黔产夏枯草石油醚部分的化学成分研究

黔产夏枯草石油醚部分的化学成分研究
目的对黔产夏枯草石油醚部分的化学成分进行研究。

方法采用硅胶、制备薄层、凝胶、半制备高效液相等方法进行分离纯化，通过现代波谱解析技术辅以理化常数进行测定。

结果分离得到7个化合物，分别为白桦脂酸（1）、β-谷甾醇（2）、β-香树脂醇（3）、三十烷酸（4）、齐墩果酸（5）、异落叶松脂素（6）、胡萝卜苷（7）。

结论化合物（6）为首次从该属植物中分离得到，化合物（3）对结核杆菌具有一定的抑制活性。

标签：夏枯草；化学成分；抗结核活性
夏枯草（P.vulgaris Linn）为唇形科（Labiatae）夏枯草属（prunella）多年生草本植物[1]。

夏枯草在贵州地区分布广泛，其干燥果穗和全草均可入药，味苦、辛，性寒，药理作用广泛，具有散结、清火、明目、消肿、止痛等功效，传统中归入清热药。

夏枯草具有重要的临床应用和开发利用价值，是一种潜力很强的药物资源[2]。

本人目前已初步确定夏枯草粗提物具有较强体外抑制结核杆菌活性，本文主要是对夏枯草中的化学成分进行系统的分离纯化和结构鉴定，为并为下一步筛选出抗结核活性新成分奠定基础。

从夏枯草75%乙醇提取物浸膏的石油醚层经过经各种分离材料反复柱层析和半制备高液分离，波谱和理化性质鉴定得到7个化合物，分别是：白桦脂酸（1）、β-谷甾醇（2）、β-香树脂醇（3）、三十烷酸（4）、齐墩果酸（5）、异落叶松脂素（6）、胡萝卜苷（7），其中化合物（6）为首次从该属植物中分离得到，化合物（3）对结核杆菌具有一定的抑制活性。

1 仪器与材料
1.1仪器核磁共振波谱仪（美国Varian公司）：INOV A 400 MHz；气相色谱-质谱联用（GC-MS）HP 6890-5975C 型；液相色谱-质谱联用（LC-MS）HP1100 MSD型；傅里叶变换红外光谱仪（德国Brucker公司）：Brucker Vector 27 FT-IR型；旋光仪（日本Spectroscopic公司）：Horiba SEPA-300；XT-2型显微熔点测定仪（温度计未校正，北京泰克仪器有限公司）；反相硅胶RP-18（德国Merck 公司）；薄层聚酰胺薄膜（台州四甲生化塑料厂）；硅胶H、薄层色谱用硅胶GF254、柱层析硅胶（200～300目、300～400目）（中国青岛海洋化工集团公司）；提取和分离所用的有机溶剂均为工业级经重蒸处理，其余试剂均为分析纯。

1.2材料实验所用药材采集于贵州省龙里县，由贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为唇形科夏枯草属植物夏枯草（P.vulgaris Linn.）的全草，标本保存于贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室。

2 提取与分离
干燥的夏枯草全草约10 kg，粉碎后用75%乙醇加热回流提取3次每次3～5 h后过滤，合并滤液，减压蒸馏浓缩得总浸膏，加入水溶解，用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压蒸馏浓缩得石油醚层（约50 g）、乙酸乙酯得浸膏层（约180 g），
其中石油醚层经过经各种分离材料反复柱层析和半制备高液分离，共得到7个化合物。

3 结构鉴定
3.1化合物 1 白色针状晶体（氯仿-甲醇），mp 284°C～287°C，Libermann-Burchard反应呈阳性。

EI-MS m/z（%）：456 [M]+，438，423，410，395，248，234，220，207，189，175。

1H-NMR （400 MHz，CDCl3-CD3OD）δ 12.06 （1H，brs，COOH），
4.72（1H，s，Ha-29），4.60（1H，s，Hb-29），3.15（1H，t，H-3），1.69（3H，s，CH3-30），0.97，0.95，0.93，0.81，0.75（3H，CH3×5）。

13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD）δ38.6（C-1），26.8（C-2），78.7（C-3），38.6（C-4），5
5.1（C-5），18.1（C-6），34.1（C-7），40.5（C-8），50.4（C-9），3
6.9（C-10），20.7（C-11），25.3（C-12），38.1（C-13），42.3（C-14），
29.5（C-15），32.1（C-16），56.1（C-17），46.8（C-18），49.1（C-19），150.6（C-20），
30.4（C-21），37.0（C-22），27.7（C-23），15.1（C-24），15.7（C-25），15.9（C-26），14.5（C-27），179.2（C-28），109.3（C-29），19.1（C-30）. 以上光谱数据与文献[3]对照，确定为白桦脂酸（betulinic acid）。

3.2化合物2 无色针状结晶（石油醚-丙酮），mp 138°C～147°C。

EI-MS m/z （%）：414 [M]+，382，369，351，329，271，255，
213，159，81，55，43. 1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ5.34（1H，d，J =4.8 Hz，H-6），3.52～3.54（1H，m，H-3），0.68（3H，d，J =7.2 Hz，CH3-21），0.77，0.83，0.84，0.87，1.05（3H，s，CH3×5）。

以上光谱数据与文献[4]对照，确定为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3.3化合物 3 白色针晶（石油醚-乙酸乙酯），mp 196°C～197°C，Liebermann-Burchard 反应阳性，EI-MS m/z（%）：426 [M]+，408（16），393（15），219（100），203（72），189（62），97（51）.1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ 5.18（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），
4.51（1H，m，H-3），1.13（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-26），0.97（3H，s，H-25），0.94（3H，s，H-23），0.92（3H，s，H-29），0.87（3H，s，H-24），0.83（3H，s，H-28）.13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ 38.2（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），39.8（C-4），5
5.1（C-5），19.2（C-6），32.8（C-7），39.5（C-8），47.6 C-9），3
6.8（C-10），23.5（C-11），124.5（C-12），139.7（C-13），41.6（C-14），26.6（C-15），2
7.4（C-16），32.8（C-17），47.8（C-18），46.9（C-19），31.4（C-20），34.9（C-21），39.6（C-22），2
8.2（C-23），15.7（C-24），15.9（C-25），17.0（C-26），26.6（C-27），28.8（C-28），33.6（C-29），23.8（C-30）. 以上光谱数据与文献[5]对照，确定为β-香树脂醇（β-amyrin）。

3.4化合物4 白色蜡状粉末（氯仿-甲醇），mp 83°C～87°C，EI-MS m/z（%）：452 [M]+，396，368，340，185，129，97，83，73，57.1H-NMR（400 MHz，CDCl3-CD3OD）0.88（3H，t，J=5.2 Hz，CH3），1.28（52H，s，2-27-CH2），1.63（2H，m，J=5.2 Hz，28-CH2），2.34（2H，t，J=5.2 Hz，29-CH2），7.26（1H，s，-COOH）. 13C-NMR （100 MHz，CDCl3-CD3OD）δ 178.9（C-1），33.5（C-2），24.7（C-3），2
9.2（C-4-27），32.0（C-28），22.7（C-29），14.3 （C-30）.以上光谱数据与文献[6]
对照，确定为三十烷酸（triacontanoic acid）。

3.5化合物5 白色无定型粉末（氯仿-甲醇），mp 295°C～297°C，5%硫酸乙醇溶液显红色，Liebermann-Burchard反应阳性，Molish 反应阴性。

EI-MS m/z （%）：456 [M]+，248，203，189.1H-NMR（400 MHz，CDCl3-CD3OD）5.21（1H，s，H-12），3.16（1H，d，J=6.0Hz，H-3），1.55，1.53，1.08，0.91，0.86，0.85，0.74（3H，s，CH3×7）.13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD）38.4（C-1），26.9（C-2），78.9（C-3），38.5（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），32.6（C-7），38.9（C-8），47.6（C-9），37.0（C-10），22.9（C-11），122.1（C-12），143.6（C-13），41.5（C-14），27.4（C-15），23.1（C-16），46.4（C-17），41.0（C-18），45.6（C-19），30.7（C-20），33.8（C-21），32.1（C-22），28.0（C-23），15.6（C-24），15.1（C-25），16.8（C-26），25.9（C-27），181.2（C-28），33.1（C-29），23.5（C-30）.以上光谱数据与文献[5]对照，确定为齐墩果酸（oleanolic acid）。

3.6化合物6 白色无定形粉末（甲醇），mp 117°C～119°C，EI-MS m/z（%）：360[M]+，342，311，284，175，103，55.1H-NMR（400 MHz，CD3OD）6.65（1H，d，J=2.4Hz，H-2），6.76（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.64（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6），3.77（1H，d，J=3.6 Hz，H-7），1.81（1H，m，H-8），3.84，3.82（each1H，m，H-9），6.63（1H，s，H-2′），6.18（1H，s，H-5′），2.76（2H，m，H-7′），1.96（1H，m，H-8′），3.71（2H，m，H-9′）.13C-NMR（100MHz，CD3OD）13
4.1（C-1），113.7（C-2），148.9（C-3），14
5.8（C-4），115.9（C-5），123.1（C-6），48.0（C-7），47.9（C-8），62.1（C-9），128.9（C-1′），112.3（C-2′），147.1（C-3′），145.8（C-4′），117.3（C-5′），138.6（C-6′），33.6（C-7′），39.9（C-8′），65.9（C-9′），5
6.3，56.3（each-OCH3）.以上光谱数据与文献[7]对照，确定为异落叶松脂素[（-）islarleiresinol]。

3.7化合物7 白色粉末（吡啶），mp287°C～291°C，Lieberman-Burchard反应呈阳性，Molish反应呈阳性。

EI-MS m/z（%）：576[M]+，414（M-Glu，9），396（100），382（21），313（10），255（19）.1H-NMR（400 MHz，C5D5N）5.35（1H，d，J=5.2 Hz，H-6），
4.58（1H，d，J=8.4Hz，H-3），3.68（1H，m，H-2），0.68，0.82，0.87，0.92，0.98（3H，s，CH3×5），0.98（3H，d，J=6.4 Hz，CH3）.13C-NMR （100 MHz，C5D5N）37.4（C-1），30.5（C-2），78.7d（C-3），40.1（C-4），140.8（C-5），122.0（C-6），32.1（C-7），32.2（C-8），50.3（C-9），37.1（C-10），21.3（C-11），39.5（C-12），42.4（C-13），56.8（C-14），24.4（C-15），28.7（C-16），56.2（C-17），12.2（C-18），19.5（C-19），36.4（C-20），19.3（C-21），34.2（C-22），29.5（C-23），46.1（C-24），26.4（C-25），19.0（C-26），20.0（C-27），24.5（C-28），12.0（C-29），102.6（C-1’），7
5.4（C-2’），78.7（C-3’），71.7（C-4’），78.1（C-5’），62.9（C-6’）.以上光谱数据与文献[3]对照，确定为β-胡萝卜苷（daucosterol）。

4结果与讨论
本实验对贵州产夏枯草石油醚部分的化学成分进行了研究，从中分离得到7个化合物，其中化合物（6）异落叶松脂素为首次从该属植物中分离得到，同时利用MTT法对所有化合物进行了抗结核杆菌实验，结果表明，化合物（3）β-
香树脂醇对结核杆菌具有一定的抑制活性。

实验结果将为进一步开发利用中药夏枯草奠定了物质基础和科学依据。

参考文献：
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