呼吸道病毒及检验

怀化医专《微生物学检验》教案编号：

第三十五章呼吸道病毒及检验

呼吸道病毒：是指主要以呼吸道为侵入门户，引起呼吸道以及全身感染。

临床上的急性呼吸感染中有90～95%是由这群毒引起的。

主要种类：

正粘病毒科：流感病毒

副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒；

其他病毒如：风疹病毒、冠状病毒、腺病毒、鼻病毒、呼肠孤病毒等。粘病毒（Orthomyxovirus）：是指对人或某些动物红细胞表面的粘蛋白有亲和性

的病毒。

正、副粘病毒的分别以其核酸是否分节段为标准，分节段者为正粘病毒，不分节段者为副粘病毒。

第一节流行性感冒病毒

流行性感冒病毒简称流感病毒，是引起流感的病原体，流感是一种上呼吸道急性传染病，它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高，对人类的生命健康危害极大。

分为：甲、乙、丙三型。以甲型为例进行介绍。

一、生物学性状

（一）形态与结构

具有多形态，有的呈丝状、有的呈杆状，但一般为球形，病毒的直径为80～120nm，丝状体长短不一，长度有时可达4000nm，直径与球形病毒相同。

结构：由内向外分三个部分：核心

基质蛋白（M蛋白）

包膜

1、核心：

含：7-8段卷曲的单负股RNA（每段编码一种病毒蛋白）及包绕其周围的核蛋白（NP）、RNA多聚酶。

甲、乙型流感病毒为8个节段，丙型为7个节段，其基因组分节段的特点使本病毒在复制中易发生基因重组，导致基因编码的蛋白抗原发生变异而出现新亚型。

2、基质蛋白（M蛋白）

位于核心与包膜之间，具保护核心及维持病毒外形的作用，其抗原性稳定，

具有型特异性。

3、包膜

为脂质双层，来源于宿主细胞膜。其上嵌有两种刺突（糖蛋白）：

（1）血凝素(Hemagglutinin HA) ：

有如病毒的钥匙，用来打开及入侵人类或动物的细胞。

是第4段RNA编码的糖蛋白，HA能与多种动物（如鸡、豚鼠）和人的红细胞表面的糖蛋白受体相结合，引起红细胞凝集。该凝集可被相应抗体抑制（血凝抑制试验）。

其抗原性最易发生变异。它是流感病毒亚型划分的另一依据。

（2）神经氨酸酶（Neuraminidase NA）：

是第6段RNA编码的糖蛋白，具有酶活性，可水解宿主细胞表面糖蛋白末端的N-乙酰神经氨酸，有利于成熟病毒的释放。

神经氨酸酶的抗原结构较易发生变异，它是流感病毒亚型的划分依据之一。目前已发现HA有15种（H1-H15），NA有9种（N1-N9），所有亚型均可从禽类中分离到，但带有病毒的禽鸟未必会发病。

至今人类流行的亚型主要是由H1、H2、H3和N1、N2几种抗原构成。

（二）分型与变异

1、分型：

根据核蛋白抗原、M蛋白抗原的不同，将流感病毒分为甲（A）、乙（B）和丙（C）三型；甲型流感病毒又根据其表面血凝素及神经氨酸酶抗原性的不同再分为若干亚型。

2、变异：

乙型和丙型流感病毒抗原性比较稳定；甲型的表面抗原HA、NA最易变异，二者可同时变异，也可分别发生。

自1934年分离出甲型流感病毒以来，已发生多次世界性的大流行，以及大流行期间的小流行。

其变异的幅度小，属于量变，可引起中小规模流感的流行，称抗原漂移（Antigen drift），（这种变易是核酸序列的点突变，致使HA或HA抗原决定簇发生某些改变，并在免疫人群中被选择出来）。

若变异幅度大，（即新毒株的HA和/或NA完全与前次流行株失去联系），形成新的亚型，系质变，可以引起大规模甚至世界性的流感流行，称抗原转变(Antigenic shift)。是由核酸序列不断的突变积累或外来基因片断重组所致。

这种抗原性的转变使人群原有的特异性免疫力失效。

甲型流感病毒在不同年代的表现抗原变化

（三）培养特性

在鸡胚中生长良好，一般初次分离应先接种羊膜腔中传代适应后方接种尿囊腔。病毒在鸡胚中并不引起明显病变。用血凝试验可判断羊水或与尿囊液中有无病毒生长。

人流感病毒能感染多种动物，但只有雪貂的表现类似人类流感。

另外，甲、乙型流感在原代人胚肾、猴肾等组织细胞中也能生长。

（四）抵抗力

流感病毒抵抗力较弱，不耐热，56℃30分钟即被灭活，室温下感染性很快消失；对干燥、日光、紫外线及乙醚、甲醛等敏感；酸性条件下更易灭活，0-4℃可保存数周，-70℃或冷冻干燥可长期保存。

二、致病性与免疫性

1．致病性

流感的传染源主要是病人。

病毒经过飞沫传播，侵入呼吸道，通过其HA吸附于呼吸道粘膜上皮细胞膜上的HA受体上，然后侵入这些细胞进行增殖。

经1～2天的潜伏期，感染者即可出现流感症状。病毒在呼吸道粘膜上皮细胞内增殖，造成这些细胞变性，坏死脱落，粘膜充血水肿，腺体分泌增加；出现喷嚏、鼻塞、咳嗽等症状。

病毒在上皮细胞内复制，很少入血，但可释放内毒素样物质入血，引起全身中毒症状：发热、头痛、全身酸痛、疲乏无力、白细胞数下降等。

流感病毒感染一般数日内自愈，但幼儿或年老体弱病人易继发细菌感染，如合并肺炎等，病死率高。

2．免疫性

病后对同型病毒有免疫力，可维持1～2年，主要为分泌型lgA和血清中和抗体 lgM、lgG共同的作用；

三、微生物学检验

（一）分离与鉴定

1、标本采集和处理

鼻腔洗液、鼻咽拭子、咽漱液、支气管分泌物（接种前加入青霉素和链霉素）。

时间：发病后3天内（鼻咽分泌物病毒量达104-107/ml）；

尽快送检；低温保存。

2、检验程序

3、检验方法

（1）鸡胚培养

采取发病初期（发病3天）病人鼻咽洗液或含漱液，加青、链霉素杀菌后，接种于鸡胚羊膜腔内及尿囊腔中，35℃孵育2～4日，取羊水、尿囊液做血凝试验，检查有无病毒增殖。若试验为阴性，需在鸡胚中盲目传代三次后再试验。若血凝试验为阳性，可用已知流感病毒各型特异性抗体与新分离病毒进行血凝抑制试验，鉴定型别。

（2）细胞培养

原代人胚肾细胞、猴肾细胞、MDCK细胞，

观察CPE。做血凝试验或血吸附试验鉴定。

（3）动物分离培养

雪貂

（二）血清学试验

取病人急性期（发病3日内）和恢复期（发病2～4周）双份血清，同样与已知各亚型流感病毒进行血凝抑制试验或其他试验。恢复期血清的抗体效价是急性期的4倍或4倍以上，具有协助诊断意义。

其他试验：补体结合试验、中和试验、酶免疫试验、固相放免等。

（三）快速诊断

（1）免疫荧光、免疫酶等方法检测感染细胞或培养细胞中的病毒抗原。敏感、快速。

（2）分子杂交测病毒RNA：甲型

（3）PCR法测病毒RNA

（4）其他：免疫电镜

禽流感病毒

甲型流感病毒除了感染人外，还可引起禽、猪等多种动物感染，禽流感病毒即属此类病毒。

近年来发现禽流感病毒也可传染人，由禽类传染人的禽流感病毒有三种：甲型