组培问题

组培苗褐化问题
1.在培养基中添加活性碳可以防止植物组织自身的酚类物质排泌和变褐老化。

对形态发生和器官形成有良好作用。

一般认为，活性碳主要吸附非极性物质及色素大分子，可以减少一些有害物质的影响，但是具体吸附的选择性很差，温度低时吸附力增强，温度高是吸附力减弱，甚至会解吸附。

通常使用浓度为0.5-10g/L。

加入活性炭后使培养基变黑，对一些植物诱导生根有利。

大量活性炭的加入会削弱琼脂的凝固能力，因此要多加些琼脂。

很细的活性炭容易沉淀，因此通常在琼脂将要凝固时，需轻轻摇动培养瓶。

2.植物外植体组织在接种时的切割面会溢泌一些酚类物质，在接触空气中的氧气后其会氧化为相应的醌类物质，产生可见的茶色、褐色或黑色，此即谓“酚污染”。

在木本植物，尤其是热带木本植物及少量草本植物中，此现象较为严重。

常用的防治措施如下：
A.试用抗酚类氧化的药剂（半胱氨酸及其盐酸盐、二硫苏糖醇、谷胱甘肽、抗坏血酸等。

该类药剂一般需用浓度为50-200mg/L。

用经过滤灭菌的药液洗涤刚切割的外植体伤口表面，或加入固体培养基的表层，或将刚切割的外植体浸入其中一定时间）
B.适当降低培养基温度。

C.接种后先进行一定时间的暗培养。

D.及时转接入新鲜培养基。

E.选择切取外植体部位等。

培养物的不良表现及改进措施(初始培养阶段)
1.培养物水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯
可能原因：表面杀菌剂过量，消毒时间过长，外植体选用不当（部位或时期）。

改进措施：调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间，试用其他部位，生长初期取材。

2.培养物长期培养几乎无反应
可能原因：基本培养基不适宜，生长素不当或用量不足，温度不适宜。

改进措施：更换基本培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用2,4-D，调整培养温度。

3.愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状
可能原因：激素过量，温度偏高，无机盐含量不当。

改进措施：减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当提高琼脂用量增加培养基硬度。

4.愈伤组织太紧密、平滑或突起，粗厚，生长缓慢
可能原因：细胞分裂素用量过多，糖浓度过高，生长素过量。

改进措施：减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度。

5.侧芽不萌发,皮层过于膨大,皮孔长出愈伤组织
可能原因:枝条过嫩,生长素、细胞分裂素用量过多。

改进措施：减少激素用量，采用较老化枝条。

培养物的不良表现及改进措施(继代培养阶段)
1.苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高
可能原因：细胞分裂素用量不足，温度偏高，光照不足。

改进措施：增加细胞分裂素用量，适当降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代。

2.苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，苗丛密集，微型化
可能原因：细胞分裂素用量过多，温度不适宜。

改进措施：减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。

3.分化率低,畸形,培养时间长时苗再次愈伤组织化
可能原因:生长素用量偏高,温度偏高。

改进措施：减少生长素用量，适当降温。

4.叶粗厚变脆
可能原因：生长素用量偏高，或兼有细胞分裂素用量偏高。

改进措施：适当减少激素用量，避免叶片接触培养基。

5.再生苗的叶缘、叶面等外偶有不定芽分化出来
可能原因：细胞分裂素用量偏高，或表明该种植物适于该种再生方式。

改进措施：适当减少细胞分裂素用量，或分阶段地利用这一再生方式。

6.丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽
可能原因：细胞分裂素浓度过高或赤霉素使用不当，温度过高，光照短，光强不足，久不转移，生长空间窄。

改进措施：减少细胞分裂素用量，免用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度，更换封瓶纸的种类。

7.幼苗淡绿，部分失绿
可能原因：无机盐含量不足，PH值不适宜，铁、锰、镁等缺少或比例失调，光照、温度不适。

改进措施：针对营养元素亏缺情况调整培养基，调好PH值，调控温度、光照。

8.幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中
可能原因：瓶内气体状况恶化，PH值变化过大，久不转接导致糖已耗尽，营养元素亏缺失调，温度不适，激素配比不当。

改进措施：及时转接、降低接种密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度。

培养物的不良表现及改进措施(生根阶段)
1.培养物久不生根，基部切口没有适宜的愈伤组织
可能原因：生长素种类、用量不适宜；生根部位勇气不良；生根程序不当；PH值不适，无机盐浓度及配比不当。

改进措施：改进培养程序，选用适宜的生长素或增加生长素用量，适当降低无机盐浓度，改用滤纸桥液培养生根等。

2.愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合。

可能原因：生长素种类不适，用量过高，或伴有细胞分裂素用量过高，生根诱导培养程序不对。

改进措施：调换生长素种类或几种生长素配合使用，降低使用浓度，附加VB2或PG等减少愈伤，改变生根培养程序等
组培问答（不断更新）
1.有些植物在组培生根阶段会把大量素和糖减半，我应根据什么来判断是否需要减半？
答：在组培过程中，我们提起配方往往只局限于激素的配比和添加物的使用，其实对基本培养基的构成和培养条件（温度、光照、湿度、PH等）都属于配方的范畴。

在这方面的调整主要是根据实际培养状况灵活调整。

在生根阶段，试验证明培养基高渗透势或液体培养基有利于营养素和激素的运转，有利于根的发生和形成质量，因此大部分植物在生根过程需要调整基本培养基的组成。

但具体需不需要应该通过对比试验确定。

2.什么是滤纸桥生根？
答：1）滤纸桥生根技术是分化苗直接瓶外生根技术，其作用主要是简化生根环节，提高炼苗成活率，降低组培成本，同时还可以对污染苗进行最大程度的利用。

3.组织培养中出现黄化的原因有几种？
答：黄化是指在组培过程中由于培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的幼苗整株失绿，全部或部分叶片黄化、斑驳。

这一现象在植物组织培养中比较常见，特别在部分木本花卉中较为常见，引起黄化的主要原因是培养基中Fe的含量不足；各矿质营养不均衡；培养环境通气不良，瓶内乙烯含量升高；激素配比不当；糖用量不足或长时间不转移糖已耗尽；PH值变化过大；培养温度不适；光照不足等。

解决的方法是，首先在配制母液和培养基的制作过程中，要检查仪器设备是否准确，还要认真细致地核对每项称量的每一个环节；及时转接培养物；使用透气的封口膜以改善瓶内通气状况；适当调节pH值、激素配比和无机盐浓度；配制培养基时切记不要忘记加糖；控制培养室内的温度；适当增加光照；另外，在培养基中添加抗生素类物质如青霉素、链霉素、头孢霉素等，有时也会出现幼苗黄化现象，应适当减少用量或停止使用。

4.人工种芽的形成标致是什么，怎样才能算是一个完整的人工种芽？
答：一个完整的人工种子是由体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三部分组成。

它的优势在于：1、培养条件可以人为控制，省地省工，可直接播种。

2、人工种子制作时，可加入营养物质、植物生长调节剂、固氮菌、杀虫剂等。

3、以用于生产人工种子的体细胞胚，可以利用生物反应器大规模生产，效率极高。

4、一些珍贵种苗或树种可以通过人工种子，加速其生产应用。

存在问题：1、并非所有植物都能培育出大量高质量的体细胞胚。

2、目前的人工胚乳和种皮还不够理想，不能有效防止微生物的腐蚀。

3、人工种子的贮藏问题有待于进一步完善。

5.在组培中胚状体在外部形态上是如何与愈伤组织区别的？
答：大量实验证实，植物体细胞具有成胚的潜力，由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚（somatic embryo）。

一般情况，体细胞组织形成愈伤组织之后3周内，在愈伤组织上出现大量胚，这些胚是由愈伤组织外层细胞以及深部细胞起源的。

在离体或活体条件下，体细胞经原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷胚期和子叶期等阶段形成的胚叫体细胞胚状体。

从外植体或愈伤组织表面产生胚状体的情况较为常见。

从愈伤组织向球形胚过渡的标志是细胞的活跃分裂形成一团致密的没有表皮层的细胞团结构，可以明显地与疏松的愈伤组织区分开。

鉴别胚状体的标准：（1）胚状体具有极性，也就是说胚状体在发育的早期阶段，在其相反的两端分化，分别出现茎端和根端，是一种单极性结构。

（2）在组织学上，胚状体的维管组织与母体植物或外植体的维管组织一般没有联系，其维管组织的分布呈“Y”字形。

而根或芽的分化，里面长出原形成层束，与愈伤组织形成的或外植体中的维管组织往往相连。

6.光照强度多少lx是怎么计算的？
答：1）光照强度＝光通量/单位面积。

至于Lux的换算对很多人来说也是比较抽象。

现推荐一种简单的换算方法。

光是一种辐射能，故各种光源所发出的光能都有一定的强度。

这种光能的强度，就叫作“光强度”。

它一般以烛光为计算单位。

即以点然一种特制的鲸油蜡烛，依它沿水平方向的发光强度作为基数－－1烛光。

现在所用的以电源发光的光源，其光强度的计算单位仍以烛光为标准，称作国际烛光。

在习惯上我们称瓦特。

２５瓦特的电灯，其光强度等于２５国际烛光。

2）光照强度的换算实际上要用英尺烛光，但是我还没有找到英尺烛光和日光灯之间的关系公式。

英尺烛光是距光源一米处每平方英尺的光照强度，可以说它是这样规定的：就是一个标准烛光（我不知道这样说对不对）在一米处一平方英尺的垂直面积上的光照强度是一英尺烛光。

计算式：1标准烛光＝10.76Lux
3）因为光照强度和发光强度的单位换算中有都有“标准烛光”这一关系，为此，我认为完全可以用发光强度来推测光照强度的相关性。

又因为同一标准的烛光，其在相同距离的光照强度应该也是一样的，而且日光灯的瓦数和国际烛光的发光强度是相同的，所以，英尺烛光也可以和日光灯的光照强度相同，也就是说等于日光灯的瓦数。

例如130瓦的日光灯，在一米处的光张强度为30×10.76＝322.8Lux
但在组培生产中，需要知道的是30cm之内的光强。

这个要换算起来就只好另辟蹊径喽－－就是用照度计。

2、水解酪蛋白用量在各种植物培养基中浓度在200mg/L～500mg/L之间。

具体情况要参考你所配置的培养基种类。

水解酪蛋白（CH)和水解乳蛋白（LH)是多种氨基酸的混合物，对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用，通常用量在500mg/L，特别是当有高水平IAA存在时更是如此。

对于酪蛋白不管是酸解还是酶解，作用都是一样的，但考虑到组培苗的异养功能，酸解应该更有利于发挥其作用。