玉米成熟胚组织培养

玉米成熟胚组织培养

消毒：

1、一步消毒法，取成熟玉米种子在自来水下冲洗干净，然后在超净工作台上用70％酒精表面浸泡1～5 min，

用0．1％升汞灭菌5—15 min；灭菌后的种子用无菌水清洗3—6次，然后进行浸泡处理，将

浸软的种子置于超净工作台上，分离出成熟胚，接种于诱导培养基上；

2、两步消毒法，即取胚前消毒和取胚后消毒。操作过程是用75％乙醇和0．1％升汞分别消毒1 min、15 min，用无菌水冲洗4～5次，浸泡18—24 h，剥胚前再用0．1％升汞消毒5～10min，无菌水冲洗4～5次，剥去种皮和胚乳，将成熟胚盾片向上接种在培养基上。

外植体预处理：

1、浸泡处理，无菌水（或者4-5ml/g 2,4-D）中浸泡3d；

2、切胚处理，将切去芽鞘和根鞘的胚沿胚轴纵切为两部分，作为外植体；

3、变温处理，（1）成熟玉米种子消毒后在无菌水中浸泡并保存在4℃冰箱中，36 h后将胚取出接种于诱导培养基上，于34℃高温中诱导3 d；（2）成熟玉米种子消毒后置于常温(25℃)

下浸泡，36 h后取出，于常温下诱导3 d。（3）：消毒后种子浸泡在无菌2，4一D水中4℃处理36 h，后置于34℃水浴中处理36 h；（4）：种子消毒后浸泡于无菌2，4一D水中常温72 h。

培养基：

愈伤诱导培养基：N6+2，4-D2．0 mg／L+脯氨酸0．7 ms／L+CH 500 mg／L+0．7％琼脂；愈伤改良培养基：N6+2，4-D 2．0mg／L+脯氨酸O．7 mg／L+CH 500 mg／L+2％甘露醇+0．7％琼脂；

分化培养基：N6+KT 1．0 mg／L+CH 100 ms／L+0．7％琼脂；

壮苗培养基：1／2MS盐+o．1％活性炭十O．5％琼脂。

以上各种培养基中，加3％蔗糖，调pH值5．8—6．0，121℃下灭菌20 min。

培养：

将以上外植体置于愈伤组织诱导培养基上于25±l℃下暗培养．20d后对愈伤组织进行改良培养并继代培养．分别记录不同培养时期(20 d、40 d、60d)的有关数据。之后转入分化培养基．温度25±l℃。光照2 700～3 000 Ix．光照时间13 h．20 d后统计与分化相关的芽点数及出苗数

情况。再生植株转到壮苗培养基上．培养条件同分化培养，待苗长出些许健壮根时．驯化后移入土中。

参考文献：

【1】张艳贞, 王罡, 胡汉桥, 等. 农杆菌介导将Bt 杀虫蛋白基因导入优良玉米自交系的研究[J]. 遗传, 2002, 24(1): 35-39.

【2】陈莉, 窦秉德, 阮元元, 等. 甜玉米成熟胚的组织培养及其植株再生研究[J]. 江苏农业科学, 2007 (6): 75-78.

【3】陈莉, 窦秉德, 程朝霞, 等. 甜玉米成熟胚和幼胚再生性比较分析[J]. 湖北农业科学, 2009 (3): 519-521.

【4】王洪振, 陈徐, 金太成, 等. 玉米成熟胚组织培养的研究进展[J]. 种子, 2014, 8: 013.

【5】吕颖颖, 王宏伟, 李凤海, 等. 玉米幼胚组织培养体系优化[J]. 玉米科学, 2013, 2: 012.