常见病原菌的病原学检查

SS或EMB培养基生长现象观察
EMB菌落 的形态特征 大肠杆菌 伤寒杆菌 SS菌落的 形态特征
痢疾杆菌 变形杆菌
肠道杆菌形态学观察
（二）肠道杆菌生化反应及动力试验
• 材料： • 1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、
变形杆菌培养物 • 2、培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反应 管、半固体培养基 • 3、其他：接种环、接种针、酒精灯等。
克氏双糖斜面培养基生化反应原理
• •
•
该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为1:10，并含硫酸 亚铁和指示剂酚红。 大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以上层呈黄色， 直立段有气泡存在． 肠道病原菌不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄 糖产酸，使PH下降，因斜面部分先呈现黄色，由于葡萄 糖含量少，所生之酸接触空气而氧化，又因细苗的生长 利用含氮物质生成碱性化合物，所以斜面部分后来又变 成红色．由于直立段(底层)呈厌氧状态，细菌发酵葡萄 糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黄色。大肠杆菌产气， 有动力(沿穿刺线向周围扩散生长)伤寒杆菌有动力，而 痢疾杆菌则没有动力． 某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能分解培养基中 含硫氨基酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚 铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，而痢疾杆菌不 产生硫化铁．
伊红美兰琼脂培养基（ＥＭＢ）选 择培养原理：
• 此培养基为弱选择性培养基。以伊红美兰作指示剂． • （１）大肠杆菌分解乳糖产酸时染上伊红，因为伊红
•
和美兰结合所以菌落不是红色而呈现紫黑色，且有金 属光泽(大肠杆菌)或棕色(产气杆菌)，扁平混浊，而 较大边缘色淡的菌落。 （２）致病菌的菌落为无色半透明、园形，中等大小， 边缘整齐的菌落，在靠近大肠杆菌的可疑菌落往往呈 现淡兰色。
方法：
• 1、分离培养、观察菌落特征：分别取三种
葡萄球菌培养物，用分离划线方法接种血 平板，37℃培养18-24h以后观察结果。
• 2、革兰染色、观察形态学特征：取葡萄球
菌培养物少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察
• 1、菌落观察 • 2、形态学观察
（二）葡萄球菌生化反应
• 葡萄球菌触酶试验：
H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：葡萄球菌培养物 试剂：3%过氧化氢 方法：见右图 结果：见右图
葡萄球菌生长现象及生化反应结果观察
血平板 生长现象 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 形态学 特 征
触酶 试验
柠檬色葡萄球菌

二 、肠道杆菌
（一）肠道杆菌的形态、染色及在选择培养基 上的生长情况 • 材料： • 1、菌种：粪便标本或大肠杆菌、伤寒杆菌、 痢疾杆菌、变形杆菌培养物 • 2、培养基：SS平板、EMB • 3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液
克氏双糖铁
生化反应管
葡萄糖 乳糖
硫化氢
尿素 H2S
动 葡萄糖 乳糖
力
大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌
结果观察
克氏双糖铁
生化反应管
乳糖
葡萄糖 硫化氢 黄 色 黑 黄 色 色 黄 色 黑 色
尿素 H2S
动 葡萄糖 乳糖
力
大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌
黄 色
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-
-
-
+
+ +
+
+ + +
红 色 红 色 红 色
生化反应管原理（1）
自铁质双糖培养基上取菌苔作斜面接种，置37℃恒 温箱内培养18—24小时．同时作镜检观其是否为纯培 养． 变形杆菌含有尿素酶，经2—4小时培养能分解培养 基中较多量尿素产生大量的氨，使培养基PH变为硷 性，而呈现红色。即阳性反应，阳性反应可弃之。 痢疾杆菌属及沙门氏菌属之细菌不能分解尿素而不呈 现碱性反应即阴性反应，阴性反应 需继续作生化反 应及血清学试验。
实验九
常见病原菌的病原学检查
实验目的要求
• 1、掌握常见病原菌的主要生物学性状 • 2、熟悉常见病原菌有关的鉴定方法
主要内容：
• 病原性球菌 • 肠道杆菌
病原性球菌
•金黄色葡萄球菌 •白色葡萄球菌 •柠檬色葡萄球菌
一、葡萄球菌
（一）葡萄球菌的形态、染色和血平板上的生 长情况 • 材料： • 1、菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、 柠檬色葡萄球菌培养物 • 2、培养基：血平板 • 3、其他：无菌生理盐水、载玻片、革兰染液
方法：
• 1、分离培养、观察菌落特征：分别取四的
培养物，用分离划线方法接种SS平板或EMB 培养基37℃培养18-24h以后观察结果。
• 2、革兰染色、观察形态学特征：取各菌培
养物少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察
• 1、菌落观察 • 2、形态学观察
SS平板
沙门氏菌：无色透明菌落，有黑色中心 志贺氏菌：无色透明菌落。
生化反应管原理（3）
• 硫化氢试验：某些细菌能分解培养基
中硫氨基酸（如胱胺酸）产生硫化氢、 硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合 形成黑色的硫化铁， • 变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能产生硫 化铁 • 痢疾杆菌不产生硫化铁。
方法：
• 1、克氏双糖铁斜面培养基：分别取四种肠道杆菌
的培养物，用穿刺加斜面划线接种方法接种于4支 克氏双糖斜面培养基，37℃培养18-24h以后观察 结果。
SS琼脂培养基选择培养原理：
• 此培养基是强选择性培养基中性红为指示剂，酸
性时呈现红色，碱性时呈淡黄色。 在此培养基上，大肠杆菌属的菌落大而混浊，因 发酵乳糖，菌落呈现红色． • 志贺氏菌属和沙门氏菌属的菌落形态为光滑无色 透明，园形、中等大小，边缘整齐的菌落。由于 宋内氏痢疾杆菌有分解胆盐中的某些物质和发酵 乳糖(产酸)较慢等特点，而使菌落呈淡红或红色 的较大或边缘不整齐的扁平菌落。某些沙门氏菌 属及变形杆菌因 产生硫化氢，使菌落呈现黑色 中心。
• 2、生化反应管：取尿素反应管、硫化氢反应、葡
萄糖反应、乳糖反应管，每种反应管分别穿刺接 种大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌， 37℃培养18-24h以后观察结果。
• 3、动力试验：分别取四种肠道杆菌的培养物，用
穿刺接种方法接种于4支半固体培养培养基，37℃ 培养18-24h以后观察结果。
结果观察
• 尿素试验：此培养基鉴别沙门氏菌和变形杆菌属细菌， •
生化反应管原理（2）
• 糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖
类，产酸产气。不同的细菌对各种糖类的分 解不同，因而可以利用糖发酵进行各种细菌 (特别是肠道细菌)的鉴别。 • 大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。 • 志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解 乳糖，但能分解葡萄糖产酸。 • 宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解 葡萄糖产酸。
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其他生长现象的观察
• 色素：脂溶性色素与水溶性色素的区别
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌
• 迁涉生长现象的观察
变形杆菌