胶体金法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体标准操作程序

胶体金法检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体标准操作程序

1.检测原理

采用胶体金免疫层析技术，以间接法检测血清中的自身抗体，其原理以硝酸纤维素膜作为固相载体，分别在检测区（T）和质控区（C）划线包被CCP抗原和质控物。测试时，样本滴入加样孔后，血清中的IgG与包被在聚酯膜上的胶体金标记的抗体结合，结合物随之在毛细效应下横向层析。当血清中含有特异性抗CCP抗体时，泳动到T线时被CCP抗原捕获，出现阳性条带，有利标记物继续向前移动与结合标记物自动分离，泳动至质控区被捕获形成阳性质控线（C），判为阳性结果。若样本中不含抗CCP抗体，则检测线（T）线处不发生特异性结合反应，胶体金标记物继续层析到吸水垫上，因此仅在质控线（C）上出现阳性条带，判为阴性结果。作为质控线（C），无论T线是否出现条带，若C线未出现条带，则判断试纸条无效。

2.样本类型及处理方法

3.试剂

注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品、质控品）需注明日期及签名。每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截止日期。

4.仪器设备

备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。

5. 质量控制

每次测试判断结果时先观察质控线（C），无论T线是否出现条带，若C线未出现条带，则判试纸条无效，必须重新进行实验，每份样本复测可以提高实验结果的可靠性。

6. 操作步骤

6.1选用试剂：上海科新生物工程股份有限公司

6.2平衡：冻存测标本需放置室温平衡30分钟后再行测试。

6.3加样：将检测板摆放在试验台上，使用一次性塑料吸管吸取血清样本，逐滴滴入4滴样本至加样孔中，

6.4结果判读：5分钟后从观察窗口观察结果

7．结果判断

5分钟观察结果，观察结果不能超过8分钟，否则无效。

8．结果报告及复查标准

8.1结果判断：

8.2.1 阳性：质控线（C）和检测线（T）个出现一条色带。

8.2.2阴性：仅在质控线（C）出现一条色带。

8.2.3结果无效：质控线（C）未出现色带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。

8.3参考范围：阴性

8.4复查标准：

8.4.1结果无效。

8.4.2当本次结果过与近期结果相矛盾时。

8.4.3临川诊断与结果不相符合。

9. 方法限制

9.1干扰物质

9.1.1当血清中抗CCP型线粒体抗体浓度过高时T很明显，C可能变得很弱，为正常结果

9.1.2血清标本宜新鲜：如有细菌污染，菌体中可能会产生假阳性反应。

9.1.3 8分钟后，阴性样本检测结果可能会在T线处呈现较模糊线条导致假阳性。这是由于在层析反应过

程中样品溶液往吸水纸端的流速会逐步减慢，当溶液被吸水纸全部吸纳后，会出现缓慢的溶液回流。

胶体金颗粒因此会出现物理性的非特异吸附或滞留，出现出模糊的条带导致假阳性现象。这是回流现象造成，该结果无效。所以应该在规定时间内判读结果。

10. 相关记录