生化论文
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果蔬成分生化分析———萝卜和盘菜的成分分析
——12生本董芳芳 12112314107
引言:果蔬是我们生活中很常见的食物,大多数果蔬中含有维生素
C、总糖、原还糖、蛋白质等多种有机物。这些成分对植物的生
理活动起到很大的作用,同时也是我们人体所需的营养物质,不
同种类的果蔬中这些成分的含量是不同的。本实验选取萝卜和盘
菜作为研究对象,对其维生素C、总糖、原还糖、蛋白质含量及
过氧化物酶活性进行分析,通过实验了解萝卜和盘菜在这些成分
上含量的不同,并掌握滴定法、蒽酮比色法、考马斯亮兰法、聚
丙烯酰胺凝胶电泳法等实验方法。
1、实验材料:市售新鲜的萝卜和盘菜
2、实验试剂和仪器
2,1果蔬中维生素C的含量测定
试剂:1%草酸溶液2%草酸溶液、维生素C标准溶液、氧化型
0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液
仪器:微量滴定管及架、台秤、50ml量筒、1ml及10ml吸管、100ml锥形瓶、剪刀、滤纸
2.2果蔬中总糖及还原糖含量的测定
试剂:蒽酮试剂、标准葡萄糖溶液(0.1mg/ml)、6ml/molHCI溶液、20%NaOH溶液
仪器:吸管1.0(×2) 5.0ml(×1) 0.1ml(×1) 0.2ml(×1) 0.5ml(×3)试管1.5CM×15CM(×7)、分光光度计、水浴锅、电子分析天
平、电炉、容量瓶(100ml×1)、玻璃漏斗、量筒、三角烧
瓶、研钵
2.3果蔬中蛋白质含量
试剂:标准蛋白质溶液、考马斯亮兰G-250染料试剂0.05mol/LTris-HCl 缓冲液
仪器:分光光度计、漩涡混合器、试管16支
2.4果蔬中过氧化物酶分析
试剂:
A(分离胶缓冲液)100ml
B(浓缩胶缓冲液)100ml
C(浓缩胶贮液)100ml
D(浓缩胶贮液)100ml
E核黄素100ml
F 蔗糖100ml
电极缓冲液100ml(用时稀释10倍)
封板胶(加热煮沸)样品提取液
染色液
前沿指示剂仪器:垂直板电泳槽、直流稳压稳流电泳仪、微量进样器、高速离心机、量
筒、烧杯、玻璃棒、培养皿、分光
光度计、研钵、恒温水浴锅、容量
瓶、吸管
3、实验材料和方法
3.1果蔬中维生素C含量的测定
称取20..0g萝卜和盘菜芽放入研钵中研磨成匀浆后过滤,用少量2%
草酸溶液洗涤,并稀释到一定体积吸取1ml维生素C标准溶液放入锥形瓶中,加9ml1%草酸溶液,摇匀,用染料液滴定至微红色保持15S 不褪色即为终点,记下所用染料的体积,算出1ml染料相当于多少
mg维生素C。吸取10.0ml样品液放入锥形瓶中,同上操作进行滴
定,做两份求平均。
维生素C含量m = ×100 = 每百克样品中含维生素C 毫克数
V×C
W
m:每100克样品中含维生素C毫克数
V:滴定样品液所用去染料液(2,6-二氯酚靛酚)容积(mL)。
C:1mL染料液相当于维生素C的质量(mg/mL,由操作3计算得出)。
W:10mL样品稀释液中含有样品的质量数(g)。
3.2果蔬中总糖及还原糖的测定
3.2.1葡萄糖标准曲线的制作
012345标准葡萄糖溶液/ml00.10.20.30.40.5
蒸馏水 1.00.90,80.70.60.5
置冰水浴中15min
蒽酮试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
煮沸10S,冷却后试问放置10S在620nm处比色
A620nm0.0000.1940.1650.4060.5670.719
取6支试管按上表配置溶液,并进行分光光度测定,以吸光度为纵坐标,各标准溶液浓度(mg/ml)为横坐标作标准曲线
3.2.2样品中还原糖的提取和测定
分别称其1g萝卜和盘菜,在研钵中研磨成匀浆,转入锥形瓶中,并
用约30ml蒸馏水洗涤研钵,洗涤液并入锥形瓶瓶中于50℃水浴中
保温约0.5h(使还原糖浸出),冷却后定容至100ml.过滤,吸取1ml
滤液于试管中,置冰水浴5min,加入蒽酮试剂4.0ml于620nm处进行
比色,在标准曲线上得出样品液中还原糖的含量
3.2.3样品中总糖的提取、水解和测定
分别称其1g萝卜和盘菜,在研钵中研磨成匀浆,转入锥形瓶中,并
用约30ml蒸馏水洗涤研钵,洗涤液并入锥形瓶瓶中,向锥形瓶中
加入6mol/L盐酸10ml,搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h,冷却后用
20%NaOH溶液中和至中性,再用蒸馏水定容至100ml,过滤,吸
取1ml滤液于试管中,置冰水浴5min,加入蒽酮试剂4.0ml于620nm
处进行比色,在标准曲线上得出样品液中还总糖的含量
3.3果蔬中蛋白质含量的测定
3.3.1蛋白质标准曲线的绘制
012345 100ug/ml牛血清蛋白溶液/ml00.20.40.60.8 1.0
蒸馏水/ml 1.00.80.60.40.20
考马斯亮蓝液/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0取6支试管配置上述溶液,摇匀后放置2min,在595nm下比色,以吸
光度为纵坐标,各标准蛋白质含量(ug)为横坐标,绘制标准曲
线
3.3.2样品的制备
分别称取1g萝卜和盘菜置于冰浴上的研钵内,加入1mlH2O研磨成