依托泊苷肺靶向壳聚糖微球的研制

依托泊苷肺靶向壳聚糖微球的研制

于　莲1,李爱臣1,张传美1,董　宇2,张　吉吉1,平　洋1

(1.佳木斯大学化学与药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯154007;2.佳木斯市中心医院,黑龙江佳木斯154002)

摘要:目的:制备难溶性药物依托泊苷肺靶向壳聚糖微球,并对处方工艺进行筛选。方法:以壳聚糖为分散介质,采用乳化交联法制备依托泊苷肺靶向壳聚糖微球。结果:平均粒径为13.28Λm,载药量为25.30%,药物包封率为43.51%。结论:制备的微球具有良好的缓释作用和靶向性。

关键词:依托泊苷;壳聚糖;微球

中图分类号:TQ46　文献标识码:A　文章编号:1008-0104(2009)06-0047-01

微球作为抗肿瘤药物靶向制剂研究已有广泛报道。通过

控制微球粒径大小,可以使药物浓集靶区,达到提高疗效,降

低不良反应的目的。药物尤其是难溶性药物的粒径控制将直

接影响微球粒径及其靶向性。本实验以难溶性抗肿瘤药物依

托泊苷(etopo side)为肺靶向模型药物,采用来源丰富、具有

较强的亲水性的壳聚糖为载体材料,采用乳化交联法制备依

托泊苷肺靶向壳聚糖微球。

1　材料与仪器

1.1　主要试剂

依托泊苷(淄博磐信医药化工有限公司);壳聚糖(济南

海得贝海洋生物有限公司);试验用的试剂均为分析纯。

1.2　主要仪器

JJ-1精密增力电动搅拌器(常州国华电器有限公司);

BX-41型O lympus光学显微镜(日本O lympus公司);JEOL

JS M-6360LV扫描电镜(日本电子公司);UV757CR T型紫

外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。

2　方法与结果

2.1　依托泊苷肺靶向壳聚糖微球的制备

2.1.1　制备方法

用5%(体积比)的醋酸溶液溶解适量壳聚糖,将依托泊

苷加入到壳聚糖溶液中充分溶解后,用1N N aOH调节pH值

至5作为水相,取适量液体石蜡加乳化剂Span80置2500mL

圆底烧瓶中混匀,作为油相。在电动搅拌下,将水相通过注射

器滴入油相中,制成W O型乳剂,乳化30m in后,加入固化剂

戊二醛,固化一定时间后,用石油醚洗去油相,收集微球,之

后分别用石油醚、2%N aH SO3洗涤,无水乙醇脱水,室温真

空干燥,得微球。

2.1.2　正交设计工艺优化

通过单因素考察,以包封率为指标,确定水相与油相比

为1:8,Span80为液体石蜡的2%(体积比)。经总结文献资料

和预试验的结果,筛选药物与壳聚糖的比例、壳聚糖浓度、搅

拌速度,戊二醛用量为四个主要影响因素,每个因素三个水

平,见表1,进行正交试验。以包封率为考察指标,正交试验结

果见表2。

表1　L9(34)正交试验因素及水平设计表

因素

水平

A

搅拌速度(r m

in)

B

壳聚糖逍度(%

)

C

药物:壳聚糖

D

戊二醛用量(mL) 113003.01∶31.

0 215003.51∶12.0

317004.01∶23.0

表2　方差分析表

方差来源SS f M S F P

A93.91246.95353130.236<0.01

B97.23248.61613241.076<0.01

C85.80242.91503.967705>0.05

D21.63210.8160721.0696<0.01

误差0.030020.015

F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00。

从表2与表3结果分析影响因素大小顺序是B>A>C>

D,各因素三个水平的优劣次序为:壳聚糖的浓度(B):1>2>

3;搅拌速度(A):2>3>1;投药量(C):3>2>1;戊二醛用量

(D)2>1>3。综合各因素水平确定依托泊苷肺靶向壳聚糖微

球的最佳制备工艺为A2B1C3D2。

2.2　依托泊苷肺靶向壳聚糖微球的形态学性质

2.2.1　微球的外观形态

将微球分别置于显微镜和扫描电镜下观察,微球外观圆

整,大小较均匀,分散性良好,较少黏连。见图1、图2。

图1　微球的显微镜图(×400)

图2　微球扫描电镜图

2.2.2　微球的粒径及分布

将依托泊苷壳聚糖微球均匀分散于载玻片上,使用带目

微尺的光学显微镜记录500个微球的粒径,计算出平均粒径

为13.28Λm,见粒径分布图3。

图3　壳聚糖微球粒径分布图

(下转第48页)

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H E I LON GJ I AN G M ED I C I N E AND PHA RM A CY D ec.2009,V o l.32N o.6

CePO 4包覆M g -PSZ 复合粉体的制备

李德超,苏存萍

(佳木斯大学附属口腔医院黑龙江佳木斯154002)

关键词:化学分散直接沉淀法;M g -PSZ ;包覆

中图分类号:R 783　文献标识码:A 文章编号:1008-0104(2009)06-00I 48-02 氧化锆陶瓷体系因其突出的力学和生物学性能,开始成为国内外口腔生物材料开发的热点瓷材[1]

。但是,为了满足临床需求,烧结体难加工问题是其中之一。由于氧化锆陶瓷极高的抗弯强度和断裂韧性,无法直接采用口腔CAD CAM 系统对其进行磨削加工,目前,临床应用的主要是二步烧结的氧化锆陶瓷。二步烧结的氧化锆陶瓷虽然同时满足了加工工艺与理化性能的需求,但是从氧化锆原材料到最终氧化锆陶瓷修复体的生产加工工艺非常复杂,而且需要解决烧结收缩的问题[2,3]。本研究通过将软相磷酸铈包覆在高强度、高韧性的氧化锆表面,解决陶瓷材料的难加工问题,试图探索即能满足口腔临床要求又可以直接用于口腔CAD CAM 系统的、一次烧结牙科陶瓷材料的制备方法,为氧化锆基全瓷材料在口腔临床的广泛应用打下基础。

1　材料与方法

1.1　实验材料

实验选用自制10mo l %M g -PSZ 粉体、硝酸铈、磷酸氢二铵、无水乙醇为原料,聚乙二醇20000分散剂,柠檬酸铵为

脱模剂。

1.2　实验方法实验中将称量好的M g -PSZ 粉体配置成3%的质量百分比浓度的悬浮液,超声分散15m in 后;按M g -PSZ 质量的2%称量分散剂聚乙二醇和氧化锆质量的1.5%称量脱模剂柠檬酸铵50℃度溶于去离子水中后加入M g -PSZ 悬浮液中,再超声分15m in ;然后加入溶解的计算量磷酸氢二铵,再超声分15m in ;用磷酸将混合均匀的悬浮液调pH 值到4.0,缓慢滴入溶解的计算量硝酸铈,控制反应温度为50℃,搅拌下反应2h 。絮凝完全后将上层清液倒出,把下层固相含量较大的部分进行离心分离。最后在烘箱中烘干,研磨后800℃和1000℃煅烧,研磨后备用。1.3　指标检测

利用XRD (Cu 靶)、T E M 对反应产物、

物相以及显微结构进行了分析。

(上接第47页)

2.3　依托泊苷肺靶向壳聚糖微球的载药特性2.

3.1　标准曲线的制备

精密称取真空干燥至恒重的依托泊苷0.0108g 至100mL 容量瓶中,加入10mL 无水乙醇使溶解,pH 6.5磷酸盐缓冲液定容得标准溶液;分别精密吸取标准溶液1.0mL 、2.0mL 、3.0mL 、4.0mL 、5.0mL 置10mL 量瓶中,pH 6.5磷酸盐缓冲液(含5%乙醇)定容,再分别精密吸取1mL 置10mL 容量瓶中,定容,得系列浓度的溶液,按紫外分光光度法于293nm 波长处测定吸收度A ,以浓度C 对A 进行线性回归。标准曲线为

A =0.0946C +0.043,r =0.9997,1.08～5.40Λg mL 有良

好的线性关系。

2.3.2　回收率的测定

分别精密称取0.008g 、0.010g 、0.012g 依托泊苷,加入一系列空白壳聚糖微球中,加0.1N HC l 20Lm ,60℃水浴回流3h 使微球完全溶解后,转移至100mL 量瓶中,pH 6.5磷酸盐缓冲液(含5%乙醇)定容,分别吸取1mL 至100mL 容量瓶中,过滤,取续滤液在293nm 处测定吸收度,代入标准曲线求其含量。

2.3.3　含药量和包封率的的测定

精密称取依托泊苷壳聚糖微球30m g ,加入20mL 0.1N HC l ,60℃水浴回流3h ,使微球全部溶解后转移至100mL 量瓶中,pH 6.5磷酸盐缓冲液(含5%乙醇)定容,再精密吸取1mL 至100mL 容量瓶中,定容,于293nm 处测定吸收度,代入标准曲线计算药物含量。按下列公式分别计算微球含药量和包封率,含量为25.30%,包封率为43.51%。

含药量(%)=微球中的药物量

微球重量

×100

含药量(%)=

微球中的药物量

处方药物量

×100

3　讨论

乳化交联法制备壳聚糖微球过程中,乳剂的制备直接决定微球的粒径分布,其中影响较大的因素有搅拌方式、搅拌速度、油水两相比、乳化剂浓度等。温度、连续相比例和壳聚糖浓度对微球的外观形态、收率有显著影响,其中壳聚糖浓度还影响微球的包封率,是制备微球的关键因素。壳聚糖易溶于酸性溶液,但在强酸性条件下发生降解,所以选择弱酸型刺激性小的醋酸溶解。依托泊苷极不易溶于水和其它生理溶液,且稳定性受pH 值影响,在pH 值为5时最稳定,因此将均匀混悬于壳聚糖的醋酸溶液中,并用N aOH 溶液调节pH 值到5。壳聚糖微球固化完成后,先用石油醚洗去残余的液体石蜡,然后用2%亚硫酸氢钠溶液洗涤,除去未反应完的戊二醛,防止交联反应继续进行而产生微球相互粘连现象,最后用无水乙醇洗涤2～3次,使微球快速脱水。由于依托泊苷在无水乙醇中有一定的溶解性,脱水后微球的载药量会有轻微下降,但影响不大;如果不对微球进行快速脱水,干燥后得到的微球多为不规则颗粒,外观不圆整。

参考文献:

[1]Ew end W G ,W illiam s J A .L ocal delivery of chemo therapy and

concurrent external beam radi o therapy p ro longs survival in m etastatic brain tumo r models [J ].Cancer R es ,1996,56(22):5217

[2]Kenjisuzuk i ,T eruh isa N akam ura .A new drug delivery system fo r

local cancer chemo therapy using cisp latin and ch itin [J ].A nti 2cancer R escarch ,1995,15:423

(收稿日期:2009-09-21)

项目来源:黑龙江省生物药制剂重点实验室项目

作者简介:于莲(1961～)女,黑龙江佳木斯人,教授,研究生导师。

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84・ 黑龙江医药科学　2009年12月第32卷第6期