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产生的白色沉淀线。
四 结果记录
A
Ag Ab
五 讨论
BCDEF
试讨论以上六种情况中抗原和抗体的浓 度差异以及在凝胶中的扩散率大小（用＞、 ＜、≈表示）
实验四 火箭免疫电泳
【目的要求】
1.复习巩固免疫化学的基本知识 2.熟练掌握火箭免疫电泳的操作步骤 3.掌握其在抗血清效价的测定和特异性抗
体的分析中的应用。
三 操作步骤
1．琼脂玻板的制备梅花型打孔图 将溶化的1.5%琼脂倒在培养皿中，使之
能将表面覆盖，制成厚度约2～3mm厚的琼脂 糖凝胶板，待冷却后根据所需形状打孔。 （切勿剧烈振荡融化后的琼脂糖，防止气泡 的出现。）
2．免疫扩散及结果观察
每孔加入 抗原/抗体10μl
注意：加样至孔满为止， 不可外溢。待孔内液体渗 入凝胶后即可放于温盒中。 湿盒于37℃中，一般保温 24～48h，观察抗原抗体
D. 沉淀带形成一种特异性的半渗透性屏 障，阻滞相同抗原抗体复合物，而允 许不同的分子通过。
1.双扩散用于疾病诊断： 以IBD诊断为例，中心孔加 IBD标准阳性血清，周围孔 分别加IBD标准抗原、生理 盐水、待检抗原1.2.3.4。
2.双扩散用于抗体检测： 以免疫鸡IBD抗体检测为例， 中心孔加IBD标准抗原，周 围孔分别加IBD标准阳性血 清、IBD阴性血清、待检血 清1.2.3.4。
【实验原理】
在电场作用下，抗原在含定量抗体 的离子琼脂糖中泳动后，如二者比例合 适时，可在短时间内出现锥形的沉淀峰， 形似火箭状，故又称为火箭电泳。此沉 淀峰的高度与抗原的浓度成正比，与抗 体的浓度成反比。
+
10mm
5mm
【操作步骤】
1.琼脂糖玻板的制备 30ml 1.5％的琼脂糖悬液（0.45g琼脂糖+ 0.025M的巴比妥缓冲液）→微波炉溶解→等 温度降到56℃时→加入200μl抗体→浇制琼 脂厚度为1～2mm抗体琼脂板。
实验三 双向免疫扩散试验
一 目的要求
1.复习巩固免疫化学的基本知识 2.熟练掌握免疫扩散法的操作步骤 3.掌握其在抗血清效价的测定和特异性
抗体的分析中的应用
二 实验原理
A. 琼脂糖的疏散网状结构有利于大分子 的自由迁移
B. 合适比例的抗原抗体结合后聚集形成 沉淀；
C. 沉淀的产生阻止抗原抗体复合物的自 由运动；
以3mm孔径打孔器打孔一排，孔距5mm。电 泳前各孔中加入抗原液，每孔20μL。
4．电泳：250伏1.5小时（滤纸搭桥）
5．结果判定
电泳结束后，取出琼脂板，加1％鞣酸 生理盐水浸泡后30分钟，观察与测定结果。
四 结果
五 讨论
试分析沉淀峰出现云雾状或圆形的原因 及解决方案。
源自文库
2. 抗原在稀释板中倍比稀释 1/1 、1/2、1/4、1/8、待测样品
首先加入
首先加入
首先加入
50ul缓冲液 50ul缓冲液 50ul缓冲液
1/1
1/2
1/4
1/8
100ul抗原 50ul1/1抗原 50ul1/2抗原 50ul1/4抗原
3．打孔、加样火箭电泳试验示意图 待琼脂凝固后，于距玻板一长边10mm处，
四 结果记录
A
Ag Ab
五 讨论
BCDEF
试讨论以上六种情况中抗原和抗体的浓 度差异以及在凝胶中的扩散率大小（用＞、 ＜、≈表示）
实验四 火箭免疫电泳
【目的要求】
1.复习巩固免疫化学的基本知识 2.熟练掌握火箭免疫电泳的操作步骤 3.掌握其在抗血清效价的测定和特异性抗
体的分析中的应用。
三 操作步骤
1．琼脂玻板的制备梅花型打孔图 将溶化的1.5%琼脂倒在培养皿中，使之
能将表面覆盖，制成厚度约2～3mm厚的琼脂 糖凝胶板，待冷却后根据所需形状打孔。 （切勿剧烈振荡融化后的琼脂糖，防止气泡 的出现。）
2．免疫扩散及结果观察
每孔加入 抗原/抗体10μl
注意：加样至孔满为止， 不可外溢。待孔内液体渗 入凝胶后即可放于温盒中。 湿盒于37℃中，一般保温 24～48h，观察抗原抗体
D. 沉淀带形成一种特异性的半渗透性屏 障，阻滞相同抗原抗体复合物，而允 许不同的分子通过。
1.双扩散用于疾病诊断： 以IBD诊断为例，中心孔加 IBD标准阳性血清，周围孔 分别加IBD标准抗原、生理 盐水、待检抗原1.2.3.4。
2.双扩散用于抗体检测： 以免疫鸡IBD抗体检测为例， 中心孔加IBD标准抗原，周 围孔分别加IBD标准阳性血 清、IBD阴性血清、待检血 清1.2.3.4。
【实验原理】
在电场作用下，抗原在含定量抗体 的离子琼脂糖中泳动后，如二者比例合 适时，可在短时间内出现锥形的沉淀峰， 形似火箭状，故又称为火箭电泳。此沉 淀峰的高度与抗原的浓度成正比，与抗 体的浓度成反比。
+
10mm
5mm
【操作步骤】
1.琼脂糖玻板的制备 30ml 1.5％的琼脂糖悬液（0.45g琼脂糖+ 0.025M的巴比妥缓冲液）→微波炉溶解→等 温度降到56℃时→加入200μl抗体→浇制琼 脂厚度为1～2mm抗体琼脂板。
实验三 双向免疫扩散试验
一 目的要求
1.复习巩固免疫化学的基本知识 2.熟练掌握免疫扩散法的操作步骤 3.掌握其在抗血清效价的测定和特异性
抗体的分析中的应用
二 实验原理
A. 琼脂糖的疏散网状结构有利于大分子 的自由迁移
B. 合适比例的抗原抗体结合后聚集形成 沉淀；
C. 沉淀的产生阻止抗原抗体复合物的自 由运动；
以3mm孔径打孔器打孔一排，孔距5mm。电 泳前各孔中加入抗原液，每孔20μL。
4．电泳：250伏1.5小时（滤纸搭桥）
5．结果判定
电泳结束后，取出琼脂板，加1％鞣酸 生理盐水浸泡后30分钟，观察与测定结果。
四 结果
五 讨论
试分析沉淀峰出现云雾状或圆形的原因 及解决方案。
源自文库
2. 抗原在稀释板中倍比稀释 1/1 、1/2、1/4、1/8、待测样品
首先加入
首先加入
首先加入
50ul缓冲液 50ul缓冲液 50ul缓冲液
1/1
1/2
1/4
1/8
100ul抗原 50ul1/1抗原 50ul1/2抗原 50ul1/4抗原
3．打孔、加样火箭电泳试验示意图 待琼脂凝固后，于距玻板一长边10mm处，