细菌鉴定学习

现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应.你怎样运

传统的细菌革兰氏染色法操作繁琐，初学者不易掌握，寻找一种简便方法。方法：玻璃片上将细菌与碱液混合，用接种环或接种针往上挑，观察有无丝状物出现，我们把它叫作“细菌拉丝实验”。结果：用本法鉴别细菌革兰氏染色性质，G＾－菌有丝状物出现，即拉丝实验阳性，G＾＋菌无丝状物，拉丝实验阴性经过对照使用，本法具有快速，准确，简便，结果易判断，成本低廉等优点，值得推广应用。

由于细菌细胞壁的结构不同，革兰氏染色法可使有的细菌染上初染的的紫色，为革兰氏阳性细菌，有的细菌染上复染的的红色，为革兰氏阴性细菌。大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在。枯草杆菌是革兰氏阳性菌，染色后为紫色，细菌形态为杆状，比大肠杆菌大，可排成链状的，有的菌体里有椭圆芽孢（无色）或在视野中有散在的芽孢。

实验十肠杆菌科

肠杆菌科(Enterobacteriaceae)是一大群寄居于人和动物肠道中、生物学性状相似的革兰阴性杆菌。多数为肠道的正常菌群，但在机体免疫力低下或寄居部位发生改变时可引起感染。根据其生化反应、血清学试验、DNA同源性等可将肠杆菌科分为120多个菌种，其中与医学密切相关的有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属等。

一、大肠埃希菌

大肠埃希菌(E.

coli)俗称大肠杆菌，是寄居于人和动物肠道的正常菌群。当机体抵抗力下降、该菌侵入肠外组织或器官，可引起急性炎症或继发感染；有些血清型可引起腹泻。从水和食品中检出较多大肠杆菌时，可判断它们已被粪便污染。因此，大肠杆菌常被作为饮水、牛乳及食品的卫生学检测指标。

（一）形态与培养特性

【材料与方法】

1．大肠杆菌革兰染色标本片。

2．大肠杆菌普通琼脂平板、SS平板、中国蓝平板、伊红美蓝(EMB)平板培养物。

【结果】

1．大肠杆菌为革兰阴性、中等大小杆菌，两端钝圆或稍弯曲，呈分散排列。

2．菌落特征(表10-1)。

表10-1 大肠杆菌在普通琼脂平板及选择鉴别培养基上的菌落特征

培养基菌落特征

普通琼脂平板圆形，中等大小，灰白，整齐，光滑菌落

SS平板呈红色

中国蓝平板呈蓝色

伊红美蓝平板呈紫黑色，有金属光泽

（二）生化反应

【材料与方法】

1．取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管，37℃培养24h，观察结果。

2．取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于双糖铁培养基，37℃培养24h，观察结果。

3．靛基质产生、甲基红、VP、枸橼酸盐利用试验(IMViC试验)，见实验四。

【结果】

大肠杆菌生化反应结果(表10-2)。

表10-2 大肠杆菌及产气杆菌5种糖发酵、双糖铁、IMViC试验结果

上层下层

葡乳麦甘蔗吲哚甲基红 VP 枸橼酸盐

乳 H2S 葡动力

大肠杆菌⊕⊕⊕⊕ d + - ⊕ + + + - -

产气杆菌⊕⊕⊕⊕ + + - ⊕ + - - + +

二、沙门菌属

沙门菌属(Salmonella)为一群生化反应、抗原结构相似的革兰阴性杆菌，血清型别繁多，对人致病的有伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌、肠炎沙门菌，鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌等，可引起人致伤寒、副伤寒、胃肠炎和败血症等疾病。（一）形态与培养特性

【材料与方法】

1．伤寒沙门菌革兰染色标本片、鞭毛染色标本片。

2．伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌在普通琼脂平板，中国蓝平板，SS

平板，伊红美蓝平板18~24h培养物。

【结果】

1．伤寒沙门菌为革兰阴性杆菌，分散排列，鞭毛呈粗大、大波浪形。

2．菌落特征：伤寒、副伤寒沙门菌菌落特征一致(表10-3)。

表10-3 伤寒、副伤寒沙门菌在普通琼脂平板、选择鉴别培养基上的菌落特征培养基菌落特征

普通琼脂平板圆形，中等大小，灰白，半透明，边缘整齐光滑

SS平板较小，淡黄色，半透明

中国蓝平板较小，淡红色半透明

伊红美蓝平板较小，无色，半透明

（二）生化反应

【材料与方法】

1．取伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管，37℃培养24h，观察结果。

2．取伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于双糖铁培养基，37℃

培养24h，观察结果。

3．吲哚试验、尿素分解试验见实验四。

【结果】

生化反应结果(表10-4)。

表10-4 伤寒、副伤寒杆菌主要生化反应结果

细菌葡乳麦甘蔗动力 H2S 吲哚尿素

伤寒杆菌+ - + + - + + - -

甲型副伤寒杆菌⊕ - ⊕⊕ - + d - -

肖氏沙门菌⊕ - ⊕⊕ - + + - -

（三）肥达(Widal)试验

【原理】

用已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与待检血清作定量凝集试验，以测定待检血清中有无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考，一般间隔5～7d重复采血检查，如抗体效价随病程进展而上升，即有诊断价值。

【材料】

1．伤寒沙门菌O、H抗原菌液，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌H抗原菌液，生理盐水，待检血清。

2．试管、1ml吸管、试管架、37℃水浴箱等。

【方法】

1．取清洁试管32支，分成4排，每排8支，依次编号(表10-5)。

2．于试管内各加入生理盐水0.5ml。

3．在每排第1管各加1∶

10的待检血清0.5ml，用1ml吸管吹吸数次，充分混匀，吸出0.5ml注入第1排第2管作对倍稀释，依次稀释至第7管，从第7管吸出0.5ml弃去，第8管为对照。同法将第2、3、4排依次作对倍稀释。

表10-5 肥达氏反应操作程序 (单位：ml)