生化论文

果蔬成分生化分析———萝卜和盘菜的成分分析

——12生本董芳芳 12112314107

引言：果蔬是我们生活中很常见的食物，大多数果蔬中含有维生素

C、总糖、原还糖、蛋白质等多种有机物。这些成分对植物的生

理活动起到很大的作用，同时也是我们人体所需的营养物质，不

同种类的果蔬中这些成分的含量是不同的。本实验选取萝卜和盘

菜作为研究对象，对其维生素C、总糖、原还糖、蛋白质含量及

过氧化物酶活性进行分析，通过实验了解萝卜和盘菜在这些成分

上含量的不同，并掌握滴定法、蒽酮比色法、考马斯亮兰法、聚

丙烯酰胺凝胶电泳法等实验方法。

1、实验材料：市售新鲜的萝卜和盘菜

2、实验试剂和仪器

2,1果蔬中维生素C的含量测定

试剂：1%草酸溶液2%草酸溶液、维生素C标准溶液、氧化型

0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液

仪器：微量滴定管及架、台秤、50ml量筒、1ml及10ml吸管、100ml锥形瓶、剪刀、滤纸

2.2果蔬中总糖及还原糖含量的测定

试剂：蒽酮试剂、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）、6ml/molHCI溶液、20%NaOH溶液

仪器：吸管1.0(×2) 5.0ml(×1) 0.1ml(×1) 0.2ml(×1) 0.5ml(×3)试管1.5CM×15CM(×7)、分光光度计、水浴锅、电子分析天

平、电炉、容量瓶（100ml×1）、玻璃漏斗、量筒、三角烧

瓶、研钵

2.3果蔬中蛋白质含量

试剂：标准蛋白质溶液、考马斯亮兰G-250染料试剂0.05mol/LTris-HCl 缓冲液

仪器:分光光度计、漩涡混合器、试管16支

2.4果蔬中过氧化物酶分析

试剂：

A(分离胶缓冲液)100ml

B(浓缩胶缓冲液)100ml

C(浓缩胶贮液)100ml

D(浓缩胶贮液)100ml

E核黄素100ml

F 蔗糖100ml

电极缓冲液100ml(用时稀释10倍)

封板胶（加热煮沸）样品提取液

染色液

前沿指示剂仪器：垂直板电泳槽、直流稳压稳流电泳仪、微量进样器、高速离心机、量

筒、烧杯、玻璃棒、培养皿、分光

光度计、研钵、恒温水浴锅、容量

瓶、吸管

3、实验材料和方法

3.1果蔬中维生素C含量的测定

称取20..0g萝卜和盘菜芽放入研钵中研磨成匀浆后过滤，用少量2%

草酸溶液洗涤，并稀释到一定体积吸取1ml维生素C标准溶液放入锥形瓶中，加9ml1%草酸溶液，摇匀，用染料液滴定至微红色保持15S 不褪色即为终点，记下所用染料的体积，算出1ml染料相当于多少

mg维生素C。吸取10.0ml样品液放入锥形瓶中，同上操作进行滴

定，做两份求平均。

维生素C含量m = ×100 = 每百克样品中含维生素C 毫克数

V×C

W

m：每100克样品中含维生素C毫克数

V：滴定样品液所用去染料液（2，6-二氯酚靛酚）容积（mL）。

C：1mL染料液相当于维生素C的质量（mg/mL，由操作3计算得出）。

W：10mL样品稀释液中含有样品的质量数（g）。

3.2果蔬中总糖及还原糖的测定

3.2.1葡萄糖标准曲线的制作

012345标准葡萄糖溶液/ml00.10.20.30.40.5

蒸馏水 1.00.90,80.70.60.5

置冰水浴中15min

蒽酮试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0

煮沸10S,冷却后试问放置10S在620nm处比色

A620nm0.0000.1940.1650.4060.5670.719

取6支试管按上表配置溶液，并进行分光光度测定，以吸光度为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标作标准曲线

3.2.2样品中还原糖的提取和测定

分别称其1g萝卜和盘菜，在研钵中研磨成匀浆，转入锥形瓶中，并

用约30ml蒸馏水洗涤研钵，洗涤液并入锥形瓶瓶中于50℃水浴中

保温约0.5h(使还原糖浸出)，冷却后定容至100ml.过滤，吸取1ml

滤液于试管中，置冰水浴5min,加入蒽酮试剂4.0ml于620nm处进行

比色，在标准曲线上得出样品液中还原糖的含量

3.2.3样品中总糖的提取、水解和测定

分别称其1g萝卜和盘菜，在研钵中研磨成匀浆，转入锥形瓶中，并

用约30ml蒸馏水洗涤研钵，洗涤液并入锥形瓶瓶中，向锥形瓶中

加入6mol/L盐酸10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h,冷却后用

20%NaOH溶液中和至中性，再用蒸馏水定容至100ml，过滤，吸

取1ml滤液于试管中，置冰水浴5min,加入蒽酮试剂4.0ml于620nm

处进行比色，在标准曲线上得出样品液中还总糖的含量

3.3果蔬中蛋白质含量的测定

3.3.1蛋白质标准曲线的绘制

012345 100ug/ml牛血清蛋白溶液/ml00.20.40.60.8 1.0

蒸馏水/ml 1.00.80.60.40.20

考马斯亮蓝液/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0取6支试管配置上述溶液，摇匀后放置2min,在595nm下比色，以吸

光度为纵坐标，各标准蛋白质含量（ug）为横坐标，绘制标准曲

线

3.3.2样品的制备

分别称取1g萝卜和盘菜置于冰浴上的研钵内，加入1mlH2O研磨成