尿液试带法各项测试注意事项大全
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尿液试带法各项测试注意事项
尿液分析是尿液和分析二词的组合,中华检验医学大辞典对尿液分析明确定义:“用目测、理学、化学(应强调定性、定量)、显微镜及其化仪器(各种尿分析仪、渗透压计等),对液标本进行分析”。
尿液分析是诊断泌尿系统疾病的重要指标之一,通过尿液物理学和化学检查,可观察尿液物理性状和化学成分的变化,在尿液沉渣镜检中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶(包括药物结晶)等。这些检查资料,对肾和尿路疾患的诊断和鉴别诊断、疾病严重程度和预后的判断,都有极重要的意义。尿液分析的准确程度直接影响到临床诊断,提高尿液分析检查的质量保证是关系到临床检查的重要环节。质量控制的目的是确保对病人的优质服务,为临床医生提供客观、可靠信息去诊疗病人。随着基础医学的发展,各种先进检测技术,特别是电子技术及计算机的应用,不断提高尿液检查的自动化水平。各种尿液分析仪的开发经验,尿沉渣全自动化分析仪成相继问世,较好地解决了尿沉渣镜检自动化。今天重点讲讲尿液试带法各项测试的注意事项。
一、PH
原理:干化学法尿PH检查的原理是采用酸碱指示剂法,其测试膜块区含有甲基红(PH4.6—6.2)和溴麝香草酚蓝(PH6.0—7.6),两种酸碱指示剂适量配合可反映尿PH4.5—9.0的变异范围。
注意事项:
1 标本必须新鲜,放置过久细菌分解尿液成分可导致PH改变,如大肠杆菌等,分解尿素产生氨,可使尿液呈碱性。(少数情况下,细菌也分解尿液产生酸性物质,使尿液PH偏低)。
2 当肾脏分泌的尿液含有过多的碳酸氢盐和碳酸缓冲对时,如果尿液放置时间过久,尿液中的二氧化碳会自然扩散到空气中,使尿PH增高。
3 尿液PH主要反映肾脏在维持血浆和细胞外液正常氢离子浓度方面的能力,而干化学法测定是一个半定量的实验结果。因此在临床观察结果时,不要单从尿PH测定值分析,要结合临床其他资料和实验数据,综合分析才能得出正确的判断。
二、比重:(SG)
原理干化学试剂带法测定尿比重的膜块中主要含有两种成分;一种是电解质共聚体,即甲氧乙烯顺丁烯二酸共聚合体;另一种是酸碱指示剂溴麝香草酚蓝。
注意事项:
1 尿液必须新鲜,不能含有强碱、强酸等物质(如奎宁、嘧啶等药物)。这些药物的存在都会直接影响试剂带测定尿比重。
2 尿蛋白质浓度增高时由于尿白分子本身是两性电解质,即本身既有电荷又有固体量,对方法都有影响。
3 干化学法不宜用于新生儿尿比重检查,这可能是由于新生儿尿比重太低,仅在1.002—1.004之间的缘故。
4由于干化学法所测比重结果间隔较大,不能反映较小的比重变化。只能用于病人尿比重筛选。病理性可用折射仪法测定。
建议用折射仪法作为参与方法。(当尿液含X光线反差介质、葡萄糖、蛋白时可使结果增高,应予校正。蛋白1g/dL时SG增高0.003)。
三、尿蛋白测定
原理
干化学法测定原理在一定的条件下(PH为3.2时),溴酚蓝产生出阴离子,与带阳离子的蛋白质(主要是白蛋白)结合发生颜色变化。这种现象早在1 909年被Soernsen发现,并称为指示剂蛋白质误差法。
注意事项:
(一) 尿液PH 尿液标本必须新鲜,变质的尿液会使尿液PH发生变化,或者尿液过酸、过碱都会影响实验结果。
当病人服用奎宁、奎宁丁和嘧啶等药物时,引起尿液呈强碱尿(PH≥9.0),超过了试剂带本身的缓冲能力,会使干化学法出现假阳性结果;而用磺基水杨法和加热乙酸法作尿蛋白定性时,因尿过碱,远离蛋白质的等电点出现假阴性结果。同样PH<3.0时,也会引起尿蛋白定性试验的假阴性。
(二) 尿液所含蛋白成分
不同的尿蛋白测定方法对病人尿液内不同类型蛋白质检测的敏感性不同,测定结果也不相同。
王淑娟教授报道,当尿液中球白浓度为4000mg/L以下时,干化学法蛋白定性为阴性,只有当其浓度达5500mg/L时,才出现可凝反应;白、球蛋白比值为1:2的蛋白尿,蛋白浓度高达2000mg/L时才会出现阳性(+)反应,干化学法测定球蛋白的敏感性为白蛋白的1/100~1/50。磺基水杨酸定性法对球蛋白反
应的灵敏度亦较白蛋白低,浓度同时为2000mg/L时,白蛋白出现阳性(++)反应,球蛋白仅为阳性(+)反应。
在白、球蛋白尿中,球尿白比例增大,则阳性程度减弱。因此在进行肾病患者尿蛋白的测定时,特别是疾病发展过程中需要系统观察蛋白含量的病例,最好进行定量试验。
(三)尿液中的干扰物
研究证明,多种物质(多为药物)可使蛋白不同检查方法呈现出假阳性和假阴性结果。丛玉隆等曾探讨了多种抗生素对尿蛋白测定影响的研究,发现青霉素族药物对其有明显的干扰作用。为了证明这一点,笔者对大剂量青霉素静脉注射患者用药前后进行了尿蛋白的检测,
结果表明:
1 尿液内青霉素浓度超过4万U/mL时,对干化学法测定尿蛋白产生假阴性,而对磺基水杨酸法测定尿蛋白产生假阳性。
2静脉滴注青霉素240万U组24小时内,320万U组3小时内,480万U组5小时内,尿中青霉素浓度可以达到影响尿蛋白测定水平。可对磺基水杨酸法产生假阳性,对干化学法产生假阴性。
大剂量青霉静脉滴注后对尿蛋白定性结果影响(磺基水杨法)
药物剂量(U)给药前给药后(小时)
0.5 1 2 3 4 5 6
240U - ± - -
320U - ++ + -
480U - ± ++ +++ ++ ± - - 大剂量青霉静脉滴注后对尿蛋白定性结果影响(干化学法)
药物剂量(U)给药前给药后(小时)
0.5 1 2 3 4 5 6 240U ++ - ± ++
320U ++ - + ++
480U ++ - - - ± + ++ ++
因此,对于含蛋白尿的患者使用青霉素治疗时,使用不同的测定尿蛋白方法
需要考虑不同的干扰作用,即磺基水杨法使结果增强或出现假阳性,干化学法测试使结果偏低甚至出现假阴性.除此之外,尿中含有高浓度有机碘造影剂(如胆影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸盐时,磺基水杨酸法可呈假阳性,而对干化学法和加热乙酸法影响较小。
(四)尿液存放的时间及污染
尿液存放时间过久而致细菌生长繁殖,或尿液受其他分泌物如阴道分泌物污染,或含有较多细胞成分时,也可出现阳性反应。但这种蛋白尿绝非泌尿系统病变所致。
四、尿糖测定
干化学试剂带法测定尿糖的膜块中主要含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和色源及其他物质。(不同厂家采用色源有异)主要有两类:①采用碘化钾作色源,②采用联甲苯胺作色源。
测定原理:膜块内葡萄糖氧化酶(GOD)作用于尿液中葡萄糖,使其形成葡萄糖和过氧化氢(H2O2),后者再被过氧化氢酶(POD)催化释放出[O],后者使色源呈现不同的颜色变化。
(一)干扰物对两种方法的影响:
①维生素C对尿糖测定的影响
研究证明,尿中存在的维生素C既可与班氏试剂中的铜离子作用,使班氏尿糖定性产生假阳性;又能对尿液在低葡萄糖浓度(14mmol/L)时,与试剂带中的试剂发生竞争抑制反应,使干化学法产生假阴性。
②抗生素对尿糖测定的影响
除维生素C外,抗生素也对尿糖测定有影响。(丛玉隆教授使用19种抗生素)发现许多抗生素对班氏法糖定性、糖定量测定结果有不同程度的影响,而对干化学法定性及酶法定量没有影响。这可能与抗生素同班氏试剂中铜离子发生反应,试剂带及酶法不含铜离子,故不受影响。例如,空白对照班氏定性(++)使用氨苄青霉素的浓度达到4000ug/L时,班氏定性(+++);又如头孢去甲噻肟的浓度达到2100ug/L时,班氏定性(+++);先锋V浓度2400ug/L时,班氏定性由原来的(++)变为(+)。
③影响尿糖测定的其他因素