脑立体定位技术
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华南师范大学生命科学学院 神经生理学研究室
脑立体定位技术
Stereotaxic technique of brain
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
定位
在动物实验中， 在动物实验中，把细微的电极或导管定向插入到 脑内某个特定区域或核团， 脑内某个特定区域或核团，用于刺激或记录细胞 放电，进行微量注射及推挽灌流等项实验时必不 放电， 可少的步骤。是整个实验成功与否的关键第一步。 可少的步骤。是整个实验成功与否的关键第一步。
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材料 大鼠 小鼠 鸟 灌流装置： 灌流装置：注射器 胶管 手术器械 麻醉药 戊巴比妥钠 电损毁仪 显微拍照仪 冰冻切片机 包埋法 亚铁氰化钾+4%甲醛 灌流液 0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾 甲醛 （或10%） ） 硫酸亚铁
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定向技术 读懂脑立体定位图谱和参数 学会使用脑立体定位仪（江湾I型 立体定位仪 立体定位仪） 学会使用脑立体定位仪（江湾 型 C立体定位仪） 实验动物头颅骨特点 电极制作 慢性埋植电极技术 动脉灌流及固定 冰冻切片染色技术 电损毁技术
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滕氏蓝法（ 滕氏蓝法（Turnbull blue赤血盐法 ) 赤血盐法
3 Fe
2+
+ 2 [Fe(CN)6]3- = Fe3[Fe(CN)6]2↓滕氏蓝 ↓
0.9%NaCl150ml +硫酸亚铁 等量 硫酸亚铁+等量 硫酸亚铁 等量10%福尔马 福尔马 进行灌流6-8小时 林 进行灌流 小时 玻璃微电极法：用负极释放[Fe(CN)6]3- ，颈部肌 玻璃微电极法：用负极释放 肉接正极，通电20-50mA 40~60秒 肉接正极，通电 秒 断头取下10%福尔马林 固定 周，取脑再固定至少 断头取下 福尔马林 固定1周 2周后进行切片。 周后进行切片。 周后进行切片
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金属电极法： 金属电极法： 亚铁氰化钾+4%甲醛（或 甲醛（ 用0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾 甲醛 10%）灌流，金属电极接正极。 ）灌流，金属电极接正极。
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急性定位实验步骤 埋植手术封固 电损毁 灌流 电损毁 断头取脑 置放再1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾+10%福尔马林固定 周 福尔马林固定1周 置放再 亚铁氰化钾 福尔马林固定 10%福尔马林固定 福尔马林固定 切片 拍照
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诱发电位 群体峰电位幅度 PSA 潜伏期 PSL1 PSL2 斜率 EPSP 测量方法
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电损毁技术+动脉灌流及冰 电损毁技术 动脉灌流及冰 冻切片染色技术
胡学军
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
电损毁 电流在脑组织中扩散范围公式： 电流在脑组织中扩散范围公式： X=y/k ˆ2 (x:mm y:µA k:1000) 通电流100 µA ，则x=0.3mm 通电流 经验：用直流电1~5mA 10~20秒可在脑内产 经验：用直流电 秒可在脑内产 生直径约1mm大小的凝固点 生直径约 大小的凝固点 阳极电损毁法： 阳极电损毁法： 阳极接电极， 阳极接电极，阴极接伤口或肛门 电极尖端去绝缘部位<1mm 电极尖端去绝缘部位
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普鲁士蓝资料 成分：氰化铁合亚铁，不溶于水，难褪色， 成分：氰化铁合亚铁，不溶于水，难褪色，最初 由德国人发明因此叫普鲁士蓝！ 由德国人发明因此叫普鲁士蓝！普鲁士蓝 K[FeⅡ(CN)6FeⅢ] (Ⅱ表示 Ⅱ Ⅲ Ⅱ表示Fe2+,Ⅲ表示 Ⅲ Fe3+) 普鲁士蓝是一种无毒色素， 普鲁士蓝是一种无毒色素，铊可置换普鲁士蓝上 的钾后形成不溶性物质随粪便排出，对治疗经口 的钾后形成不溶性物质随粪便排出， 急慢性铊中毒有一定疗效。用量一般为每日250 急慢性铊中毒有一定疗效。用量一般为每日 mg／kg，分4次，溶于 ／ ， 次 溶于50 ml 15％甘露醇中口 ％ 高钾能增加肾对铊的清除， 服。适量补充氯化钾 高钾能增加肾对铊的清除， 可能与钾竞争性阻断肾小管对铊的吸收有关， 可能与钾竞争性阻断肾小管对铊的吸收有关，同 时钾可动员细胞内的铊到细胞外， 时钾可动员细胞内的铊到细胞外，使血铊含量增 可使临床病情加重，因此要慎用。 加，可使临床病情加重，因此要慎用。
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方法1 方法 电损毁（活体下进行、麻醉） 电损毁（活体下进行、麻醉） 颈外静脉放血、 颈外静脉放血、颈总动脉注入 固定24小时 固定 小时 冲掉固定液 酒精脱水 二甲苯透明 包埋石蜡 切片5微米厚 切片 微米厚 60度烘干后进行卡红染色 度烘干后进行卡红染色
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大鼠PP-DG诱发电位的测定 诱发电位的测定 大鼠 及定位技术
胡学军
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
Baidu Nhomakorabea
目标 理解诱发电位的产生机制 掌握测量诱发电位的分析统计 诱发电位的记录系统 刺激器参数的调节 POWERLAB系统 系统Scope软件操作 系统 软件操作 NS系统 系统 LTP记录系统 记录系统
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普鲁士兰： 普鲁士兰：Fe3[Fe(CN)6]2或KFe[Fe(CN)6] 或 滕士兰： 滕士兰：Fe4[Fe(CN)6]3或KFe[Fe(CN)6] 或 从后一种化学式可以看出其实普鲁士兰和滕士兰 是同一种物质（因为两者的结构是一致的） 是同一种物质（因为两者的结构是一致的） 普鲁士蓝是蓝图印刷中使用的颜料， 普鲁士蓝是蓝图印刷中使用的颜料，由 K3[Fe(CN)6]与二价铁反应制得。组织学上用 与二价铁反应制得。 与二价铁反应制得 普鲁士蓝来检测生物组织中的二价铁离子， 普鲁士蓝来检测生物组织中的二价铁离子，酸性 溶液中反应不溶的蓝色颜料，被称为滕氏蓝。 溶液中反应不溶的蓝色颜料，被称为滕氏蓝。检 测三价铁离子时使用的则是亚铁氰化钾， 测三价铁离子时使用的则是亚铁氰化钾，也生成 不溶的蓝色颜料，称为普鲁士蓝。 不溶的蓝色颜料，称为普鲁士蓝。研究表明滕氏 蓝与普鲁士蓝是同一物质， 蓝与普鲁士蓝是同一物质，颜色略有不同是因为 制备方法等的不同而导致的。 制备方法等的不同而导致的。
Sprague Dawley系大白鼠 系大白鼠 定位图谱 电生理学方法／布瑞希,J.等著 范世藩,江振裕合 等著； ：电生理学方法／布瑞希 等著；范世藩 江振裕合
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译, 上海科学技术出版社 1963.10
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
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卡红染色 看相关资料
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Prussian blue普鲁士蓝定位法 普鲁士蓝定位法 通直流时，若不锈钢一极接阳极， 通直流时，若不锈钢一极接阳极，不锈钢针的 Fe 3+脱离电极尖沉积在组织内与组织液的 -结合 脱离电极尖沉积在组织内与组织液的Cl 形成氯化高铁FeCl3，当它遇到亚铁氰化钾时产生 形成氯化高铁 普鲁士蓝.(黄血盐法 黄血盐法) 普鲁士蓝 黄血盐法
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化学标记 目的：实验结束后的一项常规工作，配合定位技 目的：实验结束后的一项常规工作， 术的补充 在进行慢性埋植电极技术中开始时候带有盲插性， 在进行慢性埋植电极技术中开始时候带有盲插性， 必须对记录电极和刺激电极的位置进行组织学鉴 定以排除那些记录部位和刺激部位不准确的实验 数据。 数据。 标记方法： 标记方法： 膀胺天蓝、普鲁士蓝法、 膀胺天蓝、普鲁士蓝法、卡红染色法等
脑立体定位技术
Stereotaxic technique of brain
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
定位
在动物实验中， 在动物实验中，把细微的电极或导管定向插入到 脑内某个特定区域或核团， 脑内某个特定区域或核团，用于刺激或记录细胞 放电，进行微量注射及推挽灌流等项实验时必不 放电， 可少的步骤。是整个实验成功与否的关键第一步。 可少的步骤。是整个实验成功与否的关键第一步。
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材料 大鼠 小鼠 鸟 灌流装置： 灌流装置：注射器 胶管 手术器械 麻醉药 戊巴比妥钠 电损毁仪 显微拍照仪 冰冻切片机 包埋法 亚铁氰化钾+4%甲醛 灌流液 0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾 甲醛 （或10%） ） 硫酸亚铁
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定向技术 读懂脑立体定位图谱和参数 学会使用脑立体定位仪（江湾I型 立体定位仪 立体定位仪） 学会使用脑立体定位仪（江湾 型 C立体定位仪） 实验动物头颅骨特点 电极制作 慢性埋植电极技术 动脉灌流及固定 冰冻切片染色技术 电损毁技术
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滕氏蓝法（ 滕氏蓝法（Turnbull blue赤血盐法 ) 赤血盐法
3 Fe
2+
+ 2 [Fe(CN)6]3- = Fe3[Fe(CN)6]2↓滕氏蓝 ↓
0.9%NaCl150ml +硫酸亚铁 等量 硫酸亚铁+等量 硫酸亚铁 等量10%福尔马 福尔马 进行灌流6-8小时 林 进行灌流 小时 玻璃微电极法：用负极释放[Fe(CN)6]3- ，颈部肌 玻璃微电极法：用负极释放 肉接正极，通电20-50mA 40~60秒 肉接正极，通电 秒 断头取下10%福尔马林 固定 周，取脑再固定至少 断头取下 福尔马林 固定1周 2周后进行切片。 周后进行切片。 周后进行切片
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金属电极法： 金属电极法： 亚铁氰化钾+4%甲醛（或 甲醛（ 用0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾 甲醛 10%）灌流，金属电极接正极。 ）灌流，金属电极接正极。
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急性定位实验步骤 埋植手术封固 电损毁 灌流 电损毁 断头取脑 置放再1%亚铁氰化钾 亚铁氰化钾+10%福尔马林固定 周 福尔马林固定1周 置放再 亚铁氰化钾 福尔马林固定 10%福尔马林固定 福尔马林固定 切片 拍照
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诱发电位 群体峰电位幅度 PSA 潜伏期 PSL1 PSL2 斜率 EPSP 测量方法
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电损毁技术+动脉灌流及冰 电损毁技术 动脉灌流及冰 冻切片染色技术
胡学军
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
电损毁 电流在脑组织中扩散范围公式： 电流在脑组织中扩散范围公式： X=y/k ˆ2 (x:mm y:µA k:1000) 通电流100 µA ，则x=0.3mm 通电流 经验：用直流电1~5mA 10~20秒可在脑内产 经验：用直流电 秒可在脑内产 生直径约1mm大小的凝固点 生直径约 大小的凝固点 阳极电损毁法： 阳极电损毁法： 阳极接电极， 阳极接电极，阴极接伤口或肛门 电极尖端去绝缘部位<1mm 电极尖端去绝缘部位
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普鲁士蓝资料 成分：氰化铁合亚铁，不溶于水，难褪色， 成分：氰化铁合亚铁，不溶于水，难褪色，最初 由德国人发明因此叫普鲁士蓝！ 由德国人发明因此叫普鲁士蓝！普鲁士蓝 K[FeⅡ(CN)6FeⅢ] (Ⅱ表示 Ⅱ Ⅲ Ⅱ表示Fe2+,Ⅲ表示 Ⅲ Fe3+) 普鲁士蓝是一种无毒色素， 普鲁士蓝是一种无毒色素，铊可置换普鲁士蓝上 的钾后形成不溶性物质随粪便排出，对治疗经口 的钾后形成不溶性物质随粪便排出， 急慢性铊中毒有一定疗效。用量一般为每日250 急慢性铊中毒有一定疗效。用量一般为每日 mg／kg，分4次，溶于 ／ ， 次 溶于50 ml 15％甘露醇中口 ％ 高钾能增加肾对铊的清除， 服。适量补充氯化钾 高钾能增加肾对铊的清除， 可能与钾竞争性阻断肾小管对铊的吸收有关， 可能与钾竞争性阻断肾小管对铊的吸收有关，同 时钾可动员细胞内的铊到细胞外， 时钾可动员细胞内的铊到细胞外，使血铊含量增 可使临床病情加重，因此要慎用。 加，可使临床病情加重，因此要慎用。
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方法1 方法 电损毁（活体下进行、麻醉） 电损毁（活体下进行、麻醉） 颈外静脉放血、 颈外静脉放血、颈总动脉注入 固定24小时 固定 小时 冲掉固定液 酒精脱水 二甲苯透明 包埋石蜡 切片5微米厚 切片 微米厚 60度烘干后进行卡红染色 度烘干后进行卡红染色
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大鼠PP-DG诱发电位的测定 诱发电位的测定 大鼠 及定位技术
胡学军
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2009年11月16日胡学军制作
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普鲁士兰： 普鲁士兰：Fe3[Fe(CN)6]2或KFe[Fe(CN)6] 或 滕士兰： 滕士兰：Fe4[Fe(CN)6]3或KFe[Fe(CN)6] 或 从后一种化学式可以看出其实普鲁士兰和滕士兰 是同一种物质（因为两者的结构是一致的） 是同一种物质（因为两者的结构是一致的） 普鲁士蓝是蓝图印刷中使用的颜料， 普鲁士蓝是蓝图印刷中使用的颜料，由 K3[Fe(CN)6]与二价铁反应制得。组织学上用 与二价铁反应制得。 与二价铁反应制得 普鲁士蓝来检测生物组织中的二价铁离子， 普鲁士蓝来检测生物组织中的二价铁离子，酸性 溶液中反应不溶的蓝色颜料，被称为滕氏蓝。 溶液中反应不溶的蓝色颜料，被称为滕氏蓝。检 测三价铁离子时使用的则是亚铁氰化钾， 测三价铁离子时使用的则是亚铁氰化钾，也生成 不溶的蓝色颜料，称为普鲁士蓝。 不溶的蓝色颜料，称为普鲁士蓝。研究表明滕氏 蓝与普鲁士蓝是同一物质， 蓝与普鲁士蓝是同一物质，颜色略有不同是因为 制备方法等的不同而导致的。 制备方法等的不同而导致的。
Sprague Dawley系大白鼠 系大白鼠 定位图谱 电生理学方法／布瑞希,J.等著 范世藩,江振裕合 等著； ：电生理学方法／布瑞希 等著；范世藩 江振裕合
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译, 上海科学技术出版社 1963.10
生理学研究技术
2009年11月16日胡学军制作
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卡红染色 看相关资料
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Prussian blue普鲁士蓝定位法 普鲁士蓝定位法 通直流时，若不锈钢一极接阳极， 通直流时，若不锈钢一极接阳极，不锈钢针的 Fe 3+脱离电极尖沉积在组织内与组织液的 -结合 脱离电极尖沉积在组织内与组织液的Cl 形成氯化高铁FeCl3，当它遇到亚铁氰化钾时产生 形成氯化高铁 普鲁士蓝.(黄血盐法 黄血盐法) 普鲁士蓝 黄血盐法
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化学标记 目的：实验结束后的一项常规工作，配合定位技 目的：实验结束后的一项常规工作， 术的补充 在进行慢性埋植电极技术中开始时候带有盲插性， 在进行慢性埋植电极技术中开始时候带有盲插性， 必须对记录电极和刺激电极的位置进行组织学鉴 定以排除那些记录部位和刺激部位不准确的实验 数据。 数据。 标记方法： 标记方法： 膀胺天蓝、普鲁士蓝法、 膀胺天蓝、普鲁士蓝法、卡红染色法等