水稻叶绿素含量的测定改良版

水稻叶绿素含量的测定

实验原理：根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在特定波长下测定叶绿素提取物的吸光值，然后利用公式计算出样品中叶绿素的含量。

实验目的：可以检测水稻叶片中叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。

试剂：

国药试剂（分析纯）

抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮：H2O =4.5：4.5：1

仪器：

分析天平(Adventurer，USA)

分光光度计DU640 (Backman，USA)

离心机(Backman, USA)

磨样机

玻璃珠直径6mm 精密型淘宝网购买

操作步骤：

1. 取新鲜水稻叶片，擦干后去中脉。

2. 用分析天平称取0.02-0.035g的叶片到2ml离心管中，加一个直径6mm的

玻璃珠，盖紧盖子。

3. 在液氮中冻10min左右，装入液氮预冷的金属底座中，用磨样机打碎，55hz

for 30s。（此磨样机磨样的方法可以用到很多的实验当中，具体参数自己摸索一下就可以了）

4. 从金属底座中取出样品，立即开盖放掉气化液氮，否则液氮受热会把离心管

炸开，毁掉样品。

5. 每管加入抽提Buffer 1.8ml，室温下避光摇15min。

6. 6000rpm离心30s。

7. 以抽提Buffer为空白，使用紫外分光光度计DU640在波长645和663下测

定叶绿素提取物的吸光值，DU640测量吸光值的量程在0.2-0.8之间，如果样品太浓，可以稀释。

4. 结果分析：

根据Arnon（1949）法的公式加以修正计算叶绿素含量：

叶绿素a=(12.72A663-2.59A645)×v/w×1000

叶绿素b=(22.88A645-4.67A663)×v/w×1000

叶绿素总含量=(20.29A645+8.05A663)×v/w×1000

注意事项：

1. 为避免叶绿素见光分解，操作时尽量在弱光下进行，速度要快。

2. 样品不宜太多，否则加入抽提Buffer后，2ml离心管会装不下。

3. 若叶绿素抽提物浑浊，则可以短暂离心后测定吸光值，否则会对试验结果造成误差。