结核病分子生物学及分子流行病学

2、评价传染性肺结核的化疗效果
抗结核药物的化疗机理是杀灭病灶中结核杆菌，评价 结核病的化疗效果，必须以抗酸杆菌检查结果作为依据。 3、为结核病疫情的流行病学统计服务 传染性结核病在流行病学中有特殊的意义，在反映一 个国家或地区结核病疫情的严重程度的指标中，涂阳患病 率等被更多关注。
痰标本的含菌量与痰涂片阳性检出率的关系
初诊的肺结核可疑症状者要进行3次痰涂片检查，强化期末 和疗程结束前均应查2次痰涂片。查痰宣教，告知病人。
涂片检查法
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优点： 适用于痰、尿、便、体液、组织等几乎一切标本，有重要的 临床诊断价值； 是发现和确定传染源的主要方法，是考核和评价疗效的重要 指标，有重要的流行病学意义； 操作简便、快速，成本低廉，适于各级实验室开展； 约10-20肺结核病人痰涂片阳性。
病灶中结核分枝杆菌菌群：
结核病变中有四种不同代谢状态的结核菌群,它们对化学 药物的反应各不相同： A群：快速生长菌，生长繁殖旺盛，致病力和传染性强， 存在于细胞外，多在疾病早期的活动性病灶和空洞内，容易 被抗结核药物所杀灭，异烟肼效果最好，起主要杀菌作用， 链霉素及利福平亦有效。 B 群：缓慢繁殖菌，存在于干酪坏死灶内，结核杆菌常 呈休眠状态，偶尔发生短暂的生长繁殖，仅对少数药物如利 福平敏感。 C 群：间断繁殖菌，存在于巨噬细胞内，细菌得到酸性 细胞质的保护，但繁殖缓慢。吡嗪酰胺在 pH<5.5 时，杀菌效 果较好。 B 群与 C 群为顽固菌，可存活数月、数年，亦称“持续 存活菌”， 是日后复发的根源。 D群：完全休眠菌，病灶内有少量结核杆菌完全处于休眠 状态，无致病力及传染性，药物对其无作用。
标本/污染物 的安全丢弃
痰涂片显微镜检查流程
查痰对象
• 结核病可疑者
– 咳嗽、咳痰超过2周 – 咳血或伴有血痰 – 发热或胸痛超过2周 – 胸部X线异常
少量查痰代胸片的受检者
痰标本收集
• 容器：广口、螺旋盖 、可密闭、不易泄漏 • 标本性状：干酪痰、 血痰、粘液痰、唾液 • 采集时间：即时痰、 晨痰、夜间痰
体积相同性质不同病灶与含菌量
肺结核的传染性决定病人痰中结核菌的数量和病人 的咳嗽症状。涂阳病人排菌量大，是主要传染源，涂阴 培阳病人传染性小。 直径 2cm的空洞含菌数108-9 直径 2cm的干酪病灶菌量约105-6 直径 2cm的结节病灶或闭合干酪灶102-3
化疗前后结核杆菌的定量分析
• 对痰菌阳性病人在化疗前后做结核杆菌培养的定 量分析 • 化疗前每ml细菌数106(1000000/ml-4+）
结核病化疗
• 抗结核药物的治疗目的是快速杀灭病灶内的大量 快速生长A群菌，以及缓慢和间歇繁殖的B、C菌 群，已达到治愈。结核病化疗应该是高效杀菌， 低不良反应。 • INH对A群结核杆菌有抑制和杀灭作用； A、B、 C菌群对RFP高度敏感，均有杀菌作用，是治疗 结核病标志性药物；SM对细胞外结核杆菌（A） 有杀菌或抑制作用；PZA仅对细胞内（C)有杀菌 作用；EMB对细胞内外有相仿的抑制作用。
结核病实验室诊断及新诊断工具
安徽省结核病防治研究所 安徽省胸科医院 王 庆
一.结核病细菌学基础
二.结核病实验室诊断方法 三.结核病实验室新诊断工具
一.结核病细菌学基础
—结核分枝杆菌
分枝杆菌
1882年KOCH发现，至今已经发现100多种，有 结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌、麻风杆菌。 • 引起肺结核的主要有人型、牛型、非洲、田鼠等结核 分枝杆菌，称结核分枝杆菌复合群； (结核分枝杆菌是缓慢生长菌） • 大部分非结核分枝杆菌不致病, 部分非结核分枝杆菌 可引起人体类似结核样病变—非结核分枝杆菌肺病； • 麻风分枝杆菌引起麻风病。
标本菌量(个/ml) <1000 镜检可检出菌量数(个) 检出阳性结果的几率(%) 0/100或更多视野 0
5000~10000
30000 50000 100000 500000
1~8/300视野
3~9/100视野 1~9/10视野 1~9/每视野 > 10 /每视野
50.0（报告实数）
80.0（1+） 90.0（2+） 96.2（3+） 99.9（4+）
• 化疗2周后减少至5％（50000/ml-2+）
• 4周减少至0.25％(2500/ml-阴性）,化疗后结核 杆菌呈对数减少以至消失，降低了传染性
二.结核病实验室诊断方法
• 细菌学检查－涂片、培养、药敏 • 免疫学检查－皮试、结核抗体
痰涂片检查的意义
1、发现传染性肺结核的主要方法 目前，控制结核病流行以发现和控制传染源为主。我国 优先控制痰涂片阳性肺结核。
缺点： • 敏感性低：每毫升含5000-10000条以上抗酸菌才可得到阳性 结果； • 特异性较低：只能报告“抗酸杆菌阳性”，不能区分结核和 非结核分支杆菌； • 镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。
标本收集 及保存 TB 可疑者 TB 病人
标本接收 和登记
结果记录
材料准备
涂片 结果 报告 染色 涂片保存 用于EQA 显微镜检
生长缓慢
肺结核样病变 结节与溃疡 儿童淋巴结炎 结核样病变， 多见于肺与肾 极少致病 麻风病
偶发分枝杆菌
结核分枝杆菌
• 是一类细长略弯曲的长杆菌，由于细胞壁 含有大量脂质，能抵抗酸酒精脱色能力， 抗酸染色阳性。 • 缓慢生长菌。 • 致病性与菌体成分有关，荚膜-多糖；脂质索状因子、磷脂、蜡质D；蛋白质。 • 易发生形态、耐药、毒力、免疫性变异。 • 对干燥抵抗力强，对湿热、紫外线敏感。
分枝杆菌分类
分类 结核分枝杆菌复合群 非结核分枝杆菌 RunyonⅠ组 RunyonⅡ组 RunyonⅢ组 RunyonⅣ组 麻风分枝杆菌 生长速度 生长缓慢 菌落和色素产生 代表菌种 结核分枝杆菌、 牛分枝杆菌 堪萨斯分枝杆菌 海分枝杆菌 瘰疠分枝杆菌 鸟-胞内分枝杆菌 致病性 结核病
Hale Waihona Puke Baidu
菌落不见光时为淡黄色, 光照后则变为黄色或橙色 在37℃生长缓慢 在暗处培养时菌落 呈橘红色 40～42℃下生长慢 通常不产生色素 在25～45℃快速生长。 培养5～7天即可见到菌落 个别种产生色素 人工培养基上不生长