钩藤中总生物碱提取工艺研究 (2)

[检验技术]钩藤中总生物碱的提取分离研究

梁勇,温碧珍

摘要:目的　探讨钩藤中的总生物碱的提取分离方法。　方法　醇类溶剂提取法、离子交换树脂分离法。　结果

　0.1%盐酸乙醇作为提取溶剂提取总生物碱量最多,001×7型强酸性阳离子树脂分离效果最好。　结论　乙醇提

取、强酸性阳离子树脂提取、分离总生物碱是一种经济简便、效率较高的方法。

关键词:钩藤;总生物碱;强酸性阳离子树脂;薄层层析

中图分类号:O658 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2006)01-135-02

Studied on the extraction and separation of total alkaloids from ramulus vncariae cum vncis.LIANG Yong,WE N Bi-zhen.(Hainan Sanyang Pharmaceutical Co.Ltd.,Haikou570312,Hainan,P.R.China)

Abstract:Objective　To establish a method for the extraction,separation of the total alkalodis from ramulus vncariae cum vn-cis.　Metho ds　Alcohol and strong acid cation exchange resin were used in the extraction and separation.　Results　Maximum al-kaloids could be extracted with0.1%acidic alcohol and best separation results could be obtained by using001×7strong acid cation exchange resin.　Conclusion　The methods of extraction of alkaloids with alcohol and separation with strong acid cation exchange resin are economy,convenient and highly efficient.

Key words:Ramulus vncariae cum vncis;Alkaloids;stromg acid cation exchange resin

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　试剂　乙醇、氯仿、氢氧化钠、盐酸、丙酮;吸附剂:1-1.5g硅胶+CMC0.2%;现色剂:改良碘化铋钾试剂;对照品:总生物碱。

1.1.2　仪器　层析柱(内径5cm);36/100型旋转带蒸馏仪;S11-4-Ⅱ/电热恒温水浴锅。

1.1.3　茜草科植物钩藤的干燥带钩茎枝。

1.2　方法

1.2.1　钩藤总生物碱提取条件的选择　对钩藤总生物碱的提取如选用氯仿、乙醚等非极性溶剂,存在易燃、毒性等问题[1]。如选用酸水作为提取溶剂,虽然经济简便,但回收困难、易腐蚀。因此,综合考虑以上因素,并结合生物碱的物理化学性质,本实验主要选择95%乙醇0.1%盐酸热回流提取和80%乙醇0.1%盐酸温浴的提取条件考察对钩藤总生物碱提取的影响。

1.2.2　方法1　钩藤药材粉末100g※(95%乙醇、0.1%盐酸)热回流提取※过滤※提取液(减压60℃回收乙醇)※0.1%酸水溶解(浓缩)※过滤※浓滤液100ml(pH2～3)※至分液漏斗中※浓氨水碱化pH10～11※氯仿萃取500ml※回收氯仿※总生物碱

1.2.3　方法2　钩藤药材粉末100g※80%乙醇0.1%盐酸(25℃浸泡12h)※80%乙醇0.1%盐酸(700ml) 60℃温浴3h※抽滤※合并滤液(60℃减压回收乙醇)

※酸水(0.1%盐酸)浓缩※浓缩液100ml(pH2～3)※至分液漏斗中(浓氨水碱化pH10～11)※氯仿萃取500ml※回收氯仿※总生物碱

1.3　钩藤总生物碱分离条件的选择　通过对各种方法的比较,本实验主要以阳离子树脂作为主要分离材料,研究不同型号阳离子树脂对生物碱的吸附量、吸附力强弱以及洗脱条件的摸索,选择最佳分离总生物碱的工艺。样品液制备:根据提取方法2提取钩藤粉末200g得800ml酸溶液

1.3.1　739型强酸性阳离子树脂　柱直径:5cm;树脂用量:约500g。过程:树脂预处理※上样※蒸馏水洗至中性※95%乙醇0.25%氨水洗脱约5000ml※回收乙醇※生物碱0.5407g。

1.3.2　001×7型强酸性阳离子树脂　柱直径:5cm;树脂用量:约500g。过程:树脂预处理※上样※蒸馏水洗至中性※95%乙醇0.25%氨水洗脱5000ml※回收乙醇※生物碱0.5527g。

1.4　展开剂　样品1:无水乙醇溶解;环己烷-乙醚-乙酸乙脂:8:1:1:0.1;样品2:无水乙醇溶解;氯仿-醋酸乙脂-甲醇:10:4:1;样品3:氯仿溶解;氯仿-丙酮:5:4展开;样品4:氯仿溶解;氯仿-丙酮-二乙胺:5:4:1;展开距离:12c m。

2　结果

2.1　层析(TLC)检测中不同的展开剂对Rf值的影响　从表1结果可以看出对于第1、第2种展开剂的Rf

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中国热带医学2006年第6卷第1期　CHIN A TR OPICAL MED ICINE Vol.6No.1Janury2006 作者单位:海南通用三洋药业有限公司,海南海口　570312.

较小,并不能把总生物碱中的各种生物碱完全分开,而第4种展开系统的Rf太大,各类生物碱也未完全分离,而第3种展开剂系统较为理想。

表1　不同展开剂对Rf值的影响

组别Rf值

样品10.22

样品20.20

样品30.45

样品40.75

2.2　钩藤总生物碱不同提取条件选择的结果　结果显示两种实验方法并无明显性差异,见表2。第1种方法虽然在总生物碱提取率方面高于第2种,但其因是加热提取就可能提取出更多的杂质或破坏生物碱,而第2种方法提取温度低,不破坏生物碱结构,杂质少。

表2　同提取溶剂温度对提取效果的影响

组别溶剂总生物碱量

方法195%乙醇0.6047g

方法280%乙醇0.5531g

2.3　钩藤总生物碱不同分离条件选择的结果　由表3可见739型强酸性阳离子树脂吸附生物碱量少,吸附不稳定,洗脱出来时杂质多,不是理想的分离材料。001×7型强酸性阳离子树脂也能吸附分离大部分的原料药中的生物碱,杂质也能洗脱掉。所以,用0.1%盐酸80%乙醇作为提取溶剂,以001×7型强酸性阳离子树脂提取、分离总生物碱是一种经济简便、效率较高的方法。

表3　不同型号阳离子树脂对生物碱的吸附分离

组别总生物碱

739型强酸性阳离子树脂1.5042g

001×7型强酸性阳离子树脂2.4377g

3　讨论

3.1　钩藤总生物碱不仅在强酸性阳离子树脂上吸附力大,而且在弱酸性阳离子树脂上也是如此[2],本专题中的洗脱方式洗脱都比较慢,因此需要改变一种洗脱方法。

3.2　在从树脂中洗脱杂质时,最初只用蒸馏水洗脱并未能把杂质完全洗脱下来,在水洗完后再用乙醇浸泡洗脱,就能把大部分杂质除去,或者把树脂从柱上拿下,放在烧杯中乙醇清洗,更易除去杂质而不损失生物碱。

3.3　以上薄层层析的定性分析时,喷改良碘化铋钾显色不持久,可再喷60%的硫酸增强显色,因为在酸性条件下生物碱才能与碘化铋钾反应完全。

3.4　生物碱的提取溶剂有多种,但非极性溶剂如氯仿、乙醚作为提取溶剂其毒性大且不安全,因此采用0.1%盐酸作为钩藤总生物碱的提取溶剂,就能提取大部分的生物碱,而且乙醇也较容易回收、经济等。

参考文献:

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[2]周文华,杨辉荣,岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展.当

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收稿日期:2005-12-02

(上接第128页)

的。而近年来在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中又发现质粒介导的AmpC酶。往往处于持续高水平状态,而且常规的青霉素类、三代头孢菌素和头霉素类为耐药。由于对检测质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶没有相应标准[3],如果是只靠表型的方法是不能够确认是否产AmpC酶。因为对于一种细菌来说,对付抗生素不止有一种机制,而别的机制也可能产生同样的耐药表型[4]。所以对于表型结果高度怀疑产AmpC酶的细菌,只有进一步做三维试验和β-内酰胺酶抑制剂效应试验来明确诊断。目前国内相关的报道革兰阴性菌AmpC酶的检出率不高[5,6],实验室应重视这方面的工作,及时、准确地检测细菌AmpC酶,以防其通过质粒进行传递,引起医院感染的暴发流行。参考文献:

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收稿日期:2005-08-31

136 CHINA TR OPICAL MEDICINE Vol.6No.1J anury2006　中国热带医学2006年第6卷第1期