恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程(精)

J Diagn Concepts Pract 2009,Vol.8,No.4

恶性血液病进行细胞遗传学检测的重要性包括常规核型分析和荧光原位杂交(FISH 分析在内的细胞遗传学检测在恶性血液病的诊治中发挥着越来越重要的作用。①其有助于恶性血液病的诊断、鉴别诊断和分型。2001年世界卫生组织(WHO 发表了关于淋巴和造血系统肿瘤的新分型,将t(8;21、t(15;17、inv(16和del/t(11q23作为4种急性髓系白血病(AML 亚型的诊断标志,以上4种亚型均伴有不同再现性遗传学异常[1]。②其有助于判断恶性血液病患者的预后。如按照核型可将

AML 患者分为低危、中危和高危3个不同的预后

等级[2]。③其有助于医师选择合适的治疗方案,特别

是在发展针对不同遗传学亚型的个体化靶向治疗中,如费城(Ph 染色体(+的慢性髓系白血病(CML 可采用酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼治疗,伴t (15;17的急性早幼粒细胞白血病(APL 可采用全反式维甲酸和三氧化二砷治疗。可见,目前细胞遗传学检测已成为恶性血液病诊治中必不可少的重要手段。

采用标准的细胞遗传学检测方法的必要性以往,国际上关于细胞遗传学检测的方法缺少一致认可的准则。而最近,欧洲细胞遗传学协作组提出了恶性血液病细胞遗传学检测标准方法的建议[3]。笔者结合多年的实践经验,对其作了必要的修订和补充。只有采用标准的细胞遗传学检测方法,

才能既保证检测结果的准确可靠和检查的经济、省

时,又可避免不必要的检查和不恰当的治疗。

根据恶性血液病的类型采用不同的

细胞遗传学检测方法及流程

由于恶性血液病的类型不同,其细胞对于培养条件的要求也不相同,且其各自具有不同的特征性遗传学异常,如进行FISH 检测时要求采用不同的探针,故应根据恶

性血液病的类型采用不同的细胞遗传学检测标准方案。慢性淋巴细胞白血病(CLL 、CML 、慢性骨髓增生性疾病(CMPD [骨髓增殖性肿瘤(MPN ]、AML 、急性淋巴细胞白血病(ALL 、骨髓增生异常综合征(MDS 、淋巴瘤和多发性骨髓瘤(MM 的细胞遗传学标准检测方法及流程分别见图1~8。

细胞遗传学检测方法中涉及的10个关键问题在细胞遗传学检测中需注意的10个问题。①细胞遗传学检测的标本除CLL 患者可采用外周血细

胞外,大多数恶性血液病要求采用骨髓细胞进行检测。只有当患者的外周血白细胞计数>10000/mm 3,且含有10%以上的幼稚或原始细胞时,方可考虑采用外周血作为检测标本。淋巴瘤患者则应取受累淋巴结作为检测标本,当疾病晚期侵犯骨髓时则可采用骨髓细胞检测。②标本采集量视细胞密度而定,细胞密度越低,则需采集的标本量越多。一般要求·专家来信·

恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程

薛永权

(苏州大学附属第一医院血液科

江苏省血液研究所,江苏苏州215006

关键词:恶性血液病;细胞遗传学;

诊断

中图分类号:R446.11+3

文献标识码:A

文章编号:1671-2870(200904-0390-03

编者按:近期有关专家来信提示本刊,有关论文中涉及恶性血液病细胞遗传学检测方法及结果的描述存在一些错误或不规范之处。为使相关临床医师和科研人员进

一步了解和掌握血液病细胞遗传学的检测方法及流程,提高科研及写作能力,我刊特邀请苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所薛永权教授撰写“恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程”一文,并予刊出,旨在规范恶性血液病的细胞遗传学检测方法及流程。

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诊断学理论与实践2009年第8卷第4期图3

CMPD 或MPN 细胞遗传学检测的标准方法及流程

图4MDS 细胞遗传学检测的标准方法及流程

至少采集5~10mL 骨髓或外周血,应用肝素抗凝后,于24h 内送实验室检测。③培养基中应含20%的小牛血清,还需加入抗生素,若能加入胸腺嘧啶则培养效果更佳。④应同时行2份或更多的培养,以便进行不同时间的培养(24、48或72h 和加入不同的刺激因子,但除CLL 患者的标本外,其余均不应加入植物血凝素(PHA ,以免干扰分析结果,除非在需证实或排除体质性异常的情况时。⑤培养基接种细胞数应控制在1×106/mL ~3×106/mL 。⑥秋水仙酰胺处理样本的终浓度为0.05~0.1μg/mL ,时间控制在0.5~2h ,通常为1h ,必要时可延长至24h 。

⑦核型分析通常采用G 或R 显带技术。良好的带型对确保核型分析的准确、可靠至关重要。⑧每例

分析的细胞数视有无核型异常而定,核型异常时需分析10~20个细胞,无核型异常时则至少需分析

20个细胞才能确定为正常核型。⑨根据核型分析结果,加行必要的FISH 或反转录聚合酶链反应(RT -PCR 。如AML 需按不同的形态学亚型、ALL 需按不同的免疫学亚型选择相应的FISH 探针进行检测。近来发现,2%的B 系急性淋巴细胞白血病(B -ALL

患儿有21号染色体内的AML1基因扩增,提示预后不良,可采用ETV6-AML1或AML1FISH 探针检测该基因。20%的T 系急性淋巴细胞白血病(T -ALL 患者有隐匿性t(5;14(q35;q32,可导致TLX3异常表达,9%~30%的T -ALL 患儿有因1p32隐匿性缺失导致的SIL -TAL1融合基因,6%的T -ALL 患者有

9q34染色体外基因扩增导致的NUP214-ABL1融

合基因。此外,CDKN2A 的隐匿性缺失也较常见(21%的B -ALL 和50%的T -ALL 患者可见[4,5]。上述异常均可选用相应的FISH 探针进行检测。当存在≥3种独立畸变的复杂核型异常时,可用多色

FISH (M -FISH 或光谱核型分析(SKY 进行检测。⑩按照《ISCN(2005》的规定报告核型分析结果。

图1CML 细胞遗传学检测的标准方法及流程图2

CLL 细胞遗传学检测的标准方法及流程

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图7淋巴瘤细胞遗传学检测的标准方法及流程

图8MM 细胞遗传学检测的标准方法及流程

[参考文献]

[1]

Jaffe ES,Harris NL,Stein H,et al.WHO classification of tumors;pathology and genetics of tumors of haemato -poietic and lymphoid tissues[M].Lyon:IARC

press,2001.[2]