药物分析第七章光谱分析法紫外可见光谱法
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L—光路长度（cm）
C—被测物浓度
mol/L ε：摩尔吸光系数
g/100ml
E注作
E1% 1c m
Baidu Nhomakorabea
百分吸收系数
E11c%m和ε为物质的物理常数，E、L不变测定 吸收度A可求出溶液浓度C
2、吸收度的测定方法
分光光度计
（1）紫外—可见分光光度计组成
光源 单色器 吸收池 检测器 数据记录处理
（2）测定注意事项：
AX=ELCX
AR=ELCR
AX CX AR CR
AX AR分别为供试品和对照 品吸收度（已测）
CX CR分别为供试品和对照 品浓度（CR已知 ）
CX=（AX/AR）CR
2、吸收系数法（有文献记载 E11c）%m
A=
E1% 1c m
L.C
A
C=
E1% 1c m
L
A ：可测出吸光度
E1% 1c m
λ=275nm（弱）
n
* λmax=275nm
200
250 300
（3）3—甲基—3—戊烯酮 CH3 O
CH3CH=C—C—CH3
分析：n
1gε
230nm 4.0
3.0 310nm
2.0
* 弱
* 强
1.0 200 250 300 350
λ（nm）
CH3 O n
（4）香芹酮：
10gG
CH2 CH3
λ=272nm 最大吸收
规定
λ=216nm 最小吸收
（2）《中国药典》盐酸氯丙嗪 用盐酸（9-1000）配制5kg/ml的供试品溶液 254nm 最大吸收
规定 306nm 最大吸收
且306处 A为0.4
2、比较吸收度比值定性鉴别 物质的吸收峰较多时，规定几处吸收度
比值为参数鉴别。
例：两性霉素B的鉴别（七个共轭健）
分子中的电子
① 电子 ② 电子
③孤对电子
*
*
分子中的能级：
n
n
价电子跃迁类型：
n
吸收光波：
* λ=275~295nm * λ=160~180nm * λ=150~160nm * λ=125~150nm
（共轭体系λ=210nm）
共轭体系越长，内能越低，吸收波长变长， 如：β—胡罗卜素结构有11个共轭双键
（二）在杂质检查中的作用 若主药在某处无吸收，而杂质有较大吸收， 可通过规定杂质吸收度的方法限制杂质。
药物：地蒽酚 例：
杂质：二羟基蒽醌
(来源)
λ=432nm
地蒽酚：无吸收（A=0）
二羟基蒽醌：有最大吸收
E1% 1cm
495
《中国药典》用0.01%的地蒽酚溶液控制432nm处的吸
光度不超过0.12,则控制杂质含量不大于2.0%。
二者的紫外吸收光谱如图： 《中国药典》采用双波长法测定SMZ 含量。
1、TMP紫外吸收
2、SMZ紫外吸收
3、SMZ+TMP 紫外吸收
3 2 1
257 304
：文献查出
求出C 注：所用仪器严格校正（波长、狭缝等）
以保证测试条件与 E11c%m的文献条件完全
一致。
3、标准曲线法
配制标准浓度梯度（对照品）在λmax处测
吸收度A做吸光度—浓度曲线，测试样品 时，根据A在标准工作曲线上查C。
4、计算分光光度法 当混合组分中各组分的吸收度相互叠加干扰无法 直接测定，可采用计算的方法，消除干扰。 应用实例1：双波长分光光度法测定复方磺胺甲 恶唑片中各组分的含量，（复方磺胺甲恶唑片含 有磺胺药物（SMZ）和增效剂甲氧苄啶（TMP）
（计算 A=ELC，0.12=495×1×C，
C=0.0002%，
0.0002% 2% ） 0.01%
例: 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾 上腺素酮的方法为:310nm波长处测定，吸收度不 得超过0.05，(已知肾上腺素酮在310nm波长处的 为453，肾上腺素在该波长处无吸收)
（三）在含量测定中的应用（在λmax处测， 四种定量方法。） 1、对照品比较法（有对照品） 将对照品与供试品配成已知浓度分别在相 同条件下测定其吸光度
第七章 药物的光谱分析法
第一节 紫外可见光谱法 一、分子结构与紫外光谱 1、电磁波的分区
r射线 x射线
远紫外
波长 (nm)
分子 吸收 光后 的变 化
0.1nm
-1nm 100-200nm 价电子跃迁
近紫 外
200400n
m
光谱
真空紫外光谱
E hv h • c 能量 长 能量减少
可见光区
紫、兰、青、绿、黄、橙、红 400-800nm
*（长波端）弱
*（短波端）强
4.0
3.0 2.0 1.0
220
240 360 280 300 320
二 、紫外光谱的测定 1、定性及定量方法 （1）定性：不同物质紫外吸收不同，根据 特征参数定性。 （2）定量—郎伯比尔定律，一束平行单色 光，穿过一定厚度液层时，吸收强度与溶 液浓度及光路长度成正比。 即A=E·C·L A—吸光度 E—吸收系数
a、仪器的校正
b、溶剂的测定
c、背景的消除
d、测定波长的确定
e、供试品浓度的确定
f、仪器狭缝的调节
三、紫外—可见分光光度法在药分中的应用
（一）在鉴别中的应用
1、对比吸收光谱的特征参数（与文献比较）
核对供试品溶液的 max
E1% 1c m
A是否符合
当供试品不止一个峰时，可同时用几个峰
位作鉴别依据
例（1）《中国药典》中乙胺嘧啶的鉴别
λ=497nm 在可见光有吸收
普通紫外分光光度计只能记录200~400nm 谱带 ， 因此重要的跃迁吸收是 ： 共 轭
*（强）和 n *（弱）
4、部分化含物的紫外吸收光谱：
CH3
（1）CH3 CH2 CH2 CHCH3 分析：
* 近紫外无吸收
O
（2）CH3 — C — CH3 分析：孤立 ＜* 200nm
红外区 -25000
微 波 无线电波
0.4cm
25cm
紫外---可见光谱
分子振动 分子转动 能级变化 能级变化
红外光谱
分子转动 光谱
波长变
2、分子的内能 （1）分子中价电子的运动能量—吸收紫外 光产生电子光谱。 （2）分子中各原子的相对振动能量—吸收 红外光产生振动光谱。 （3）分子整体的转动能量—吸收远红外、 微波产生转动光谱。 3、电子跃迁的类型
①362nm 、381nm、405nm 有最大吸收
《中国药典》
②且362nm与381nm比值为
0.6
A362 0.6 A381
③ A381 0.9
A405
3、对比吸收光谱的一致性（有对照品）
采用对照品与供试品在同一条件下测定紫 外光谱后比较鉴别 例《中国药典 »已烯雌酚注射液的鉴别: 比较供试品和对照品溶液在250-450nm范 围吸收光谱一致性。
C—被测物浓度
mol/L ε：摩尔吸光系数
g/100ml
E注作
E1% 1c m
Baidu Nhomakorabea
百分吸收系数
E11c%m和ε为物质的物理常数，E、L不变测定 吸收度A可求出溶液浓度C
2、吸收度的测定方法
分光光度计
（1）紫外—可见分光光度计组成
光源 单色器 吸收池 检测器 数据记录处理
（2）测定注意事项：
AX=ELCX
AR=ELCR
AX CX AR CR
AX AR分别为供试品和对照 品吸收度（已测）
CX CR分别为供试品和对照 品浓度（CR已知 ）
CX=（AX/AR）CR
2、吸收系数法（有文献记载 E11c）%m
A=
E1% 1c m
L.C
A
C=
E1% 1c m
L
A ：可测出吸光度
E1% 1c m
λ=275nm（弱）
n
* λmax=275nm
200
250 300
（3）3—甲基—3—戊烯酮 CH3 O
CH3CH=C—C—CH3
分析：n
1gε
230nm 4.0
3.0 310nm
2.0
* 弱
* 强
1.0 200 250 300 350
λ（nm）
CH3 O n
（4）香芹酮：
10gG
CH2 CH3
λ=272nm 最大吸收
规定
λ=216nm 最小吸收
（2）《中国药典》盐酸氯丙嗪 用盐酸（9-1000）配制5kg/ml的供试品溶液 254nm 最大吸收
规定 306nm 最大吸收
且306处 A为0.4
2、比较吸收度比值定性鉴别 物质的吸收峰较多时，规定几处吸收度
比值为参数鉴别。
例：两性霉素B的鉴别（七个共轭健）
分子中的电子
① 电子 ② 电子
③孤对电子
*
*
分子中的能级：
n
n
价电子跃迁类型：
n
吸收光波：
* λ=275~295nm * λ=160~180nm * λ=150~160nm * λ=125~150nm
（共轭体系λ=210nm）
共轭体系越长，内能越低，吸收波长变长， 如：β—胡罗卜素结构有11个共轭双键
（二）在杂质检查中的作用 若主药在某处无吸收，而杂质有较大吸收， 可通过规定杂质吸收度的方法限制杂质。
药物：地蒽酚 例：
杂质：二羟基蒽醌
(来源)
λ=432nm
地蒽酚：无吸收（A=0）
二羟基蒽醌：有最大吸收
E1% 1cm
495
《中国药典》用0.01%的地蒽酚溶液控制432nm处的吸
光度不超过0.12,则控制杂质含量不大于2.0%。
二者的紫外吸收光谱如图： 《中国药典》采用双波长法测定SMZ 含量。
1、TMP紫外吸收
2、SMZ紫外吸收
3、SMZ+TMP 紫外吸收
3 2 1
257 304
：文献查出
求出C 注：所用仪器严格校正（波长、狭缝等）
以保证测试条件与 E11c%m的文献条件完全
一致。
3、标准曲线法
配制标准浓度梯度（对照品）在λmax处测
吸收度A做吸光度—浓度曲线，测试样品 时，根据A在标准工作曲线上查C。
4、计算分光光度法 当混合组分中各组分的吸收度相互叠加干扰无法 直接测定，可采用计算的方法，消除干扰。 应用实例1：双波长分光光度法测定复方磺胺甲 恶唑片中各组分的含量，（复方磺胺甲恶唑片含 有磺胺药物（SMZ）和增效剂甲氧苄啶（TMP）
（计算 A=ELC，0.12=495×1×C，
C=0.0002%，
0.0002% 2% ） 0.01%
例: 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾 上腺素酮的方法为:310nm波长处测定，吸收度不 得超过0.05，(已知肾上腺素酮在310nm波长处的 为453，肾上腺素在该波长处无吸收)
（三）在含量测定中的应用（在λmax处测， 四种定量方法。） 1、对照品比较法（有对照品） 将对照品与供试品配成已知浓度分别在相 同条件下测定其吸光度
第七章 药物的光谱分析法
第一节 紫外可见光谱法 一、分子结构与紫外光谱 1、电磁波的分区
r射线 x射线
远紫外
波长 (nm)
分子 吸收 光后 的变 化
0.1nm
-1nm 100-200nm 价电子跃迁
近紫 外
200400n
m
光谱
真空紫外光谱
E hv h • c 能量 长 能量减少
可见光区
紫、兰、青、绿、黄、橙、红 400-800nm
*（长波端）弱
*（短波端）强
4.0
3.0 2.0 1.0
220
240 360 280 300 320
二 、紫外光谱的测定 1、定性及定量方法 （1）定性：不同物质紫外吸收不同，根据 特征参数定性。 （2）定量—郎伯比尔定律，一束平行单色 光，穿过一定厚度液层时，吸收强度与溶 液浓度及光路长度成正比。 即A=E·C·L A—吸光度 E—吸收系数
a、仪器的校正
b、溶剂的测定
c、背景的消除
d、测定波长的确定
e、供试品浓度的确定
f、仪器狭缝的调节
三、紫外—可见分光光度法在药分中的应用
（一）在鉴别中的应用
1、对比吸收光谱的特征参数（与文献比较）
核对供试品溶液的 max
E1% 1c m
A是否符合
当供试品不止一个峰时，可同时用几个峰
位作鉴别依据
例（1）《中国药典》中乙胺嘧啶的鉴别
λ=497nm 在可见光有吸收
普通紫外分光光度计只能记录200~400nm 谱带 ， 因此重要的跃迁吸收是 ： 共 轭
*（强）和 n *（弱）
4、部分化含物的紫外吸收光谱：
CH3
（1）CH3 CH2 CH2 CHCH3 分析：
* 近紫外无吸收
O
（2）CH3 — C — CH3 分析：孤立 ＜* 200nm
红外区 -25000
微 波 无线电波
0.4cm
25cm
紫外---可见光谱
分子振动 分子转动 能级变化 能级变化
红外光谱
分子转动 光谱
波长变
2、分子的内能 （1）分子中价电子的运动能量—吸收紫外 光产生电子光谱。 （2）分子中各原子的相对振动能量—吸收 红外光产生振动光谱。 （3）分子整体的转动能量—吸收远红外、 微波产生转动光谱。 3、电子跃迁的类型
①362nm 、381nm、405nm 有最大吸收
《中国药典》
②且362nm与381nm比值为
0.6
A362 0.6 A381
③ A381 0.9
A405
3、对比吸收光谱的一致性（有对照品）
采用对照品与供试品在同一条件下测定紫 外光谱后比较鉴别 例《中国药典 »已烯雌酚注射液的鉴别: 比较供试品和对照品溶液在250-450nm范 围吸收光谱一致性。