食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定

食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定

1 范围

本标准规定了高效液相色谱法同时测定大豆磷脂、大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇三种组分含量的方法。

本标准适用于含油大豆磷脂、脱油大豆磷脂、大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）的测定。本标准不适用于大豆溶血磷脂酰胆碱及大豆溶血磷脂乙醇胺的测定。

2 原理

大豆磷脂样品经流动相溶解后，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇通过高效液相色谱分离。若油脂试样则事先氯仿溶解提取，旋蒸后用正己烷-异丙醇混合溶液定容，进行高效液相色谱分离。外标法定量。

3 试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。

3.1 试剂

3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。

3.1.3 磷酸（H3PO4）：85%，色谱纯。

3.1.4 正己烷[CH3(CH2)4CH3]：色谱纯。

3.1.5 异丙醇[（CH3）2CHOH]：色谱纯。

3.1.6 氯仿（CHCl3）。

3.1.7 乙酸（CH3COOH）：色谱纯。

3.1.8 水（H2O）：色谱纯。

3.2 试剂配制

3.2.1 流动相：乙腈-甲醇-磷酸混合溶液（100+10+0.6=V+V+V），取乙腈（3.1.1）、甲醇（3.1.2）和磷酸（3.1.3）混合。

3.2.2 正己烷-异丙醇混合溶液（3+1=V+V）：取正己烷（3.1.4），异丙醇（3.1.5）混合。

3.2.3 1%冰醋酸溶液：1mL冰醋酸（3.1.7）用色谱纯水（3.1.8）定容至100mL。

3.2.4 正己烷-异丙醇-1%冰醋酸混合溶液（8+8+1=V+V+V）：取正己烷（3.1.4），异丙醇（3.1.5），1%冰醋酸溶液（3.2.4）

3.3 标准品

3.3.1 磷脂酰胆碱：纯度＞95%。

3.3.2 磷脂酰乙醇胺：纯度＞95%。

3.3.3 磷脂酰肌醇：纯度＞95%。

3.4 标准溶液配制

3.4.1 磷脂标准混合溶液：精确称取20mg磷脂酰胆碱（3.3.1）、20mg磷脂酰乙醇胺（3.3.2）与10mg 磷脂酰肌醇(3.3.3)，用正己烷-异丙醇-1%冰醋酸混合溶液（3.2.4）溶解并定容到10 mL，此时磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇浓度分别为2mg/mL、2mg/mL、1mg/mL。准确吸取此溶液0.25 mL、1.25

1

GB/T XXXX—XXXX

mL、2.50 mL、3.75 mL，并用正己烷-异丙醇-1%冰醋酸混合溶液（3.2.4）定容到5 mL，使溶液中磷脂酰胆碱最终浓度为0.1 mg/mL~2.0 mg/mL，磷脂酰乙醇胺最终浓度为0.1 mg/mL~2.0 mg/mL，磷脂酸肌醇的最终浓度为0.05 mg/mL~1.0 mg/mL。密封后低于-16℃保存备用。

4 仪器和设备

4.1 分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

4.2 刻度吸管：0.5mL，1 mL，5 mL。

4.3 容量瓶：5 mL，10 mL，100 mL。

4.4 量筒：100 mL，500 mL，1000 mL。

4.5 具塞试管：20 mL。

4.6 漩涡混合器。

4.7 真空旋转蒸发仪：转速10r/min～120r/min。

4.8 液相色谱仪：带进样系统、紫外检测器和数据处理器。

4.9 液相色谱柱：Si-60柱子，填料粒度为5μm，柱长250mm，内径4mm或性能相当者。

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 大豆磷脂试样制备

试样应避光放在密闭和防潮的容器内。样品在使用前充分混匀。

依据样品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇含量，精确称取样品15mg～50mg，用正己烷-异丙醇-1%冰醋酸混合溶液（3.2.4）溶解并定容至5mL，经0.45μm微孔膜过滤，用于液相色谱分析或密封后低于-16℃保存备用。

5.1.2 油脂试样制备

试样按GB/T 5524进行扦样和分样，分取50g试料，装入样品瓶备用。

准确称取油脂试样0.5g（精确至mg），置于20 mL具塞试管（4.5）中，加入10.0 mL氯仿（3.1.6），旋涡混合。滤纸过滤，滤液用旋转蒸发仪（4.7）45℃蒸至近干。加正己烷-异丙醇混合溶液（3.2.2）溶解并定容至5.0mL，经0.45μm微孔膜过滤，用于液相色谱分析或密封后低于-16℃保存备用。

5.2 仪器参考条件

5.2.1 色谱柱：硅胶柱Si-60（5μm，250mm×4mm）或性能相当者。

5.2.2 流动相：乙腈-甲醇-磷酸混合溶液，100+10+0.6（V+V+V）。

5.2.3 检测波长：200-210nm之间最大吸收波长。

5.2.4 流速：1mL/min。

5.2.5 柱温：30℃。

5.2.6 进样量：10μL

如果采用不同型号Si柱，可通过调整流速，达到最佳工作状态。

5.3 标准曲线的制作

将标准系列工作液（3.4.1）分别注入液相色谱仪中，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

5.4 试样溶剂的测定

将试样溶液5.1.1或5.1.2注入液相色谱仪中，得到谱图，根据标准曲线得到待测液中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇的浓度，平行测定次数不少于两次。

6 分析结果的表述

2

试样中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇含量以每克试样中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇的毫克数（mg/g）表示，按式（1）计算：

m V

c w ×

=

式中：

w —样品中磷脂酰胆碱（或磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇）的含量，单位为毫克每克（mg/g）；

c—从标准工作曲线上得到的被测组分（磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇）的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V —样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m —试样的质量，单位为克（g）

如果两次测定的结果符合第7章给定的重复性要求，则测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留至小数点后两位。如果不符合重复性要求，需对同一样品重新测定。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

8 其他

检出限和定量限见表1和表2。

表

2 检出限和定量限（植物油类）

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