HPLC基础知识ppt课件
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它又可分为薄层色谱和纸色谱
精品课件
4. 按照展开程序分类
按照展开程序的不同，可将色谱法分为 洗脱法、顶替法、和迎头法 ▪ 洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品 加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力 比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。 由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力 不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同， 从而使组分彼此分离。流出曲线下图
➢ 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色
谱（SFC）
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2.按分离机理分类
➢ 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附 能力强弱不同而得以分离的方法，称为 吸附色谱法
➢ 利用组分在固定液（固定相）中溶解度 不同而达到分离的方法称为分配色谱法
➢ 利用组分在离子交换剂（固定相）上的 亲和力大小不同而达到分离的方法，称 为离子交换色谱法
人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物
化学成分
精品课件
HPLC的分类
❖ 高效液相色谱法按照分离机制可以分为以下几类 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 离子交换色谱 离子色谱 离子对色谱 排阻色谱 亲和色谱精品（课件AC）
液-固吸附色谱
❖ 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝 等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂
❖ 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂 ❖ 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附
精品课件
➢ 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选 择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱 法或尺寸排阻色谱法
最近，又有一种新分离技术，利用不同组 分与固定相（固定化分子）的高专属性亲 和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常 用于蛋白质的分离
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3. 按固定相的外型分类
➢ 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱 ➢ 固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，
该法在分离多组分混合物时，除第一组分 外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量 杂质的混合物中切割出一个高纯组分（组分A）， 而不适用于对混合物进精品行课件分离
按流动相分
气相色谱（GC） 液相色谱（LC） 超临界流体色谱（SFC）
按机理分
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
精品课件
按固定相在支持 体中的形状分
输液泵 检测器 色谱柱 进样器 工作站
精品课件
❖ P230的基本操作 ❖ HPLC方法的建立 ❖ 液相色谱常见问题及其对策 ❖ 液相色谱容易出问题的部件 ❖ 仪器的维修和保养
精品课件
色谱分析法简介
❖ 色谱法是一种重要的分离分析方法 ，它利 用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分 配系数的微小差异进行分离。当两相作相 对移动时，使被测物质在两相之间进行反 复多次分配，使原来微小的差异累加产生 了很大的效果，形成差速迁移，使各组分 在柱内移动的同时逐渐分离，以达到分离、 分析及测定一些物理化学常数的目的
土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有 机成分
烃类族组成、石油中微量成分
无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、 化妆品、染料
液晶材料、合成高分子材料
无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、 甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳 烃
氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然 高分子化合物
精品课件
B A
这种方法能使样品的各组分获得 良好的分离，色谱峰清晰。此外，除去冲 洗剂后，可获得纯度较高的物质。目前， 这种方法是色谱法中最常用的一种方法
精品课件
▪ 顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性
流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直
接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将
各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依
次顶替出固定相
很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最
先流出，最强的最后流出。顶替法的流出
曲线如下图
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AB
此法适于制备纯物质或浓缩分
离某一组分；其缺点是经一次使用后，
柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换
柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能
再使用
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▪ 迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或 溶解能力最弱的组分首先以纯物质的状态流出， 其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二 组分混合物，以此类推。流出曲线如下图
HPLC基础知识 The Basic Knowledge
of HPLC
精品课件
目录 ❖ 色谱分析法简介 ❖ 色谱法的分类 ❖ HPLC的特点及应用领域 ❖ HPLC的分类 ❖ HPLC相关的基本术语 ❖ HPLC的相关理论
精品课件
❖ HPLC的定性分析 ❖ HPLC的定量分析 ❖ HPLC仪器的组成
HPLC应用领域
HPLC是目前应用最广泛的分离方法。已 广泛地用于石油化工、有机合成、生理生 化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生 产在线控制，乃至空间探索等许多领域
精品课件
应用领域 环境 农业 石油 化工 材料 食品
生物 医药
分析对象举例
常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害 重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分
柱色谱 平板色谱
纸色谱 薄层色谱
按分离效率分
经典液相色谱 高效液相色谱
精品课件
HPLC的特点
优点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好， 定量精度高，应用范围广
缺点：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分 子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的
居多
分离原理图解
精品课件
适用于分析高沸点、大 分子、强极性、热稳定 性差的化合物
（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物 液体），又可分为气固色谱（GSC）和气液 色谱（GLC）
精品课件
➢ 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 同理液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和 液液色谱（LLC）
随着色谱工作的发展，通过化学反应将固 定液键合到载体表面，这种化学键合固定相 的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）
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“色谱”的来由
❖
俄国植物学家 茨维特（Tswett）
1906年，他将从植物色素提取的石油醚提
取液倒人一根装有碳酸钙的玻璃管顶端，
然后用石油醚淋洗，结果使不同色素得到
分离，在管内显示出不同的色带，色谱一
词也由此得名
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色谱法的分类
1.按两相状态分类
➢ 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC） 根据固定相是固体吸附剂还是固定液
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4. 按照展开程序分类
按照展开程序的不同，可将色谱法分为 洗脱法、顶替法、和迎头法 ▪ 洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品 加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力 比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。 由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力 不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同， 从而使组分彼此分离。流出曲线下图
➢ 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色
谱（SFC）
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2.按分离机理分类
➢ 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附 能力强弱不同而得以分离的方法，称为 吸附色谱法
➢ 利用组分在固定液（固定相）中溶解度 不同而达到分离的方法称为分配色谱法
➢ 利用组分在离子交换剂（固定相）上的 亲和力大小不同而达到分离的方法，称 为离子交换色谱法
人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物
化学成分
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HPLC的分类
❖ 高效液相色谱法按照分离机制可以分为以下几类 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 离子交换色谱 离子色谱 离子对色谱 排阻色谱 亲和色谱精品（课件AC）
液-固吸附色谱
❖ 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝 等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂
❖ 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂 ❖ 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附
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➢ 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选 择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱 法或尺寸排阻色谱法
最近，又有一种新分离技术，利用不同组 分与固定相（固定化分子）的高专属性亲 和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常 用于蛋白质的分离
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3. 按固定相的外型分类
➢ 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱 ➢ 固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，
该法在分离多组分混合物时，除第一组分 外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量 杂质的混合物中切割出一个高纯组分（组分A）， 而不适用于对混合物进精品行课件分离
按流动相分
气相色谱（GC） 液相色谱（LC） 超临界流体色谱（SFC）
按机理分
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
精品课件
按固定相在支持 体中的形状分
输液泵 检测器 色谱柱 进样器 工作站
精品课件
❖ P230的基本操作 ❖ HPLC方法的建立 ❖ 液相色谱常见问题及其对策 ❖ 液相色谱容易出问题的部件 ❖ 仪器的维修和保养
精品课件
色谱分析法简介
❖ 色谱法是一种重要的分离分析方法 ，它利 用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分 配系数的微小差异进行分离。当两相作相 对移动时，使被测物质在两相之间进行反 复多次分配，使原来微小的差异累加产生 了很大的效果，形成差速迁移，使各组分 在柱内移动的同时逐渐分离，以达到分离、 分析及测定一些物理化学常数的目的
土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有 机成分
烃类族组成、石油中微量成分
无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、 化妆品、染料
液晶材料、合成高分子材料
无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、 甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳 烃
氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然 高分子化合物
精品课件
B A
这种方法能使样品的各组分获得 良好的分离，色谱峰清晰。此外，除去冲 洗剂后，可获得纯度较高的物质。目前， 这种方法是色谱法中最常用的一种方法
精品课件
▪ 顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性
流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直
接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将
各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依
次顶替出固定相
很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最
先流出，最强的最后流出。顶替法的流出
曲线如下图
精品课件
AB
此法适于制备纯物质或浓缩分
离某一组分；其缺点是经一次使用后，
柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换
柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能
再使用
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▪ 迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或 溶解能力最弱的组分首先以纯物质的状态流出， 其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二 组分混合物，以此类推。流出曲线如下图
HPLC基础知识 The Basic Knowledge
of HPLC
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目录 ❖ 色谱分析法简介 ❖ 色谱法的分类 ❖ HPLC的特点及应用领域 ❖ HPLC的分类 ❖ HPLC相关的基本术语 ❖ HPLC的相关理论
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❖ HPLC的定性分析 ❖ HPLC的定量分析 ❖ HPLC仪器的组成
HPLC应用领域
HPLC是目前应用最广泛的分离方法。已 广泛地用于石油化工、有机合成、生理生 化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生 产在线控制，乃至空间探索等许多领域
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应用领域 环境 农业 石油 化工 材料 食品
生物 医药
分析对象举例
常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害 重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分
柱色谱 平板色谱
纸色谱 薄层色谱
按分离效率分
经典液相色谱 高效液相色谱
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HPLC的特点
优点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好， 定量精度高，应用范围广
缺点：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分 子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的
居多
分离原理图解
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适用于分析高沸点、大 分子、强极性、热稳定 性差的化合物
（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物 液体），又可分为气固色谱（GSC）和气液 色谱（GLC）
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➢ 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 同理液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和 液液色谱（LLC）
随着色谱工作的发展，通过化学反应将固 定液键合到载体表面，这种化学键合固定相 的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）
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“色谱”的来由
❖
俄国植物学家 茨维特（Tswett）
1906年，他将从植物色素提取的石油醚提
取液倒人一根装有碳酸钙的玻璃管顶端，
然后用石油醚淋洗，结果使不同色素得到
分离，在管内显示出不同的色带，色谱一
词也由此得名
精品课件
色谱法的分类
1.按两相状态分类
➢ 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC） 根据固定相是固体吸附剂还是固定液