细胞生物学第十一章(沈婷)PPT幻灯片
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
体的亚单位上的定位。 对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白关系
的空间模型
同一生物中不同种类的r蛋白的一级结 构 均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。
不同生物同一种类r蛋白之间具有很高 的同源性， 并在进化上非常保守。
蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性。
第九章 核糖体(ribosome)
核糖体是合成蛋白质的细胞器；核糖 体几乎存在于一切细胞内，不论是原核细 胞还是真核细胞。
核糖体的类型与结构 多聚核糖体与蛋白质的合成 反义RNA与核酶
第一节 核糖体的类型与结构
核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的 功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确 地合成多肽链。
与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位 点，又称P位点
肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点—— E位点(exit site)
与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点
肽酰转移酶的催化位点
与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点
在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究
多聚核糖体的生物学意义 细胞内各种多肽的合成，不论其分子量的大小 或是mRNA的长短如何，单位时间内所合成的 多肽分子数目都大体相等。 以多聚核糖体的形式进行多肽合成，对mRNA 的利用及对其浓度的调控更为经济和有效。
三、RNA在生命起源中的地位及其演 化过程
生命是自我复制的体系
核糖体蛋白
在核糖体中rRNA是起主要作用的结构 成分
r蛋白质的主要功能
核糖体蛋白
很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白 质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。
多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由 于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。
在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白 的结构具有更高的保守性。
16SrRNA的一级结构是非常保守的
16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure)
rRNA臂环结构的三级结构模型
蛋白质合成过程中很多重 要步骤与50S核糖体大亚单位相关 涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)， 核糖体上与之相关位点称为GTPase相关位点。
核糖体的重组装是自我装配过程
二十世纪六十年代初期Robert Perry用紫外微光束破坏活细胞的核 仁，发现破坏了核仁的细胞丧失合成rRNA的能力，这一发现提示 核仁与核糖体的形成有关。后来Perry又发现低浓度的放线菌素D 能够抑制3H-尿嘧啶掺入rRNA中，而不影响其他种类的RNA合成。 显微放射自显影也显示放线菌素D能够选择性阻止核仁RNA的合成， 表明核仁与rRNA的合成有关。
在核糖体中rRNA是起主要作用的结构 成分
具有肽酰转移酶的活性； 为tRNA提供结合位点(A位点、P位点和E位点)；
在蛋白质合成起始时参与同mRNA选择性地结
合以及在肽链的延伸中与mRNA结合； 核糖体大小亚单位的结合、校正阅读
(proofreading)、 无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作 用等 都与rRNA有关。
结ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ与功能的分析方法
离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； 纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装，
显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中，
与rRNA结合的蛋白质的类型 双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在
结构上的相互关系 电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖
r蛋白质的主要功能
对rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重 要的；
在蛋白质合成中, 某些r蛋白可能对核糖体的 构象 起“微调”作用；
在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用 中, 核 糖体蛋白与rRNA共同行使功能。
第二节 聚核糖体与蛋白质的合成
多聚核糖体(polyribosome或polysome)
与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点
肽酰转移酶的催化位点
与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
与mRNA的结合位点
与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位 点，又称A位点
蛋白质的合成
蛋白质合成的起始(initiation)、多肽链的延伸(elongation)、终止 (termination)
RNA在生命起源中的地位及其演化过程
一、多聚核糖体 (polyribosome或polysome)
概念 核糖体在细胞内并不是单个独立地执行功能，而是由多个 甚至几十个核糖体串连在一条mRNA分子上高效地进行肽 链的合成，这种具有特殊功能与形态结构的核糖体与 mRNA的聚合体称为多聚核糖体。
核糖体的基本类型与成分
核糖体的结构
核糖体蛋白质与rRNA的功能分析
一、核糖体的基本类型与成分
核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) 基本类型 附着核糖体 游离核糖体 70S的核糖体 80S的核糖体 主要成分 r蛋白质：40%，核糖体表面 rRNA:60%,，核糖体内部 发现核糖体的两个关键技术
最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体， 获得了其空间结构高分辨率的三维图象。
这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结 论提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可 能的作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿 年历史的古老的高度复杂的分子机器的运转奥秘迈出 了极重要的一步。
三、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性 研究
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
与mRNA的结合位点
与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位 点，又称A位点
与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位 点，又称P位点
肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点—— E位点(exit site)
的空间模型
同一生物中不同种类的r蛋白的一级结 构 均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。
不同生物同一种类r蛋白之间具有很高 的同源性， 并在进化上非常保守。
蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性。
第九章 核糖体(ribosome)
核糖体是合成蛋白质的细胞器；核糖 体几乎存在于一切细胞内，不论是原核细 胞还是真核细胞。
核糖体的类型与结构 多聚核糖体与蛋白质的合成 反义RNA与核酶
第一节 核糖体的类型与结构
核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的 功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确 地合成多肽链。
与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位 点，又称P位点
肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点—— E位点(exit site)
与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点
肽酰转移酶的催化位点
与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点
在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究
多聚核糖体的生物学意义 细胞内各种多肽的合成，不论其分子量的大小 或是mRNA的长短如何，单位时间内所合成的 多肽分子数目都大体相等。 以多聚核糖体的形式进行多肽合成，对mRNA 的利用及对其浓度的调控更为经济和有效。
三、RNA在生命起源中的地位及其演 化过程
生命是自我复制的体系
核糖体蛋白
在核糖体中rRNA是起主要作用的结构 成分
r蛋白质的主要功能
核糖体蛋白
很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白 质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。
多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由 于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。
在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白 的结构具有更高的保守性。
16SrRNA的一级结构是非常保守的
16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure)
rRNA臂环结构的三级结构模型
蛋白质合成过程中很多重 要步骤与50S核糖体大亚单位相关 涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)， 核糖体上与之相关位点称为GTPase相关位点。
核糖体的重组装是自我装配过程
二十世纪六十年代初期Robert Perry用紫外微光束破坏活细胞的核 仁，发现破坏了核仁的细胞丧失合成rRNA的能力，这一发现提示 核仁与核糖体的形成有关。后来Perry又发现低浓度的放线菌素D 能够抑制3H-尿嘧啶掺入rRNA中，而不影响其他种类的RNA合成。 显微放射自显影也显示放线菌素D能够选择性阻止核仁RNA的合成， 表明核仁与rRNA的合成有关。
在核糖体中rRNA是起主要作用的结构 成分
具有肽酰转移酶的活性； 为tRNA提供结合位点(A位点、P位点和E位点)；
在蛋白质合成起始时参与同mRNA选择性地结
合以及在肽链的延伸中与mRNA结合； 核糖体大小亚单位的结合、校正阅读
(proofreading)、 无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作 用等 都与rRNA有关。
结ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ与功能的分析方法
离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； 纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装，
显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中，
与rRNA结合的蛋白质的类型 双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在
结构上的相互关系 电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖
r蛋白质的主要功能
对rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重 要的；
在蛋白质合成中, 某些r蛋白可能对核糖体的 构象 起“微调”作用；
在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用 中, 核 糖体蛋白与rRNA共同行使功能。
第二节 聚核糖体与蛋白质的合成
多聚核糖体(polyribosome或polysome)
与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点
肽酰转移酶的催化位点
与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
与mRNA的结合位点
与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位 点，又称A位点
蛋白质的合成
蛋白质合成的起始(initiation)、多肽链的延伸(elongation)、终止 (termination)
RNA在生命起源中的地位及其演化过程
一、多聚核糖体 (polyribosome或polysome)
概念 核糖体在细胞内并不是单个独立地执行功能，而是由多个 甚至几十个核糖体串连在一条mRNA分子上高效地进行肽 链的合成，这种具有特殊功能与形态结构的核糖体与 mRNA的聚合体称为多聚核糖体。
核糖体的基本类型与成分
核糖体的结构
核糖体蛋白质与rRNA的功能分析
一、核糖体的基本类型与成分
核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) 基本类型 附着核糖体 游离核糖体 70S的核糖体 80S的核糖体 主要成分 r蛋白质：40%，核糖体表面 rRNA:60%,，核糖体内部 发现核糖体的两个关键技术
最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体， 获得了其空间结构高分辨率的三维图象。
这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结 论提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可 能的作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿 年历史的古老的高度复杂的分子机器的运转奥秘迈出 了极重要的一步。
三、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性 研究
核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点
与mRNA的结合位点
与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位 点，又称A位点
与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位 点，又称P位点
肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点—— E位点(exit site)