苹果多酚的提取及不同品种之间多酚含量的比较

苹果多酚的提取以及不同品种之间多酚含量的比较10科三朱颖林嘉婉陈杏丹萧芷玲罗蓝

一、研究目的

苹果多酚是苹果中具有苯环并结合有多个羟基化学结构物质的总称。大量研究表明苹果多酚是一种优越的抗氧化剂，具有抗癌、抗氧化、抗动脉硬化、抗紫外线等功能。探究不同品种苹果中多酚含量的差异，可以为不同的生长环境对其合成苹果多酚的影响提供依据，同时为消费者选择苹果时提供一个营养参考。

二、研究依据

苹果多酚作为植物本身的次级代谢产物，其含量常因品种、成熟度、种植条件和贮藏条件及时间、组织内不同部位而存在较大差异。比如，很多前人研究过未成熟苹果和成熟苹果中多酚含量的不同，虽然其成分组成相似，但成分含量上却有很大差别。不同品种苹果中多酚含量的比较，目前研究较少。本实验创新之处在于以富士苹果、青苹果以及嘎拉果为研究对象，提取其苹果多酚并测定含量进行比较，以期为消费者选择苹果时提供一个参考。

三、实验内容及预期结果

3.1配制主要试剂

没食子酸标准溶液：准确称取没食子酸(分析纯)0．1000 g溶解于70％的乙醇中并定容至100ml，再用70％的乙醇稀释至10倍，即得浓度为100μg/mL的标准溶液，现用现配。

Folin-Ciocalteu试剂：在l L磨口回流蒸馏器中加入100 g钨酸钠

(Na2WO4)，25 g钼酸钠(NazMoO4)，700 mL蒸馏水，50 mL 85％磷酸。100 mL37％盐酸HCl，冷凝回流10 h，然后添加150 g硫酸锂(Li2S04)和数滴溴液(Br2)，取下冷凝管，重新加热至沸。维持15 min，驱去多余溴，冷却后补足蒸馏水至1000 mL，用棕色试剂瓶装好，置于冰箱中长期冷藏备用，临用时稀释3倍。

10％Na2C03溶液：称取10．0g无水Na2C03，用水溶解，定容至100mL。

3.2标准溶液的选择及建立

本试验选用没食子酸作为标准品。将准确称取的100μg/ml没食子酸标准品配制成不同浓度25、50、75、100、125、150μg/ml的标准溶液。即吸取100μg/ml没食子酸标准溶液0.05、0.10、0.15、0.20、

0.25、0.30ml于5ml带塞试管中，分别加入蒸馏水1.95、1.90、1.85、

1.80、1.75、1.70ml，再加入Folin-Ciocalteu试剂1.0 mL，充分振荡后静置3～4 min，分别加入10％Na2C03溶液1.0 mL，摇匀置于25"C 恒温水浴中反应2 h；于765 nm下测定吸光度，以含量对吸光度(A)进行直线回归，得回归方程。

3.3原料的处理

取不同品种苹果的相同部位，由压榨机打成苹果渣，各称取5.0g

于锥形瓶中，加入80ml70%的乙醇，在80℃的水浴中热回流提取3 次，每次2h，4000r/min 离心20min:，收集合

并上清液，用旋转蒸发仪在0.09MPa下浓缩并回收乙醇，浓缩液用70%的乙醇定容至50ml待测。

3.4原料多酚含量的测定

利用分光光度计测定三种苹果在765nm处的吸光值，记录结果。3.5统计分析测定的结果

结果计算样品中多酚物质含量（以没食子酸计，mg/g)

=(a1*V1)/(V2*w)

a1：样品液中多酚的含量（ug）

V1：:样品液的总体积（ml）

V2：测定提取样液的体积(μl)

W：称取的样品量（g）

3.6重复性实验

取以上样品各一份，按上述实验方法进行平行测定。

3.7预期结果

果样品多酚物质的含量在5—30μg/g的范围内，不同苹果多酚物

质的含量有一定的差别，红苹果的多酚物质含量可能会高一点

四、实验所需条件

没食子酸、苹果渣、福林试剂

五、实验结果记录与分析方法

5.1试验的记录项目

5.1.1根据没食子酸标准溶液所测吸光度值绘制浓度-OD标准曲线

表1 没食子酸标准溶液吸光度值

没食子酸μg/ml25 50 75 100 125 150 OD765 nm

5.1.2利用分光光度计测定A,B,C三种苹果在765nm处的吸光值，记录结果

表2 三种不同苹果的吸光度值

苹果品种 A B C

OD765 nm

根据公式，计算A,B,C三个品种的苹果的多酚含量

5.2试验结果的分析方法

通过A,B,C三个品种的苹果的多酚含量得测定，得出苹果多酚含量较高的苹果品种。分析此结果对于人们日常生活挑选苹果，或培育苹果多酚含量较高的苹果及提高苹果多酚的应用效率有指导意义。六、已具备的条件和研究进度安排

时间实验进度安排

第十一周分析确定实验的可行性

第十二周11月19号

（3个人完成）配制没食子酸标准溶液、Folin-Ciocalteu试剂、10％Na2C03溶液

制作标准溶液曲线

11月20号

（3个人完成）制做苹果渣、分别测定不同苹果的OD值

11月22号重复实验

（3个人完成）

11月24号

整理数据

（1个人完成）

第13周撰写实验报告