金花茶花朵总皂苷体外抗氧化实验研究

（ IC50） 为 0. 83 mg / m。结论： 金花茶花朵具有较好的抗氧化能力，是一种较好的天然自由基清除原料。
【关键词】 皂苷； 金花茶； 花朵； 抗氧化活性
【中图分类号】 Ｒ285. 5
【文献标志码】A
【文章编号】1007 － 8517 （ 2016） 10 － 0027 － 04
In vitro Antioxidant Experiment Ｒesearch of Total Saponins in the Flower of Camellia nitidissima Chi
Key words： Saponins； Camellia nitidissima Chi，Flower； Antioxidant activitity
金花茶 （ Camellia nitidissima Chi） 在 《中国植物志》［1］ 系统地定位为山茶科、山茶族、山茶属。1933 年中国山茶 科植物研究专家、中山大学张宏达教授在景烈采到第一株 金黄色山茶花标本。1960 年，广西药物研究所学者在广西 十万大山采集标本时发现大面积金黄色茶花，并正式命名 为金花茶［2］。金花茶是我国一级重点珍稀保护植物，有着 “植物界大熊猫” 之美称。其叶和花等部位除富含茶多酚、 β － 谷甾醇、总黄酮、多种氨基酸、齐墩果酸、可溶性糖、 天然维生素 E 等天然活性成分外，皂苷也是其主要活性成 分之一［3 － 4］。一些研究者开展了金花茶皂苷类活性成分的 提取分离及相关活性研究。如苏琳等利用超声提取、大孔 树脂富集以及制备色谱等技术对金花茶叶水溶性部分进行 分离纯化，得到 3 个单体化合物，运用核磁共振、质谱、 红外等表征手段进行结构鉴定，确定分别为人参皂苷 Ｒg1、 人参皂苷 F1 和人参皂苷 F5 等［5］。黄艳等由金花茶分离得 到了一种达玛烷皂苷类新化合物，新化合物被命名为 （ 3β， 6α，12β） － 3，6，12 － 三羟基达玛烷 － 24 － 烯 － 20 － 甲基 － 2 － O － β － D － 吡喃葡萄糖 － （ 2→1） － O － β － D － 吡喃 葡萄糖 － （ 2→1） － O － α － L － 吡喃鼠李糖苷。作者采用 CCk － 8 法对该化合物进行了抗肿瘤活性实验，结果显示该 化合 物 可 以 有 效 抑 制 人 肺 癌 BeL － 7402 细 胞 和 人 肝 癌 SMMC － 7721 细胞的生长 ［6］。
结果： 金花茶花朵总皂苷回收率为 90. 2% ； 羟基自由基清除能力、有机自由基清除能力、氧阴离子清除能力、亚硝酸根离子清除能力等实
验自由基清除 率 的 半 数 抑 制 浓 度 （ IC50 ） 分 别 为 0. 75 mg / ml、0. 05 mg / ml、0. 26mg / ml； 还 原 能 力 试 验 自 由 基 清 除 率 的 半 数 抑 制 浓 度
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中国民族民间医药 2016 年 5 月第 25 卷第 10 期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 10
总皂苷提取液为自制。 1. 3 提取或检测方法 1. 3. 1 金花茶花朵优选及花朵中总皂苷分离纯化 采摘秋 季新鲜的金花茶花朵，采用电子秤称重； 对采摘的新鲜金 花茶花朵按照 《中华人民共和国药典》 （ 2010 年版） 要求 进行优选，除去质量较差花朵，优选出的金花茶花朵原料 必须符合无霉变、无异味、无杂质等药典要求； 将优选出 金花茶花朵洗净后，真空干燥得金花茶花朵干品。
随着长寿及养生产业的快速发展，人们对天然、无毒 的抗氧化剂需求日益增大。金花茶作为卫生部批准的新资 源食品之一，皂苷活性成分丰富，并开展了金花茶叶中皂 苷抗氧化的相关研究［7］。研究以金花茶花朵为原料，通过 乙醇提取及 Amberlite XAD － 4 非离子型大孔树脂纯化，得 到纯化后的金花茶花朵总皂苷，并开展金花茶总皂苷抗基 自由基 （ ·OH） 、抗二苯基苦基苯肼自由基 （ DPPH ·） 、 抗超氧阴离子 （ O2 － ·） 自由基、抗亚硝酸盐 （ NO2 － ） 等 抗氧化实验及还原能力实验研究。 1 仪器、材料与方法 1. 1 仪器 FA － A / JA － N 电子天平 （ 海民桥精密科学仪 器有限公司） ； 恒温水浴锅 （ 江苏金坛市金城国盛实验仪器 厂） ； 旋转蒸发仪 （ 上海亚荣生化仪器厂） ； TU － 1901 双光 束可见分光光度计 （ 上海光谱仪器有限公司） ； KQ3200E 型超声波清洗器 （ 昆明市超声仪器有限公司） ； GL － 25M 离心机 （ 上海赵迪生物科技有限公司） ； 电子天平 （ 上海 实干实业有限公司） ； Wi94186 恒温水浴箱 （ 北京东西仪科 技有限公司） 。 1. 2 材料 金花茶花朵等原料由广东盛世通生物有限公司 提供。Amberlite XAD － 4 非离子型大孔树脂 （ 阿拉丁试剂 （ 上海） 有限公司） ，人参皂苷 Ｒb1 （ 上海生工） 。所用试 剂均为分析纯，购于广州化学试剂有限公司。金花茶花朵
基金项目： 广东生扬帆计划引进紧缺拔尖人才项目 （ 粤人才 ［2015］ 9 号） 、广东公益研究与能力建设项目 （ 2015A010105034） 、广东 省医学科学基金 （ A2015518） 。
作者简介： 程金生 （ 1976 － ） ，男E － mail： chengjins@ gmail. com
CHENG Jinsheng1，2 WEI Zuoheng1 CHEN Xinyan1 ZHENG Qixiang1 LIANG Xiang1 OUYANG Xiaoyue2 1． Institute of Hakka Health Care，School of Medicine，Jiaying University，Meizhou 514021，China； 2． Biomedical Laboratory，Shaoguan University，Shaoguan 512005，China
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金花茶花朵总皂苷体外抗氧化实验研究
程金生1，2 韦卓恒1 陈信炎1 郑启祥1 梁 香1 欧阳小月2
取上述干品 300 g，用多功能粉碎机粉碎，过 30 目筛， 随后加入 1. 5 L 95% 乙醇，置于超声清洗仪 （ 90 kHz） 超 声提取 30min，合并 3 次提取液，采用旋转蒸发仪除去乙 醇，加水至 200ml，加石油醚 250ml 萃取，重复两次，留水 层； 再用等体积正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，旋转蒸 发仪回收正丁醇，得金花茶花朵总皂苷浸膏。该浸膏用甲 醇定容在 100ml 容量瓶中，即得待测样品溶液，备用。精 密吸取待测溶液 0. 1ml 于试管中，水浴挥干甲醇，依次加 入新配置的 5% 香草醛 － 冰醋酸溶液 0. 2ml 和高氯酸 0. 8ml， 于 60℃ 水浴加热 15min，随后冰浴冷却 5min，加冰醋酸 5ml 摇匀，以试剂为空白对照，产物在 560nm 处测定吸收值， 计算样品溶液中金花茶皂苷含量： 金花茶皂苷含量 = 样品 溶液中皂苷含量 （ mg） / 样品质量 （ g） 。
Abstract： Objective to study the antioxdidant activity of the total saponins in the flower of Camellia nitidissima Chi． Method By starting from dry flowers of Camellia nitidissima Chi，the ingredients of saponins were extracted by 95% of ethanol． Successively，the saponins extraction was purified by macroporous resin of Amberlite XAD － 4． Meanwhile，five series antioxidant experiments VS VitC had been conducted on the saponins extraction of Camellia nitidissima Chi． Ｒesults the recovery rate of the extraction and purification experments was 90. 2% ． Antioxidant experiments and reduction ability experiment were conducted in this work： 1） The hydroxyl radical scavenging capacity； 2） organic radical scavenging capacity； 3） oxygenanion removal ability； 4） the nitrite ion removal ability； 5） reducing abilities experiment． Investigations showed that half of the inhibition of IC50 of the first four clearance rate tests are 0. 75 mg / ml，0. 05mg / ml，0. 26mg / ml and 0． 83 mg / ml，respectively． Conclusion Camellia nitidissima Chi flower is excellent natural antioxidants with superior antioxidant performance．
1． 嘉应学院医学院客家养生保健研究所，广东 梅州 514031； 2． 广东韶关学院生物医药实验室，广东 韶关 512005
【摘 要】 目的： 研究金花茶花朵总皂苷活性成分的抗氧化活性。方法： 以金花茶花朵为原料，以乙醇为提取介质，通过 Amberlite
XAD － 4 非离子型大孔树脂分离纯化金花茶花朵中总皂苷，以维生素 C （ VitC） 为对照品对金花茶花朵总皂苷进行抗氧化及还原能力实验。
参考并改进文献方法［8］，采用 Amberlite XAD － 4 非离 子型大孔树脂 （ 洗脱剂： 10% 、20% 、30% 异丙醇） ，原液 上样 （ 质量浓度 24. 42mg / ml，pH 4. 8） ，上样流速为 1. 20 BV / h，洗脱过程首先用 1. 25 BV，蒸馏水除杂，再依次用 1. 75 BV 和 2 BV 对金花茶花朵总皂苷提取液进行分离除杂， 得到较纯金花茶花朵总皂苷，供后续抗氧化实验使用。 1. 3. 2 检测方法 1. 3. 2. 1 金花茶花朵中总皂苷含量测定 采用香草醛 － 硫 酸法测定，以人参皂苷 Ｒb1 为标准物质，作标准曲线，并 计算样品中皂苷的含量。人参皂苷 Ｒb1 对照品经香草醛 － 高氯酸显色后于 TU － 1901 双光束可见分光光度计上作最佳 吸收 波 长 扫 描，并 绘 制 扫 描 曲 线，显 色 后，反 应 物 在 560nm 处有最大吸收且 2 h 内吸光度保持稳定。 1. 3. 2. 2 标准曲线的绘制 精密吸取人参皂苷 Ｒb1 标准品 溶液 1ml （ 浓度分别为： 0. 1、0. 08、0. 05、0. 02、0. 01mg / ml） 于试管中，水浴挥干甲醇，加 5% 香草醛 － 冰醋酸溶 液 0. 2ml，高氯酸 0. 8ml，于 60℃ 水浴加热 15min，随后水 中低温冷却 5min，加冰醋酸 5ml 摇匀，以实际空白对照， 反应产物在 560nm 处测定吸收值，以人参皂苷 Ｒb1 为对照 品绘制测定标准曲线［9］。 1. 4 体外抗氧化实验 1. 4. 1 金花茶花朵总皂苷对羟基自由基 （ ·OH） 清除能 力的测定 1. 4. 1. 1 实验原理 羟基自由基 （ ·OH） 是体内最活泼 的活性氧，具有极强的氧化能力。该实验方法采用芬顿体 系，在各自的吸收范围内测定吸光度值的变化，可得到受 试抗氧化剂清除·OH 的情况。 1. 4. 1. 2 实验方法 在试管中加入 4. 5ml pH = 7. 4 的磷酸 缓冲溶液，1. 5ml 1. 5 mmol / l 的邻二氮菲溶液，充分混匀， 加入 1ml 1. 5 mmol / l FeSO4 溶液，立即混匀，加入 1ml 维生 素 C 标准液标准液 （ 0. 25mg / ml） ，金花茶待测液的浓度依 次为 0. 5、0. 75、1、1. 5mg / ml。 分 别 混 匀， 再 加 入 1ml 0. 02% H2 O2 ，同时做样品空白试验。另做损伤管和未损伤 管，其中损伤管中加入 1ml 0. 02% H2 O2 与 1ml 的蒸馏水， 未损伤管不加 H2 O2 ，直接加入 2ml 蒸馏水 （ 损伤管与未损