长残留除草剂广灭灵的生物测定方法

!"# 试验方法 !"#"! 生物测定标准曲线的制定 预先采集的土壤经自然风干，去除杂质后待 用。将供试作物种子经浸种后再催芽，待种子露 白后备用。将广灭灵混入土样中，配制成 $， !， !$， %$， !$$， &’’， %’’ !(・ )( *! 一系列浓 度梯度的广灭灵毒土，将不同处理药土装入纸杯， 每纸杯播种 % 粒刚露白的小麦种子，每处理重复 + 次 。将纸杯放入 #,"% ! !# - 光照 （ # 级） !./% ! （ ’ 级） 的培养箱中间歇光照培养。 !# - 光照 小麦分别在培养后的第 &，+，% 天测量株高、 株鲜重等指标，建立与广灭灵浓度之间的标准曲 线；玉米分别在培养后的第,，0，. 天测定叶绿素 的含量，建立其与广灭灵浓度之间的标准曲线。 !"#"# 叶绿素含量的测量及计算方法1+2 先将丙酮和无水乙醇等量混合成浸提液，将 所测材料剪碎后加!’ 34 浸提液，加塞置暗处，于 下进行浸提。一定时间后观察浸提 室温 （ !’"&’ !） 情况。待材料完全变白，即可测定浸提液的光密 度。将色素提取液倒入厚度为 ! 53 比色皿中，将 波长分别调至,,& 63 和 ,+% 63 处，用丙酮和无水 乙醇等量混合液调零，测定两波长处的光密度值。 将 ,,& 63 和 ,+% 63 处测得的光密度值代入 如下公式7 !" 8 !#/0#,,& 9 #:%;#,+% !$ 8 ##:;#,+% * +:,0#,,& !! 8 !% < !& 8 #’"&#,+% < ."’+#,,&
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１
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材料与方法
试验材料 供试植物 玉米 （ 东农 %#$） 、小麦 （ 东农’$#.） 。 供试药品 ’/4 广灭灵乳油 （ 丰达牌，大连 松辽化工公
司） 、无水乙醇 （ 天津泰兴试剂厂） 、丙酮 （ 莱阳双 双化工有限公司） 。
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子 播 在 !， "， #， "!， $#， #!， "!!， $#!， #!!， %#!，" !!! !& ’& "" 个浓度广灭灵的毒土里，培 ・
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养箱间歇光照培养 ) * 后，分别于培养后的第 )，%，+ 天测量叶绿素的含量，计算不同天数玉米 -. "/"） 间的关系。 叶绿素含量抑制率与广灭灵 ! ,（ 图 01) 分别是玉米培养后的第 )， % 和 + 天的
近年来，生物测定方法以其快速、准确和对 象性强等特点逐渐受到农药领域的重视，如开发 新农药、农药毒力和活性测定、农药毒理、农药 对环境影响和农药残留测定等。除草剂的室内生 物测定方法主要有培养皿法、浮萍法、小麦去胚 乳法、玉米根长法和小杯法等 。
2!3
麦、谷子和苜蓿等作物。施用广灭灵后的次年春 季，可以种植水稻、玉米、棉花、花生和向日葵 等作物，可根据每一耕作区的具体条件安排后茬 作物213。 农药的快速测定方法一直是困扰农药科学工 作者的一道难题，工作开展了很多但收效并不大， 我国近些年在农药残留快速检验方法方面的新技 术、新成果不多。农药残留的生物测定方法是利 用生物的生 理生化反应 来判断农药 残留 的 活 性 以及农药污染的情况，在测定时无需前处理或前 处理比较简单、速度快、直观。目前，有关广灭 灵的 生物测定方 法还未见报 道，本试验 通 过 对 不同指示植 物在不同培 养介质中对 广灭 灵 的 反 应，摸索出简便、易行、准确的广灭灵生物测定 方法。
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由图 # 可知，整个设计的浓度梯度规律性强， 其中 !% 代表叶绿素 = 含量、 !& 代表叶绿素 > 含 量 、 !’ 代 表 总 叶 绿 素 含 量 。 根 据 （ !） ， （ #） ， 式计算出提取液中叶绿素 =、叶绿素 > 及总叶 （ &） 绿素的浓度。再将叶绿素 =、> 及总叶绿素的浓度 式，求出所测材料单位质量或单位面积 值代入 （ +） 的叶绿素=、> 或总叶绿素含量。 在低浓度范围内表现出药剂对株高有促进作用，其 促 进 浓 度 区 间 为 ： ’ "!’ !(・ )( *!， ( $*’:’’;;) < ・ ’:’,+；* $ ’:;;0%，在 !’"%’’ !( )(*! 浓度范围内对 株高起抑制作用，( $ ’:’+;%) <’:!%+,，! 8’:;%&;。 由图 & 可知，株高与药剂浓度间在整个设计的 浓度梯度范围内规律性差，但在一定区间范围内 ・ 有显著的相关性，当浓度区间为 !’ "&’’ !( )( *!， ( $ ’:’+%0) * ’:’,,，* $ ’:;..,。培养第 % 天时小麦 株高的有效指示范围明显的比培养 & ? 和 ? 天的 窄，表明小麦的鲜重与药剂的浓度间没有显著的 相关关系。
条件下，对广灭灵生物测定方法进行筛选。结果表明，利用土培生测法培养的小麦株高抑制率与药剂的浓度在不 同的范围内有显著的相关性；通过连续测定玉米叶片中叶绿素的含量，发现培养至第 % 天的玉米叶片叶绿素含量 抑制率和药剂浓度相关性最好，并在低浓度范围内表现出药剂对叶绿素含量提高有促进作用。以玉米叶绿素含量 作为生测指标不仅指示的浓度范围广，还具有良好的重现性，是广灭灵理想的生物测定指标之一。 关键词： 广灭灵 ； 生物测定；玉米；叶绿素 中图分类号：0#!1；0’/%"’ 文献标识码：&
刘亚光１，２，杨 谦３
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（ !" 哈尔滨工业大学环境科学与工程博士后流动站，黑龙江 哈尔滨 !#$$$!；%& 东北农业大学农学院，黑龙江 哈尔滨 $& 哈尔滨工业大学理学院生命科学与工程系，黑龙江 哈尔滨 !#$$$! ）
摘
要：试验以小麦、玉米等作物为指示植物，分别以株高和叶绿素的含量为生物测定指标，在不同的培养
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中的生物活性可持续 . 个月以上，施用广灭灵当 或次年春天 （ 即施用 年的秋天 （ 即施用后 ’*# 个月） 后 . *!$ 个月） 都不宜种植小麦、大麦、燕麦、黑
收稿日期：%$$’($)(!) 基金项目：黑龙江省博士后基金 （ *+,$$$-)） ，女，黑龙江人，博士，副教授， 作者简介：刘亚光 （ !)./(） 主要从事农药残留、农药生物测定技术及环境污染治理方面教学 与研究工作。
３
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结
论
小麦为指示植物的生物测定方法 以小麦为供试作物，株高为生测指标，在 $)2# #
下 $ 级光照、"+2# #下 ! 级光照间歇处理，培养 0 * 时有效指示范围最宽。当浓度区间在 !$"! !& ・ ’& (" 时，株高与浓度间直线相关方程为 # " ( !2!!33$ / ・ !2!)0， % " !233%#；浓度在 "! $#!! !& ’& (" 范围内， 直线方程为 # " !2!03#$ (!2"#0)，% ,!23#43。 #%! 玉米为指示植物的生物测定方法 以玉米为供试作物，叶绿素含量为生测指标， 测定第 ) 天叶绿素抑制率和浓度的关系规律性最好， 在低浓度范围内表现出药剂对株高有促进作用，其促 进浓度区间为："$#! !& ・ ’&("，#, (!2!)$3$ / !2!$$0， % , !233$)； 在 #! $" !!! !&・ ’& (" 浓 度 范 围 ， # , !24!"0$ ( "2#00， % , !23"3# 内有相关的抑制作用； ・ 有效指示范围为 "$" !!! !& ’&("。
& 参 考 文 献 ’
5 " 6 吴长兴7 孙枫7 王强7 等2 几种除草剂的生物测定及复配效应研 究 5862 浙江农业学报7 $!!!7 "$9):; 4%0(4%%2
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秦宜哲O 刘清瑞O 化学除草技术问答 ]_^5 郑州‘ 河南科学技术 出版社O NaaDO NbMNa5 ]ec
广灭灵是 ’() 公司/$ 年代创制的除草剂，它 是低毒选择性苗前除草剂，通过根、芽吸收，向 上传导到植物体各部份，影响胡萝卜素和叶绿素 的生物合成，从而抑制植物光合作用而导致植株 死亡。由于大豆具有特异的代谢作用而使其有效 降解，因而被广泛用于大豆田除草剂，而且有一 定增产作用，故在国内外受到高度重视。广灭灵 是我国常用的除草剂，它能抑制敏感植物叶绿素 的生物合成，吸收到药剂的种子虽然能萌芽出土， 但因无色素，在短期内即会死亡 。广灭灵在土壤
第 $. 卷 第 ’ 期 +### 年 / 月 文章编号 !##",-$%（ +###） K’,K’.1,K’
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长残留除草剂广灭灵的生物测定方法
叶绿素含量 （ 3( ・ (*!） 8 ! ! 浓度 （ 3( ・ （ 34） 4 ） % 提取液总体积 % ! ’’’ 重量 （ (）
*!
度的广灭灵毒土里 ，经培养箱间歇光照培养后， 分别于培养后的第&、+、% 天测量株高，建立不同 天数小麦株高抑制率与广灭灵浓度的关系。结果 见图 !"#。
由图 ! 可知，虽然整个设计的浓度梯度无规律 性，但在一定区间范围内有较高的相关性，且相关 )(*!，方程为 ( $ ・ 性较强，其浓度区间为 !’"!’’ !( ’:!#+#) * ’:,&.&，! $ ’:;;;!，有效指示范围窄。
２ 结果与分析
#"! 以小麦为指示植物进行生物测定的方法研究 利用上述试验方法，将小麦发芽的种子播在 ’， !， !’， %’， !’’， &’’， %’’ !(・ )( 一系列浓
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第0期
刘亚光等：长残留除草剂广灭灵的生物测定方法
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以玉米为指示植物进行生物测定 同样利用上述试验条件，将用玉米发芽的种 叶绿素含量，都在药剂低浓度范围内促进，高浓 度范围内抑制，各自的直线回归方程第 ! 天，分 别 为 ： # " (!2!)$3$ / !2!$$0， % " !233$)； # " !24!"0$ ( "2#00、 % " !23"3#，第 % 天： # " (!2!"0+$ / !2!04#， % " !2##%； # " !2$")#$ ( !23+++， % " !2+03，第 + 天： # " (!2!$%)$ ( !2$##%， % " !2#0!3。 可以看出，其中第 ! 天规律性最好，玉米叶绿素 的含量与药剂浓度呈显著的相关关系。
‘ NaMCD5 八一农垦大学学报O CEEEO NC （ T） 张政宪O 谭桂茹O 黄元极O 等5 植物生理学实验技术 f_c5 沈阳： 辽宁技术出版社O Naba5
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张金艳O 曲虹云5 抑制光合作用除草剂的生物测定 ]dc5 黑龙江
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