同工酶分析方法
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取油菜样品0.5-1.Og于液氮中研磨，用5Ommol/L的磷酸缓冲液(pH7.0 )提取，12000 X g, 4℃离心15min，收集上清液，加入占样品总体积25%的甘油和占样品总体积约1.5溟酚兰放入一84℃的超低温冰箱中保存用作同工酶分析。
同工酶测定采用聚丙烯酞胺垂直板状电泳。分离胶浓度6.0 } ( ddH20 4.313m1
Tris-HC以pH8.9) 0.938m1 } 30%胶1.5m1 } 0.13mmol/L核黄素0.75m1和TEMED 4},1) 7.5 } (ddH20 3.938m1 } Tris-HC吻H8.9) 0.938m1 } 30%胶1.875m1 } 0.13mmol/L核黄
素0.75m1和TEMED 4p,1)或10%(ddH20 3.304m1，Tris-HCL(pH8.9) 0.938m1，30%胶2.5m1 } 0.13mmo1/L核黄素0.75m1和TEMED 4闰)，依据同工酶的类型和所测蛋白的大小而定，pH8.9;浓缩胶浓度为4.0% ( ddH20 0.818m1 } Tris-HCL(pH6.7) 0.375m1 30%胶0.4m1 } 0.13mmol/L核黄素0.409m1 } TEMED 15 p1和50%蔗糖1.2m1) } pH6.7 ; 30%胶的配制:29g丙烯酞胺，1g N,N一亚甲基双丙烯酞胺，重蒸水加至100m1。电极液为Tris一甘氨酸，pH8.3。以澳酚兰为前沿指示剂，电流强度为20mA/板，电泳2 小时左右，整个过程在4℃冰箱中进行。
过氧化物酶(POD)同工酶用联苯胺一抗坏血酸染色法染色。酉旨酶(EST)同工
酶用醋酸蔡酷坚牢蓝染色法染色;过氧化氢酶< CAT)同工酶用硫代硫酸钠一碘化钾
染色法(分离胶中加淀粉)染色;超氧化物歧化酶(SOD)同工酶用氮蓝四哇染色法
染色。多酚氧化酶(PPO)同工酶用对苯二胺一邻苯二酚染色法染色。