微生物检验第四讲细菌耐药检验
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法； • 除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、
头孢西丁琼脂基础法等。
碳青霉烯酶
• 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素活性的β-内酰胺酶，主要分布于β-内酰胺酶A、 B、D类中。
• 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶分为两大类： – 一类称为金属碳青霉烯酶，这类酶以金属锌离子为活性作用位点，可以被EDTA抑制，属于 B类β-内酰胺酶； – 另一类以丝氨酸（Ser）为酶的活性作用位点，可以被酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制， 属于A、D类β-内酰胺酶。
谢谢
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• ESBLs是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素类和单环内酰胺类氨曲南的一类酶； • ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物，能被克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等内酰胺
酶抑制剂所抑制； • ESBLs主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也见于肠杆菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆
耐药是由于： 检测 菌落形态
万古霉素中介耐药的金黄色葡萄球菌（VISA） 增厚的细胞壁 困难；表型不稳定 不典型金葡菌
万古霉素敏感
细胞壁 万古霉素中介
当有以下一个或多个情况时菌株可疑为VISA
• -內酰胺类药物的MIC降低 • 达托霉素MIC升高 • 菌落形态不典型（一些为微小菌落） • 肉汤中生长迟缓（如血培养） • 凝固酶反应微弱/延迟 • 经过几次次代培养后：
No growth = 无诱导性克林霉素耐药 生长=诱导性克林霉素耐药
对于红霉素耐药，克林霉素敏感的葡萄球菌，需检测诱导性克林霉素耐药
• 注意 – 试验适用于金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌(苯唑西林敏感和耐药株)； – 对于CoNS，该试验不必常规开展因为克林霉素很少用于治疗凝固酶阴性葡萄球菌； – 大多数医院相关MRSA是克林霉素耐药的； – 大多数社区相关MRSA是克林霉素敏感的(msrA 基因型)； – 克林霉素可以口服给药。
肠球菌氨基糖苷类修饰酶
链霉素 庆大霉素 妥布霉素 阿米卡星/丁胺卡那
6-AAD
+-
-
-
3’APH
--
-
+
2”APH/6’AAC
-
+
+
+
6’AAC*
--
+
+
* 在所有屎肠球菌中均发现
+ = 酶可以修饰药物；药物无协同性 - = 酶不能修饰药物；药物有协同性
万古霉素耐药肠球菌（VRE）表型
• VRE－屎肠球菌中居多 – vanA - 高水平耐药(MIC 256 µg/ml) – vanB - 中等水平耐药 (MIC 16 - 256 µg/ml)
耐甲氧西林葡萄球菌
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）携带SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因编码修 饰的青霉素结合蛋白PBP2a，这种蛋白对甲氧西林和其他的β-内酰胺类抗生素亲和力下降，从而导致 对这些抗生素的耐药。
• SCCmec主要由mec复合物和ccr复合物两部分组成。根据不同mec复合物和ccr复合物的组合，可以 将SCCmec分成不同的型别，目前已发现8种SCCmec型。
青霉素
纸片药物含量 1 µg 苯唑西林
抑菌圈 (mm)
MIC (µg/ml) 等效的 MIC
R
I
S
R
S
-
-
20
-
≤0.06
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌 纸片扩散法-使用苯唑西林纸片作为青霉素敏感性的替代纸片
• 20 mm - 报告“敏感”： – 青霉素 – 头孢噻肟/头孢曲松 – 其他ß-内酰胺类
3.链球菌天然耐药 • 肺炎链球菌对第一代喹诺酮类药物耐药，并对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星敏感性低。链
球菌对氨基糖苷类天然耐药或对水平耐药。
4.李斯特菌天然耐药 • 对磺胺类、杆菌肽、多粘菌素、头孢菌素类天然耐药。
细菌的常见耐药机制
• 细菌耐药机制主要有四种： 1. 产生一种或多种水解酶、钝化酶和修饰酶； 2. 抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点、DNA解旋酶、DNA拓扑异构酶Ⅳ 的改变等； 3. 细菌膜的通透性下降，包括细菌生物被膜的形成和通道蛋白丢失； 4. 细菌主动外排系统的过度表达。
菌属、沙雷菌属等其他肠杆菌科细菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 稀释法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL： • 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL • 或头孢泊肟MIC≥8mg /mL
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 纸片法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL （筛选阳性）： • 头孢泊肟≤17mm • 头孢他啶≤22mm • 头孢噻肟≤27mm • 头孢曲松≤25mm • 氨曲南 ≤27mm
*检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株
苯唑西林 MIC (µg/ml)
≤0.25
0.5-2.0
≥4.0
报告苯唑西林敏感
进行 mecA 或 PBP2a 或
头孢西丁纸片扩散
报告苯唑西林耐药
阴性
阳性
报告苯唑西林敏感
报告苯唑西林耐药
克林霉素诱导耐药葡萄球菌
• 红霉素*耐药的金葡菌或凝固酶阴性葡萄球菌可对克林霉素结构性或诱导性耐药或仅对红 霉素耐药。
• 19 mm - 进行MIC实验： – 青霉素
• 苯唑西林纸片敏感或20 mm 对应脑膜炎或口服青霉素的敏感折点(MIC ≤0.06 µg/ml)
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌青霉素Etest MIC结果判读
青霉素MIC的Etest测定 肺炎链球菌 MIC = 3 mg/ml
纸片扩散法折点 葡萄球菌-万古霉素
Susceptible敏感 15 -
Intermediate中介 -
Resistant耐药 -
对于金黄色葡萄球菌 *假如抑菌圈≥7 mm，用MIC法检测万古霉素（若有需要） • 万古霉素纸片扩散法仅在检测携带van-A金葡菌（VRSA）时可信；需确证没有抑菌圈 (≤6 mm) • 纸片扩散法不能鉴别VSSA和VISA • 纸片扩散法不能检测凝固酶阴性葡萄球菌
肺炎链球菌 新的青霉素折点 (µg/ml)
青霉素注射 (非脑膜炎) 青霉素注射 (脑膜炎) 青霉素 (口服青霉素 V)
敏感 ≤2 ≤0.06 ≤0.06
中介 4 -
0.12-1
耐药 8 0.12 2
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌 纸片扩散法-使用苯唑西林纸片作为青霉素敏感性的替代纸片
– 菌落回复为典型形态 – 万古霉素MIC降低并且菌株变为万古霉素敏感
耐药是由于
美国报道例数 检测 菌落形态
万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）
从万古霉素耐药肠球菌（VRE）中获得vanA基因 9个患者 大多数标准方法均可检测 典型金葡菌
CLSI 文件 M100-S18 2008
New!新 M100-S19 2009*
甲氧西林耐药的葡萄球菌（MRS）
MRS检测 金黄色葡萄球菌
路邓葡萄球菌
金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌
除路邓以外的凝固酶阴性葡萄球 菌
药物 1mg 苯唑西林 1mg 苯唑西林Baidu Nhomakorabea
30mg 头孢西丁
1mg 苯唑西林 30mg 头孢西丁
纸片法 √ ×
√
× √
稀释法 √ √
√
√ ×
凝固酶阴性葡萄球菌中苯唑西林MIC结果的报告策略*
*或其他大环内酯类
红霉素/克林霉素耐药葡萄球菌耐药机制
机制
耐药基因
红霉素
核糖体修饰-药物不能结合于靶位 泵-药物被泵出
R
erm R
msrA
R
克林霉素
S* R 结构性
S
erm
= erythromycin ribosome methylase
msrA = macrolide streptogramin resistance
微生物检验第四讲细菌耐药检验
1.葡萄球菌属的天然耐药
• 对第一代喹诺酮类天然耐药。 • 腐生葡萄球菌对磷霉素天然耐药。 • 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药。包括青霉素类、头孢菌素类、
含酶抑制剂的复合制剂、碳青霉烯类、氨曲南、头霉素类。
2.肠球菌的天然耐药
• 对一、二、三、四头孢菌素、克林霉素、磺胺类、氨基糖苷类（高浓度除外）天然耐药。 • 可选范围：青霉素、氨苄西林、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、头孢硫脒等。
• 低水平万古霉素耐药 – vanC - (MIC 2 - 16 µg/ml) – vanC天然存在于鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌 – 菌株不引起院内爆发，vanC基因不易于传播 – 纸片扩散法实验可能检测不出
VRE
快速MGP实验，孵育3-5小时；甲基化-aD-葡糖苷酸化＝黄色
阴性
阳性
铅黄肠球菌的黄色色素
*需要诱导来显示耐药性
葡萄球菌-“D试验”
诱导性克林霉素耐药（erm介导） 患者不会对克林霉素有反应-报告克林霉素耐药
15 ～ 26 mm
阳性
“D”
阴性 无克林霉素诱导（msrA介导）
真的克林霉素敏感-报告克林霉素敏感
葡萄球菌诱导性克林霉素耐药的MIC检测方法
4.0 µg/ml 红霉素 0.5 µg/ml 克林霉素
为产ESBL菌株。
AmpC酶的特征
• AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素的Ⅰ型β内酰胺酶，可 分为诱导酶和非诱导酶。
• 与ESBLs不同的是，AmpC酶对三代头孢菌素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制剂克 拉维酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。
AmpC酶的检测方法
耐甲氧西林葡萄球菌的检测
•MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测PBP2a、 mecA基因测定及MRSA显色培养基。 •头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 •对于金黄色葡萄球菌，MRSA的检测可以使用苯唑西林纸片，但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使 用苯唑西林纸片。
• 在上述耐药机制中，第一、二种耐药机制具有专一性，第三、四种耐药机制不具有专一性。
β-内酰胺酶
• β内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革 兰阴性杆菌间质中； • 检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为简单、 方便、快速，应用于临床检测。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 纸片法（表型确认试验） • 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头
孢噻肟/克拉维酸。 • 任一复方制剂的抑菌圈直径与相应单药抑菌圈
直径相差≥5mm时，即可判断该菌产ESBL。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 稀释法（表型确认试验） • 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 • 任何一组酶抑制剂复方制剂的MIC值比相应单药的MIC降低3个稀释度者即可判定该菌
CLSI M100-S19. Table 2C.
肠球菌高水平氨基糖苷类耐药筛查
• 纸片扩散法 – 120 µg 庆大霉素; 300 µg 链霉素 – 10 mm = 无高水平氨基糖苷类耐药
• MIC筛查 – 庆大霉素: 500 µg/ml – 链霉素: 1000 µg/ml (肉汤) 2000 µg/ml (琼脂)
头孢西丁琼脂基础法等。
碳青霉烯酶
• 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素活性的β-内酰胺酶，主要分布于β-内酰胺酶A、 B、D类中。
• 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶分为两大类： – 一类称为金属碳青霉烯酶，这类酶以金属锌离子为活性作用位点，可以被EDTA抑制，属于 B类β-内酰胺酶； – 另一类以丝氨酸（Ser）为酶的活性作用位点，可以被酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制， 属于A、D类β-内酰胺酶。
谢谢
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• ESBLs是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素类和单环内酰胺类氨曲南的一类酶； • ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物，能被克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等内酰胺
酶抑制剂所抑制； • ESBLs主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也见于肠杆菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆
耐药是由于： 检测 菌落形态
万古霉素中介耐药的金黄色葡萄球菌（VISA） 增厚的细胞壁 困难；表型不稳定 不典型金葡菌
万古霉素敏感
细胞壁 万古霉素中介
当有以下一个或多个情况时菌株可疑为VISA
• -內酰胺类药物的MIC降低 • 达托霉素MIC升高 • 菌落形态不典型（一些为微小菌落） • 肉汤中生长迟缓（如血培养） • 凝固酶反应微弱/延迟 • 经过几次次代培养后：
No growth = 无诱导性克林霉素耐药 生长=诱导性克林霉素耐药
对于红霉素耐药，克林霉素敏感的葡萄球菌，需检测诱导性克林霉素耐药
• 注意 – 试验适用于金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌(苯唑西林敏感和耐药株)； – 对于CoNS，该试验不必常规开展因为克林霉素很少用于治疗凝固酶阴性葡萄球菌； – 大多数医院相关MRSA是克林霉素耐药的； – 大多数社区相关MRSA是克林霉素敏感的(msrA 基因型)； – 克林霉素可以口服给药。
肠球菌氨基糖苷类修饰酶
链霉素 庆大霉素 妥布霉素 阿米卡星/丁胺卡那
6-AAD
+-
-
-
3’APH
--
-
+
2”APH/6’AAC
-
+
+
+
6’AAC*
--
+
+
* 在所有屎肠球菌中均发现
+ = 酶可以修饰药物；药物无协同性 - = 酶不能修饰药物；药物有协同性
万古霉素耐药肠球菌（VRE）表型
• VRE－屎肠球菌中居多 – vanA - 高水平耐药(MIC 256 µg/ml) – vanB - 中等水平耐药 (MIC 16 - 256 µg/ml)
耐甲氧西林葡萄球菌
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）携带SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因编码修 饰的青霉素结合蛋白PBP2a，这种蛋白对甲氧西林和其他的β-内酰胺类抗生素亲和力下降，从而导致 对这些抗生素的耐药。
• SCCmec主要由mec复合物和ccr复合物两部分组成。根据不同mec复合物和ccr复合物的组合，可以 将SCCmec分成不同的型别，目前已发现8种SCCmec型。
青霉素
纸片药物含量 1 µg 苯唑西林
抑菌圈 (mm)
MIC (µg/ml) 等效的 MIC
R
I
S
R
S
-
-
20
-
≤0.06
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌 纸片扩散法-使用苯唑西林纸片作为青霉素敏感性的替代纸片
• 20 mm - 报告“敏感”： – 青霉素 – 头孢噻肟/头孢曲松 – 其他ß-内酰胺类
3.链球菌天然耐药 • 肺炎链球菌对第一代喹诺酮类药物耐药，并对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星敏感性低。链
球菌对氨基糖苷类天然耐药或对水平耐药。
4.李斯特菌天然耐药 • 对磺胺类、杆菌肽、多粘菌素、头孢菌素类天然耐药。
细菌的常见耐药机制
• 细菌耐药机制主要有四种： 1. 产生一种或多种水解酶、钝化酶和修饰酶； 2. 抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点、DNA解旋酶、DNA拓扑异构酶Ⅳ 的改变等； 3. 细菌膜的通透性下降，包括细菌生物被膜的形成和通道蛋白丢失； 4. 细菌主动外排系统的过度表达。
菌属、沙雷菌属等其他肠杆菌科细菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 稀释法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL： • 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL • 或头孢泊肟MIC≥8mg /mL
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 纸片法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL （筛选阳性）： • 头孢泊肟≤17mm • 头孢他啶≤22mm • 头孢噻肟≤27mm • 头孢曲松≤25mm • 氨曲南 ≤27mm
*检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株
苯唑西林 MIC (µg/ml)
≤0.25
0.5-2.0
≥4.0
报告苯唑西林敏感
进行 mecA 或 PBP2a 或
头孢西丁纸片扩散
报告苯唑西林耐药
阴性
阳性
报告苯唑西林敏感
报告苯唑西林耐药
克林霉素诱导耐药葡萄球菌
• 红霉素*耐药的金葡菌或凝固酶阴性葡萄球菌可对克林霉素结构性或诱导性耐药或仅对红 霉素耐药。
• 19 mm - 进行MIC实验： – 青霉素
• 苯唑西林纸片敏感或20 mm 对应脑膜炎或口服青霉素的敏感折点(MIC ≤0.06 µg/ml)
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌青霉素Etest MIC结果判读
青霉素MIC的Etest测定 肺炎链球菌 MIC = 3 mg/ml
纸片扩散法折点 葡萄球菌-万古霉素
Susceptible敏感 15 -
Intermediate中介 -
Resistant耐药 -
对于金黄色葡萄球菌 *假如抑菌圈≥7 mm，用MIC法检测万古霉素（若有需要） • 万古霉素纸片扩散法仅在检测携带van-A金葡菌（VRSA）时可信；需确证没有抑菌圈 (≤6 mm) • 纸片扩散法不能鉴别VSSA和VISA • 纸片扩散法不能检测凝固酶阴性葡萄球菌
肺炎链球菌 新的青霉素折点 (µg/ml)
青霉素注射 (非脑膜炎) 青霉素注射 (脑膜炎) 青霉素 (口服青霉素 V)
敏感 ≤2 ≤0.06 ≤0.06
中介 4 -
0.12-1
耐药 8 0.12 2
CLSI M100-S19. Table 2G.
肺炎链球菌 纸片扩散法-使用苯唑西林纸片作为青霉素敏感性的替代纸片
– 菌落回复为典型形态 – 万古霉素MIC降低并且菌株变为万古霉素敏感
耐药是由于
美国报道例数 检测 菌落形态
万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）
从万古霉素耐药肠球菌（VRE）中获得vanA基因 9个患者 大多数标准方法均可检测 典型金葡菌
CLSI 文件 M100-S18 2008
New!新 M100-S19 2009*
甲氧西林耐药的葡萄球菌（MRS）
MRS检测 金黄色葡萄球菌
路邓葡萄球菌
金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌
除路邓以外的凝固酶阴性葡萄球 菌
药物 1mg 苯唑西林 1mg 苯唑西林Baidu Nhomakorabea
30mg 头孢西丁
1mg 苯唑西林 30mg 头孢西丁
纸片法 √ ×
√
× √
稀释法 √ √
√
√ ×
凝固酶阴性葡萄球菌中苯唑西林MIC结果的报告策略*
*或其他大环内酯类
红霉素/克林霉素耐药葡萄球菌耐药机制
机制
耐药基因
红霉素
核糖体修饰-药物不能结合于靶位 泵-药物被泵出
R
erm R
msrA
R
克林霉素
S* R 结构性
S
erm
= erythromycin ribosome methylase
msrA = macrolide streptogramin resistance
微生物检验第四讲细菌耐药检验
1.葡萄球菌属的天然耐药
• 对第一代喹诺酮类天然耐药。 • 腐生葡萄球菌对磷霉素天然耐药。 • 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药。包括青霉素类、头孢菌素类、
含酶抑制剂的复合制剂、碳青霉烯类、氨曲南、头霉素类。
2.肠球菌的天然耐药
• 对一、二、三、四头孢菌素、克林霉素、磺胺类、氨基糖苷类（高浓度除外）天然耐药。 • 可选范围：青霉素、氨苄西林、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、头孢硫脒等。
• 低水平万古霉素耐药 – vanC - (MIC 2 - 16 µg/ml) – vanC天然存在于鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌 – 菌株不引起院内爆发，vanC基因不易于传播 – 纸片扩散法实验可能检测不出
VRE
快速MGP实验，孵育3-5小时；甲基化-aD-葡糖苷酸化＝黄色
阴性
阳性
铅黄肠球菌的黄色色素
*需要诱导来显示耐药性
葡萄球菌-“D试验”
诱导性克林霉素耐药（erm介导） 患者不会对克林霉素有反应-报告克林霉素耐药
15 ～ 26 mm
阳性
“D”
阴性 无克林霉素诱导（msrA介导）
真的克林霉素敏感-报告克林霉素敏感
葡萄球菌诱导性克林霉素耐药的MIC检测方法
4.0 µg/ml 红霉素 0.5 µg/ml 克林霉素
为产ESBL菌株。
AmpC酶的特征
• AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素的Ⅰ型β内酰胺酶，可 分为诱导酶和非诱导酶。
• 与ESBLs不同的是，AmpC酶对三代头孢菌素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制剂克 拉维酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。
AmpC酶的检测方法
耐甲氧西林葡萄球菌的检测
•MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测PBP2a、 mecA基因测定及MRSA显色培养基。 •头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 •对于金黄色葡萄球菌，MRSA的检测可以使用苯唑西林纸片，但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使 用苯唑西林纸片。
• 在上述耐药机制中，第一、二种耐药机制具有专一性，第三、四种耐药机制不具有专一性。
β-内酰胺酶
• β内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革 兰阴性杆菌间质中； • 检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为简单、 方便、快速，应用于临床检测。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 纸片法（表型确认试验） • 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头
孢噻肟/克拉维酸。 • 任一复方制剂的抑菌圈直径与相应单药抑菌圈
直径相差≥5mm时，即可判断该菌产ESBL。
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
• 稀释法（表型确认试验） • 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 • 任何一组酶抑制剂复方制剂的MIC值比相应单药的MIC降低3个稀释度者即可判定该菌
CLSI M100-S19. Table 2C.
肠球菌高水平氨基糖苷类耐药筛查
• 纸片扩散法 – 120 µg 庆大霉素; 300 µg 链霉素 – 10 mm = 无高水平氨基糖苷类耐药
• MIC筛查 – 庆大霉素: 500 µg/ml – 链霉素: 1000 µg/ml (肉汤) 2000 µg/ml (琼脂)