植物内生菌分离处理方法

d植物内生菌分离处理方法

文献材料前处理第一次消毒第二次消毒（含三

消）

处理对照培养基

刘明志，2011 南方红豆杉

的老树皮、幼

茎、叶

截成2～3 cm长的

小段，去除树皮层

75%酒精中浸泡30

s

0．1%升汞溶液浸泡

8 min，无菌水冲洗

3～5次

研磨成匀浆液，倾

倒于PDA上

切成0．5 cm左右的

块，接种于有100 mg L

－1青霉素和链霉素的

PDA固体培养基表

面。每皿10块

刘金花2011 黄花蒿的根，

茎，叶

叶切成1cm2,茎和

叶切成1cm左右小

段（两端皆有切口）

将根，茎，叶一次

用75%酒精浸

1min

1%的次氯酸钙溶液

浸泡1min,用无菌水

冲洗5次

置于含双抗的V A

培养基平板培养

待切口处长出菌落后

转至PDA培养基进行

内生真菌的分离

宋培勇2011 珙桐茎、叶和

叶柄

将采集的新鲜珙桐

的茎、叶和叶柄分

别用流水冲洗, 风

干表面水分, 剪成

小块或小段,

无菌水漂洗2 次

75%酒精浸泡 1

min

再用2%

NaClO 溶液中浸泡

3 min, 转入75%酒

精中浸泡30 s,

接着用无菌水漂洗

3 次,

取最后一次漂洗液涂布

NA 平板作为对照

平放于NA 平板上,

28 °C培养2−3 d

孙传伯2011 台湾7303毛

豆全株

采回的样本用自来

水洗净, 并用无菌

纸吸干水分, 并用

无菌纸吸干水分,切

取支根110 cm长的

小段, 须根切成

115 cm的小块

用75% 酒精浸泡

5m in、7m in、10m

in

分别用0.1% 升汞

溶液处理4 m in、6

m in、8 m in进行表

面灭菌,此试验分别

重复3次。最后用

无菌水冲洗4次,。

最后用无菌水冲洗

4次

将组织块在研钵

中充分研磨成匀

浆

最后一次冲洗液涂3种

不同培养基平板, 26~ 28e

下培养2~ 3d, 筛选出最

佳消毒时间和培养基, 将

表面消毒彻底棉花根部

切块放入灭菌研钵中用

无菌水冲洗4次,取上清

液涂抹于培养基上。以无

菌水冲洗为对照试验。

取上清匀浆涂抹于3

种不同培养基上, 取

匀浆涂布于不同培养

基平板, 每浓度重复

3次, 然后将培养皿置

于26~ 28e 恒温箱中

培养2~ 3d, 观察培养

出的菌落形态

张鑫2011 植物圣罗勒

的健康

叶子

将叶子用流水冲洗

10 min

1% 的次氯酸

钠中浸泡10

min

0．02 mol / L、pH

7．0 的无菌磷酸

钾缓冲液( PB) 漂

洗

4 次

加无菌水将材料

研磨

涂布培养

李铭, 2011 石耳目地衣为了诱导产孢，黑化菌

株在光照/黑暗( 12 h∶

12h) 条件下，于2%的

PDA

培养基上，18℃下培

养 3 个月

刘杰凤2011 健康的小白

菜，染病的小

白菜根，茎，

叶

流水冲洗干净，剪

成小段

75％酒精中浸泡3

min

10％次氯酸钠浸泡

茎为8 min，根和叶

由于气孔较茎大，

浸泡5 min即可，然

后用无菌水浸泡多

次，每次3 min

无菌条件下用适

量的

PBS

缓冲液捣碎

以最后一次的漂洗液作

对照

，30 ℃

下培养

一个星期

搅拌后静置3 min，取

上清液0．5 mL分别

涂布于分离培养基平

板上，每种材料做3

次平行

朱士茂2011 新采集的银

杏枝条，叶子

和根

在自来水中冲洗干

净，然后将枝条和

根截成 3 －4cm

长，将叶子和叶柄

分开，分别将根，

枝，叶放在不同的

灭菌后的广口瓶中

（一），根的表面

灭菌: 0. 1%的土温

20 消毒1min，无

菌蒸馏水冲洗 2

次。

（二）枝，叶和叶

柄：75% 的乙醇

消毒30s，无菌蒸

馏冲洗3 次

(一）,根：75%的乙

醇消毒30s，无菌蒸

馏水冲洗 2 次，0.

1% 升汞消毒

5min，无菌蒸馏水

冲洗 5 次。

(二）枝，叶和叶柄：

0. 1% 升汞消毒

7min，无菌蒸馏水

冲洗 5 次

茎，将其表皮剥

离，用无菌小刀纵

切表皮取其中间

的部分，然后将其

切成0. 5cm ×0.

5cm 大小

叶和叶柄，用研钵

将叶磨碎( 内放

石英砂和生理盐

水) 然后用无菌

移液管吸取0.

2ml 放入培养皿

中

①将以上接入的每种平

皿按相同的方法接入

5min 后用无菌镊子取

出;②用无菌蒸馏水冲洗

已表面灭菌后的材料，然

后将此液体移入培养基

中，培养观察。

KB 培养基:

PL 培养基:

PDA 培养基:

肖淑贤2011. 长势好、无病

害的植株

在自来水中冲洗干

净

采用升汞、乙醇、

H2O2、次氯酸钠等

表面消毒剂进行消

毒，无菌水冲洗

直接切取植物组

织或榨取植物组

织汁液稀释

王剑峰2011 取生长15

天马铃薯

无表面灭菌方法马铃薯内生菌单菌落

的分离取生长15 天

马铃薯LK99 组培苗,

剪成长度约 1.0 cm

的带腋芽茎段接种于

PSA 培养基上,分别于

光下(28℃、2200Lx、

16hr 光/8hr 黑暗)或

28℃暗培养,3 天后光