。
（3）不能转录的DNA片段：如操纵基因。
启动子与终止子
启动子是在非编码区内紧靠转录起点， 调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列，它 能引导RNA聚合酶与正确的基因部位结合， 使转录从起点开始，沿编码区进行。
第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA 链降解，使之变成单链的DNA。
第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用 下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。
利用PCR技术扩增目的基因
原理: DNA双链复制 前提: 要有一段已知 目的基因的脱 氧核苷酸序列， 以便合成引物。
获取目的基因
从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成
构建表达载体
表达载体的组成
1. 目的基因 2. 启动子 3. 终止子 4. 标记基因
基因工程载体的构建需要考虑哪些因素
（1）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内 含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子 的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的 内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。基因的产 物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌 中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性， 因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上 的，而细菌无这些细胞器。
基因工程的基本操作程序
原核细胞的基因结构
原核细胞基因
编码区（编码序列）：能指导有关蛋白质的 合成，即能够编码蛋白质
非编码区（调控序列）：位于编码区上游和 编码区下游的DNA序列，虽不 能指导有关蛋白质的合成，但 有调控遗传信息表达的核苷酸 序列，如启动子、终止子等
原核细胞的基因结构
RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。 它能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并 与DNA分子的一条链为模板合成RNA。
农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法
将目的基因导入受体细胞（动物细胞） 显微注射法
将目的基因导入受体细胞（微生物细胞） Ca2+处理
目的基因的检测与鉴定
检测:
是否插入目的基因 是否转录 是否翻译
鉴定:
功能活性鉴定 抗性鉴定
分别提取什么进行检测
归纳步骤
归纳: 基因工程的基本操作程序
（2）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强 有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产 物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达， 如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达 的启动子。
（3）要有选择标记基因，如抗生素基因，以便选择出真 正的转基因生物。
将目的基因导入受体细胞（植物细胞）
基因工程的基本操作流程
基因组文库和部分基因文库
基因组文库
部分基因文库
基因组文库和部分基因文库
cDNA合成过程
第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互 补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。
外显子：能编码蛋白质 的DNA序列
内含子：不能编码蛋白
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真核细胞基因
质的DNA序列
非编码区：与原核生物具有相似功能的启 动子、终止子
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
原核细胞 真核细胞
不同点
编码区是 连续的
编码区是间隔 的、不连续的
都由能够编码蛋白质的编 相同点 码区和具有调控作用的非
编码区组成的
基因的种类
真核细胞的基因结构
与原核细胞比较，真核细胞基因结构的主要特点是： 编码区是间隔的、不连续的。也就是说，能够编码
蛋白质的序列被不能够编码蛋白质的序列分隔开来，成 为一种断裂的形式。
其中，能够编码蛋白质的序列叫做外显子，一般不 能够编码蛋白质的序列叫做内含子。
真核细胞的基因结构
编码区 （间隔、不连续）
1. 获取目的基因
从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成
2. 构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因
3. 将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法、显微注射法
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译
基因操作的基本步骤
基因操作的基本步骤
（1）编码蛋白质的基因：包括结构基因和 调节基因。
（2）没有转译产物的基因：如rRNA基因 和tRNA基因。
（3）不能转录的DNA片段：如操纵基因。
启动子与终止子
启动子是在非编码区内紧靠转录起点， 调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列，它 能引导RNA聚合酶与正确的基因部位结合， 使转录从起点开始，沿编码区进行。
第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA 链降解，使之变成单链的DNA。
第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用 下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。
利用PCR技术扩增目的基因
原理: DNA双链复制 前提: 要有一段已知 目的基因的脱 氧核苷酸序列， 以便合成引物。
获取目的基因
从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成
构建表达载体
表达载体的组成
1. 目的基因 2. 启动子 3. 终止子 4. 标记基因
基因工程载体的构建需要考虑哪些因素
（1）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内 含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子 的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的 内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。基因的产 物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌 中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性， 因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上 的，而细菌无这些细胞器。
基因工程的基本操作程序
原核细胞的基因结构
原核细胞基因
编码区（编码序列）：能指导有关蛋白质的 合成，即能够编码蛋白质
非编码区（调控序列）：位于编码区上游和 编码区下游的DNA序列，虽不 能指导有关蛋白质的合成，但 有调控遗传信息表达的核苷酸 序列，如启动子、终止子等
原核细胞的基因结构
RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。 它能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并 与DNA分子的一条链为模板合成RNA。
农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法
将目的基因导入受体细胞（动物细胞） 显微注射法
将目的基因导入受体细胞（微生物细胞） Ca2+处理
目的基因的检测与鉴定
检测:
是否插入目的基因 是否转录 是否翻译
鉴定:
功能活性鉴定 抗性鉴定
分别提取什么进行检测
归纳步骤
归纳: 基因工程的基本操作程序
（2）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强 有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产 物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达， 如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达 的启动子。
（3）要有选择标记基因，如抗生素基因，以便选择出真 正的转基因生物。
将目的基因导入受体细胞（植物细胞）