大豆分离蛋白(1)

壳聚糖——大豆分离蛋白复凝聚反应的研究
一、实验目的：
1、PH对壳聚糖、大豆分离蛋白溶解性的研究；
2、PH、温度、时间、壳聚糖、大豆分离蛋白配比和离子强度等对壳聚糖——大豆分离蛋白
复凝聚反应的影响。

二、实验原理：
利用紫外可见分光光度计法测吸光度。

复凝聚法是指以两种带相反电荷的壁材物质做包埋
物,芯材分散于其中后,通过改变体系的pH值、温度或水溶液浓度,使两壁材相互作用形成一
种复合物,导致溶解度下降而凝聚析出形成微胶囊。

壳聚糖是甲壳素的脱乙酰产物，多糖链的侧链由于含有大量的氨基和羟基可以发生多种化
学反应，比如烷基化、酰基化反应等等，同时，氨基在溶液中亦可以正离子化，形成聚阳离
子。

大豆分离蛋白是一类重要的球状蛋白，等电点为4.5。

因此，当壳聚糖和蛋白质在溶液
中混合时，他们之间可发生静电相互作用，在特定环境中发生自组装行为形成复合粒子。

本
论文以壳聚糖和大豆分离蛋白为原料，研究了它们在溶液中的自组装行为，并制备了它们的
复合物。

三、仪器与药品：
仪器：水浴锅、PH试纸、分析天平、紫外可见分光光度计、电子天平；
药品：壳聚糖、大豆分离蛋白、1mol/L氢氧化钠溶液、1mol/L盐酸溶液、饱和氯化钠溶液。

四、实验步骤：
分别制备1%壳聚糖和1%大豆分离蛋白溶液备用
1.pH对壳聚糖、大豆分离蛋白溶解性的影响
(1).取12支相同试管，加入等量蒸馏水，利用盐酸及氢氧化钠溶液调pH分别为3至8，pH
以0.5为梯度设置试管；向各支试管中分别加入5g壳聚糖，充分震荡，静置，在最大吸收
波长处测量吸光度，观察壳聚糖在各个试管中的溶解度性。

表1 溶解性和pH值的关系
试管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 pH值 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 空白溶解性
吸光度
(2). 取12支相同试管，加入等量蒸馏水，利用盐酸及氢氧化钠溶液调pH分别为3至8，pH
以0.5为梯度设置试管；向各支试管中分别加入5g大豆分离蛋白，充分震荡，静置，在不
同波长处测量吸光度，观察壳聚糖在各个试管中的溶解度性
表2 溶解性和pH值的关系
试管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 pH值 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 空白溶解性
吸光度
2.pH、温度、时间、壳聚糖/大豆分离蛋白配比和离子强度对壳聚糖—大豆分离蛋白复凝聚
反应的影响。

①pH
取11支相同试管，向各支试管中分别加入5ml1%壳聚糖和1%大豆分离蛋白，利用盐酸及
氢氧化钠溶液调pH分别为3至8，pH以0.5为梯度设置试管；充分震荡，静置，随后利用
紫外分光光度计测量各试管在600nm处的吸光度。

表1 复凝聚反应和pH值的关系
试管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 空白pH值 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8
吸光度
②温度
取5支试管，加入等量蒸馏水，在最佳pH、壳聚糖和大豆分离蛋白的配比为1:4时，在25、
35、45、55、65的温度下水浴10min，观察溶液在600nm处的吸光度，以得出其浊度。

表2 复凝聚反应与温度之间的关系
试管 1 2 3 4 5 6
温度/℃25 35 45 55 65 室温
吸光度
③时间
取6支试管，加入等量蒸馏水在最佳pH、壳聚糖和大豆分离蛋白的配比为1：4和最佳温度的处理下，水浴10、20、30、40、50、60分钟后测量各支试管在600nm处的吸光度，以得出其浊度。

表3 复凝聚反应与时间之间的关系
试管 1 2 3 4 5 6 7
时间
10 20 30 40 50 60 0
/min
吸光度
④壳聚糖和大豆分离蛋白配比
取6支试管，在最佳pH、温度和处理时间下，分别向各支试管中加入配比为1：1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6（1=2ml）的壳聚糖和大豆分离蛋白及等量蒸馏水，观察其在600nm处的吸光度，以得出其浊度。

表4 复凝聚反应与配比之间的关系
试管 1 2 3 4 5 6
配比（1=2ml）1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 吸光度
⑤离子强度
取6支试管，在最佳pH、配比、温度和处理时间下，向各个试管中加入等量壳聚糖—大豆分离蛋白，1ml蒸馏水，然后在各支试管中分别加入0、0.003、0.005、0.01、0.05、0.1g Nacl 固体，观察其在600nm处的吸光度，以得出浊度。

表5 离子强度对复凝聚反应的影响
试管 1 2 3 4 5 6
Nacl/g 0 0.003 0.005 0.01 0.05 0.1
吸光度。