高效液相色谱法同时测定复方阿司匹林片中各种有效成分及游离水杨酸

复方阿司匹林片剂（ＡＰＣ）具有解热镇痛、消炎 和抗风湿作用，其三个有效成分分别是Ａ－阿司匹林 （乙酰水杨酸）、Ｐ －非那西汀（乙酰对氨苯乙醚）和 Ｃ－咖啡因（１，３，７—三甲基黄嘌呤）。中国药典［１］中采 用容量分析法测定这三个成分；赵怀清等［２］用胶束薄 层色谱法、罗国安等［３］用ＰＬＳ －紫外分光光度法、左 文坚等［４］用区带毛细管电泳法分别对三个成分进行了 测试研究。由于阿司匹林类药品在生产和储运过程 中容易吸潮分解生成水杨酸，此外样品在溶解和分 析过程中有时也有降解现象［５，６］，因此在 ＡＰＣ 片的分 析测试中不可忽略其水解产物水杨酸的干扰因素。 ＨＰＬＣ 技术在药物分析中有很多应用，以往对 ＡＰＣ 的 测定很少考虑其降解因素。本文实验发现，用二氯甲 烷－乙腈混合溶剂溶解样品，在甲醇－水体系中加 入少量乙酸和磷酸作为流动相，既能有效避免阿司 匹林的进一步降解，又可以将三个组分与水杨酸很 好分离，据此建立的 ＨＰＬＣ 法可以同时测定 ＡＰＣ 片 中各种成分。
３ 结论
３．１ 样品溶剂 通过对 ＡＰＣ 片在多种溶剂中溶解性和稳定性的比
较发现，二氯甲烷－乙腈（Ｖ：Ｖ＝３：２）溶液对 ＡＰＣ 片的 溶解性和稳定性均较好，实验表明，在 ４８ｈ 内测定样 品溶液，各组分峰的积分面积数值基本不变，可以认 为阿司匹林无明显的降解现象。 ３．２ 流动相
反相色谱中常用的流动相是甲醇－水体系和乙腈 －水体系。本实验发现，阿司匹林在中性含水体系中 水解严重，而在酸性含水体系中水解现象可以得到抑 制。本实验以甲醇—水－乙酸－磷酸（体积比 ４６．０： ５２．０：１．５：０．５）为流动相，既可使各组分有很好的分离
准确移取 ４．００ｍＬ 样品储备溶液于 ２５０ｍＬ 容量瓶 中稀释至刻度制成样品测试溶液进行分析测定，用外
表３ 市售正痛片的测定结果 Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｏｌｄ ＡＰＣ ｔａｂｌｅｔ
成 分 测定浓度 ／ μ ｇ ·ｍ Ｌ －１ 测定每片含量 ／ ｍ ｇ 处方每片含量 ／ ｍ ｇ
将准确称重的市售 ＡＰＣ 片 ２０ 片（９．８７４１ｇ）于乳 钵中研细混匀，准确称取相当于１片的重量（０．４９３７ｇ） 置于干净烧杯中，用适量二氯甲烷－乙腈（Ｖ：Ｖ＝３：２） 充分溶解并滤除残渣后，转移至 ５００ｍＬ 容量瓶中稀至 刻度。 １．３ 色谱条件的选择
本实验选择的色谱条件为：流动相是甲醇—水— 乙酸—磷酸，体积比４６：５２：１．５：０．５；紫外检测波长为 ２７９ｎｍ；柱温 ３５℃；洗脱速度为 ０．８ ｍＬ·ｍｉｎ－１。 １．４ 测定方法
研究论文
３．３ 检测波长 用三个组分的对照品进行紫外扫描可见，三个组
分的最大吸收波长各不相同；而在 ２７９ｎｍ 处三个组分 的峰型相对比较适中，虽然此时三个组分皆非最大吸 收，但能较好地兼顾各组分的同时测定。
参考文献
［１］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典二部［Ｍ］． 北京：化 学工业出版社，２００５：２８３－３３５．
［４］ 左文坚，内仓和雄． 正痛片的毛细管区带电泳色谱分析［Ｊ］． 药物分析杂志，１９９８，１８（增刊）：１７４－１７６．
［５］ 王晓燕，崔福德，马汝敏． 高效液相色谱法测定复方阿司 匹林片剂的含量［Ｊ］． 沈阳药科大学学报，２００２，１９（１）： ３１－３４．
［６］ 田军，陈新善，王瑞冬． ＨＰＬＣ 法测定阿司匹林咀嚼片中 游离水杨酸含量［Ｊ］． 第一军医大学学报，２００３，２３（７）： ７４４－７４７．
１ 实验
１．１ 仪器和试剂 岛津 ＬＣ － １０Ａ 高效液相色谱仪；十八烷基键合
固定相色谱柱（岛津 ＶＰ－ＯＤＳ １５０Ｌｘ４．６）；２０ μ Ｌ 定量 进样管；紫外检测器；甲醇和乙腈为色谱纯；二氯甲 烷、乙酸和磷酸为分析纯；Ａ、Ｐ、Ｃ 和水杨酸的对照
品为分析纯；复方阿司匹林片为市售品。 １．２ 对照品标准溶液和样品溶液的制备 １．２．１ 对照品标准溶液的制备
分别准确称取水杨酸、阿司匹林、咖啡因和非那 西汀对照品适量，分别用二氯甲烷－乙腈（Ｖ：Ｖ＝３：２） 溶解制成浓度为１．００ｍｇ·ｍＬ－１的单一对照品标准溶液。 １．２．２ 混合对照品标准溶液的制备
按处方配比准确称取阿司匹林 ０．２２６８ｇ、咖啡因 ０．０３５０ｇ和非那西汀０．１６２０ｇ，置于同一干净烧杯中，用 二氯甲烷－乙腈（Ｖ：Ｖ＝３：２）溶解后转入 ５００ｍＬ 容量瓶 中，稀至刻度制成浓度为０．８４７６ｇ·Ｌ－１的混合对照品标 准溶液。其中阿司匹林、咖啡因和非那西汀的浓度分 别为 ０．４５３６ｇ·Ｌ－１、０．０７００ｇ·Ｌ－１ 和 ０．３２４０ｇ·Ｌ－１。 １．２．３ 样品储备溶液的制备
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ Ｆｒｅｅ Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ａｓｐｉｒｉｎ Ｔａｂｌｅｔ
ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ｋａｏｗｅｎ Ｚｈｏｕ， Ｙｕｈｏｎｇ Ｌｉｕ， Ｘｉａｏｌｉｎ Ｊｉ， Ｂｉｎ Ｚｈａｎｇ
用注射器将适量待测物溶液（多于 ２０ μＬ）注入
＊ 作者简介：周考文（１９６４ —），副教授，主要从事分析化学的教学和科研工作。Ｔｅｌ：０１０－６７３７３０５４；Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｋｗ＠ｂｊ１６３．ｃｏｍ
３１
研究论文
生命科学仪器 ２００５ 第 ３ 卷 ／ 第 ６ 期
定量管，通过六通阀切入色谱流路进行分离测定，以 色谱峰面积进行外标法定量。
表１ 各组分的线性关系和精密度 Ｔａｂｌｅ １ Ｌｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ＲＳＤｓ ｏｆ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
组分
回归方程
相关系数 相对标准偏差 ／ ％
阿 司 匹 林 Ｙ＝１４１５．５Ｘ ＋ １１２７８ ０．９９９８
０．５５
咖 啡 因 Ｙ＝６５６．２Ｘ ＋ ６６３５．２ ０．９９９６
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｓｐｉｒｉｎ （Ａ）， ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎｅ （Ｐ） ａｎｄ ｃａｆｆｅｉｎｅ （Ｃ） ｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＨＰＬＣ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｏｎ ａ ＨＰＬＣ ｃｏｌｕｍｎ （Ｃ１８， ＶＰ－ＯＤＳ １５０Ｌｘ４．６） ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ （Ｖ／Ｖ ＝ ４６：５２：１．５：０．５） ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ （υ＝０．８ｍＬ／ｍｉｎ） ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ２７９ｎｍ． Ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ Ｙ＝１４１５．５Ｘ ＋ １１２７８ （ｒ＝０．９９９８） ｆｏｒ Ａ （０．２７￣８０．２７μｇ．ｍＬ－１）， Ｙ＝１７３０．８Ｘ ＋ ６２４．７ （ｒ＝０．９９９６） ｆｏｒ Ｐ （０．１９￣５７．３４μｇ．ｍＬ－１）， ａｎｄ Ｙ＝６５６．２Ｘ ＋ ６６３５．２ （ｒ＝０．９９９６） ｆｏｒ Ｃ （０．０４￣１２．３９μｇ．ｍＬ－１）． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ９９．８４％ ｆｏｒ Ａ， １００．２９％ ｆｏｒ Ｐ ａｎｄ １００．５７％ ｆｏｒ Ｃ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｌｌｏｗｓ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ＡＰＣ ｔａｂｌｅｔｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔ， Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， Ａｓｐｉｒｉｎ， Ｃａｆｆｅｉｎｅ， Ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎｅ， Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ
表２ 回收率实验 Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｔｅｓｔｓ
３２
生命科学仪器 ２００５ 第 ３ 卷 ／ 第 ６ 期
度，又能保证组分在 ２ 小时内无水解现象。
图２ 实际样品的色谱流出曲线 Ｆｉｇ． ２ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １－ 阿司匹林，２－ 水杨酸，３－ 咖啡因，４－ 非那西汀
பைடு நூலகம்
０．９１
非 那 西 汀 Ｙ＝１７３０．８Ｘ ＋ ６２４．７ ０．９９９６
０．５８
２．２ 准确度 用混合对照品标准液配制 ３ 个不同浓度的标准样
品，用以上建立的方法进行测定，结果见表 ２。 从表中可见，阿司匹林的回收率为 ９ ８ ． ５ ６ ％ ￣
１０１．５７％，平均值为 ９９．８４％；非那西汀的回收率为 ９８．９０％￣１０１．５７％，平均值为 １００．２９％；咖啡因的回收 率为 ９９．２３％￣１０１．５１％，平均值为 １００．５７％。表明方法 的准确度很好。 ２．３ 实际样品测定
阿司匹林 咖啡因
非那西汀
６．６４６ １．１３９ ５．１４２
２０７．７ ３５．６ １６０．７
２２６．８ ３５．０ １６２．０
由表 ３ 可见，咖啡因和非那西汀的测定含量与处 方含量十分接近，而阿司匹林的测定含量明显低于处 方含量。这主要是由于阿司匹林部分降解后转变成了 水杨酸，致使阿司匹林的含量减少。在样品的色谱图 （图 ２）中可以明显看到水杨酸的存在。此外，同样用 外标法对水杨酸进行定量分析，测得水杨酸含量为１５． １ ｍｇ·片 －１。
标法定量。平行测定五次的平均结果见表 ３ 所示。 样品中组分含量的计算公式为：
２ 结果和讨论
２．１ 线性关系和精密度 将０．８４７６ ｇ·Ｌ－１的混合对照品标准溶液分别稀释
成 １５０．０、８０．０、５０．０、２５．０、１０．０、５．０、２．５、１．０、 ０．５ μｇ·ｍＬ－１ 的标准系列溶液，在选定的色谱条件下进 样测定；由于混合对照品溶液中阿司匹林、非那西汀 和咖啡因的质量浓度比为０．２２６８：０．１６２：０．０３５，据此可 以准确算出标准系列中三个组分的准确质量浓度，分 别以各组分的峰面积对其质量浓度做回归方程可以发 现都有很好的线性关系。此外，用 １０ μｇ·ｍＬ－１ 的标准 系列溶液连续平行测定 １２ 次，计算其相对标准偏差。 有关结果见表 １。
生命科学仪器 ２００５ 第 ３ 卷 ／ 第 ６ 期
研究论文
高效液相色谱法同时测定复方阿司匹林片中 各种有效成分及游离水杨酸
周考文 ＊，刘玉红，纪晓琳，张斌
（北京联合大学生物化学工程学院，北京 １０００２３）
摘要 利用 ＨＰＬＣ 法同时测定 ＡＰＣ 片中阿司匹林（Ａ）、非那西汀（Ｐ）、咖啡因（Ｃ）和游离水杨酸的含量。在 Ｃ１８ 柱 上以甲醇—水－乙酸－磷酸（体积比 ４６．０：５２．０：１．５：０．５）为流动相，在流速 ０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１ 和检测波长 ２７９ｎｍ 时，三种有效 成分和游离水杨酸都能被很好地检测。Ａ 组分在 ０．２７￣８０．２７ μｇ·ｍＬ－１ 范围内的回归方程为 Ｙ ＝ １４１５．５Ｘ ＋ １１２７８，相关 系数为 ０．９９９８，平均回收率为 ９９．８４％；Ｐ 组分在 ０．１９￣５７．３４ μｇ·ｍＬ－１ 范围内的回归方程为 Ｙ ＝ １７３０．８Ｘ ＋ ６２４．７，相关 系数为 ０．９９９６，平均回收率为 １００．２９％；Ｃ 组分在 ０．０４￣１２．３９ μｇ·ｍＬ－１ 范围内的回归方程为 Ｙ ＝ ６５６．２Ｘ ＋ ６６３５．２，相关 系数为 ０．９９９６，平均回收率为 １００．５７％。方法适用于 ＡＰＣ 片中各成分的同时测定。 关键词 复方阿司匹林片，高效液相色谱法，阿司匹林，咖啡因，非那西汀，水杨酸
［２］ 赵怀清，王学亚，杨丽，等． 胶束薄层色谱法同时测定ＡＰＣ 片中 ３ 组分含量［Ｊ］． 沈阳药科大学学报，２００１，１８（５）： ３３８－３４０．
［３］ 罗国安，兰其田，王镇浦． ＰＬＳ －紫外分光光度法测定复 方阿司匹林片中３组分含量［Ｊ］． 药学学报，１９８９，２４（９）： ６８４－６８９．