大肠杆菌的分离鉴定

术式
两试管斜面移植时，左手斜持菌种管 和被接种管，管口相齐，管底放在拇指和食 指间，松动两管棉塞，将管口进行火焰灭菌， 使其靠近火焰，将接种环深入管内，先在无 菌生长的培养基上接触使之冷却，再挑取少 量的细菌后，拉出接种环，立即伸入另一管 斜面培养基上，勿碰到斜面和管壁，直达斜 面底部，从底部开始划曲线，向上到斜面顶 端，管口火焰灭菌，塞好棉塞，接种完毕。 接种环火焰灭菌后，放下接种棒最后在斜面 管壁上注明日期、接种者。置370C，温箱培 养
• 结果：培养基变黑为阳性，不产生黑色为阴性。 大肠杆菌为阴性，沙门氏菌为阳性
3 硝酸盐还原实验
• 原理：有些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚 硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐与对位氨基苯 磺酸起作用后，在与α-萘胺反应，生成红色偶氮 化合物。
• 方法：将被检细菌接种于硝酸钠蛋白胨培养基内， 370C温箱内培养24h。
抑菌直径（mm） 敏 感 性
>20
极敏感
15-20
高敏感
10-14
中敏感
<10
低敏感
0
不敏感
三、生化实验
1糖发酵试验
• 原理：各种细菌具有不同的酶，有的细菌能分解某些糖类 而产酸产气，有的细菌虽能分解某种糖类，但只产酸不产 气，有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。
• 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在各种含指 示剂的糖发酵管内，将发酵管倒置与370C温箱内培养24h
斜面和深层均为红色
斜面为红色；深层为黄色； 若产生H2S，为黑色
分离鉴定---麦康凯培养基
• 原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部 分革兰氏阳性菌的生长，培养基含乳糖， 大肠杆菌能分离乳糖，使pH下降（中性指 示剂5.5--7.5，红--黄）形成红色菌落，而 沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌 落小且为无色
• 结果：培养液不变色----无变化（—）
培养液变为黄色----产 酸（+） 培养液变黄并有气泡----产酸产气（+）
2 硫化氢试验
• 原理：某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑 色的沉淀物。
• 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在 硫化氢培养基中，370C温箱内培养24h
• 结果：再加试剂甲、乙各2滴，在30s内出现红色 即为阳性；若无颜色出现，加少量的锌渣，随后 出现红色，则是真正的红色
结果判定
• 鲜桃红色或微红色，菌 落中心呈深桃红色
• 圆形，扁平，边缘整齐， 表面光滑，湿润
二、药敏试验
方法：取一菌种，用灭 菌的接种环致密划线 于琼脂表面（可重复 来回划线），用无菌 镊子，将各种抗菌药 物圆纸片，分别贴于 培养基表面。各片距 离相等，370C，24h 后，观察结果。
药敏结果判定
大肠杆菌的分离鉴定、药敏实 验及生化实验
目的要求
• 熟悉鉴别培养基的原理 • 了解大肠杆菌的主要生理生化特性
一、鉴别培养
菌种 培养基类别
麦康凯培养基
大肠杆菌
红色菌落
沙门氏杆菌
无色或ห้องสมุดไป่ตู้黄色菌落
SS琼脂培养基
红色菌落
浅黄色菌落
伊红美兰琼脂培养基
三塘铁培养基
紫红色或紫黑色并带有金 粉红色菌落 属光泽菌落