葛根高效液相色谱指纹图谱的研究
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收稿日期 O $ $ ’ P / / P / $ W 修订日期 O $ $ 5 P $ & P $ / 基金项目 O 江苏省高校自然科学研究计划项目 # % $ & 6 $ $ 7 , X= ;V Y& 作者简介 O 陈 斌# 男# 汉族, 江苏南京人! 现在读南京中医药大 / 7 9 9 P , ! ! 学博士研究生 ! 硕士学位 ! 主要从事新药开发与指纹图谱研究工作 %
宜药用 " 为了进一步探讨葛根的鉴别特征 ! 有助于规范用药 ! 本文 野葛, 指纹图谱的构建进行了初步 采用高效液相色谱法对葛根# 研究! 以期为葛根的药材鉴别Q 质量评价以及质控标准制定提供 依据 " % 仪器与试药 自动进样器 , / / $ $液相色谱仪 # ! Y) @ + < z = K YK 检测器 " 葛根素对照品为实验室自制 " 重蒸去离子水 # 实验室 制 备 , ! 甲 醇# 上 海 化 学 试 剂 有 限 公 司! 分 析 纯W 色谱纯, 乙 ! ; < G @ >公 司 ! 醇# 上海化学试剂有限公司 ! 分析纯 , " 葛根采自浙江杭州Q 浙江湖州Q 湖南Q 河南Q 广东等地或市售 品! 采购时间为 共/ 经笔者鉴定均为豆科植物 $ $ P / / ! $份样品 ! 野葛 B 的干燥根 " # % , % C ) * " * % "D . E " , " F@ + + G JD H@ ! 方法与结果 置锥形瓶中 ! ! " % 供试品的制备 精密称取葛根药材粗粉 $ % /) !
表 / 回收率实验结果 序号 / & ’ 5 样品量 0* ) $ % 5 $ $’ $ % 5 $ ’/ $ % 5 $ $& $ % 5 $ ’6 $ % 5 $ $7 加入量 0* () $ % 5 6 $ % 5 6 $ % 5 6 $ % 5 6 $ % 5 6 实测值 0* () / % / $ 7 / % / $ 5 / % / / / % / / 5 / % / $ 回收率 # 1, 7 8 % & 7 9 % ’ 7 8 % 8 6 7 8 % ’ 8 / $ $ % / 平均回收 率# 1, 2 3 4 # 1,
时珍国医国药 $ $ 5年第 / 6卷第 5期
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匀! 水浴蒸干 " 按供试品溶液的制备方法配制供试液 " 分别精密吸 各 注 入 液相色谱 取该溶液和 对 照 品 溶 液 # $ % $ & ’() * , $. ! (+ + 仪! 色谱条件同前! 记录色谱图! 并按外标法以峰面积计算! 结果 见表 / "
的一项质控指标 "
关键词 O 葛根 W 指纹图谱 W 高效液相色谱法 中图分类号 O 文献标识码 O 8 ’ % \ Y
文章编号 O / $ $ 8 P $ 8 $ 5 # $ $ 5 , $ 5 P $ & 8 ’ P $ -
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葛根高效液相色谱指纹图谱的研究
陈 斌 !刘训红 !蔡宝昌
/ $ $ 7 , 南京中医药大学 ! 江苏 南京 #
摘要 O 目的 O 建立葛根 # 野葛 , 的高效液相色谱 # 指纹图谱 " 方法 O 用反相高效液相色谱 # , EZI , ZI [ A \ I [ A K YK 法测定葛 根的指纹图谱 ! 并作相似度比较分析 "结果 O 初步建立了葛根的指纹图谱 "结论 O 指纹图谱法重现性好 可作为葛根 ! ZI [ A
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分别精 ! " # 样品测定 连续 &批样品按上述方法制备样品溶液 ! 密量取样品溶 液 和 对 照 品 溶 液 # 各 注 $ % $ & ’() * , $. (+ + 入液相 色谱仪 ! 按外标法以峰面积计算含量 " 结果见表 "
表 - 样品含量测定结果 批号 / $ ’ $ 9 6 $ ’ $ 9 9 $ ’ $ 9 8 8 % 7 7 % 8 / 7 % $ & 5 8 % 6 8 6 7 % $ 5 9 8 % 7 9 含量 & 8 % & ’ 7 % ’ 6 8 % 5 6 & ’ 8 % 8 6 7 % & $ 6 8 % / 8 8 8 % ’ 7 5 7 % 6 8 % 6 9 9 * () ) 平均值
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葛 根 为 常 用 中 药! 系豆科植物野葛 B # % , C ) * " % "D . E " , " F@ + + G 或 甘 葛 藤 的 干 燥 根! 具有解肌 % % JD H@ B C ) * " * % ", 3 . 0+ . # % % y < z = D 生津 Q 透疹 Q 升阳止泻之功效 ! 临床常用于外感发热头 痛 Q 项 退热 Q 背强痛! 口渴! 消渴! 麻疹不透! 热痢! 泄泻! 以及高血压颈项强痛 / N N 等症状 M 葛根主要含有葛根素Q 黄豆苷Q 黄豆 " 现代 研 究 表 明 M ! 苷元等有效成分! 具有调节心脏功能及代谢Q 扩张冠状血管和脑 血 管Q 抗 心 脑 缺 血 和 心 律 失 常Q 降 血 压Q 降血糖和血脂等药理作 用" 据记载和调查 ! 除上述 -种外 ! 同属一些其他植物的根在少数 据成分检测 ! 其他种葛根素含量甚微或无 ! 不 地区也作葛根入药 "
参考文献 O
中 国 药 典! 北 京O 化 学 工 业 出 版 社! M/N 国 家 药 典 委 员 会 % U部M N % L $ $ $ ! / 7 7 P $ $ % 梁艺英! 莫金恒% 经前安片中柚皮苷含量的高效液相色谱 M-N 朱 炳 辉 ! 药物分析杂志 ! 增刊 , 测定方法研究 M N % / 8 # ! / 7 7 8 ! 8 & P 8 ’ % V
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精密加入 ! 称定重量’ 加热回流 ! 放 冷’ 再 " #乙醇 $ "%& ’ "%( ’ ) 称定重量’ 用! 乙 醇 补 足 减 失 的 重 量 滤 过 取 续 滤 液 用 微 孔 " # ’ ’ ’ 滤膜 * 孔径为 " 滤过 滤液作为供试品 + , $’ / %. 加甲醇制成每 0 ! " ! 参 照 物 的 制 备 精 密 称 取 葛 根 素 对 照 品’ 甲醇含葛根素 " 作为参照物 / + 1%2的溶液 ’ %& 分 ! " # 色谱条件 色谱柱为 32 " ?@ 0 ; ( & 4 ) 5 6 78 9 3: ; 3< = 5 4 ) > 析柱 * 流动相为 D 1 $ "%%A, + B%%’ $C $ #水溶液与 1 $ #甲 %. F 0 醇 洗 脱C 流速 0 柱温 1 检测波长 1 参比 + "%& E %( $ GC $ ") )C %C 波长 ! 分析时间 ! 供试品及参照物进样量各 1 B ") "%( C "/ %C ) & ! " $ 方法学考察 湖州样品. 分别在 " ! " $ " % 稳定性 实 验 取 同 一 批 次 供 试 品 * ’ ’ 用I 中药指纹图谱相似度计算 1 ’ , ’ ; ’ 0 B ’ 1 , ’ ! BH测 定 指 纹 图 谱 ’ 软件J 计算’ 结果相似度均大于 " 表明供试品在测定的 ! + K , ’ BH 内保持稳定 / 湖州样品. 连续进样 $ ! " $ " ! 精密度实验 取同一批次供试品* ’ 次’ 测定指纹图谱’ 考查进样精密度’ 用I 中药指纹图谱相似度计 算软件J 计 算’ 结果相似度均大于 " 表明供试品进样精密度 + K D ’ 良好 / 按供试品制备方法分别制备 $ ! " $ " # 重现性实验 取湖州样品’ 份 供试品’ 测定指纹图谱’ 用I 中药指纹图谱相似度计算软件J 计 结果相似度均大于 " 表明本法测定的重现性良好 / 算’ + K ! ’ 注入液相色谱仪’ 按 ! " & 指 纹 图 谱 的 建 立 取 供 试 品 溶 液 适 量’ 选定的测定条件 ’ 进行检测 / 同一上述实验条件下 ’ 测定所有供试 品 LM N @色谱图 / 根据 0 峰值* 积分值. "批 次 供 试 品 测 定 结 果 所 给 出 的 峰 数 O 和峰位 * 相对保留时间 . 等相关参数 ’ 进行分析 O 比较 ’ 制定优 化 的 图1 指纹图谱 / 图 0 ’ /
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