提取绞股蓝皂苷实验方案

一、原位凝胶的制备：
(基于壳聚糖的纳米凝胶口服药物输送载体的构建及其透黏膜机理的研究-冯超)
直接购买CMCS，
CS/CMCS 纳米凝胶（CS/CMCS-NGs）的制备：聚电解质凝聚法
配制浓度为 3 mg/mL 的 CS 稀醋酸溶液中，其中醋酸溶液的浓度为 1 %（v/v），调节 pH 至 6.0，将一定浓度的 TPP水溶液滴加到上述溶液中，室温搅拌 30 min，将一定浓度的 CMCS 水溶液滴入到 CS-TPP 混合液中，室温搅拌30 min，得到 CS/CMCS-NGs。

（TPP：三聚磷酸钠）
二、绞股蓝皂苷的提取
（华南理工大学硕士学位论文《绞股蓝皂苷的提取、分离纯化及抗氧化作用的研究》洪秀云）
1、绞股蓝皂苷提取
※有机溶剂提取法
空白对照组：常规水提法作为对照组，称取1.000g绞股蓝干叶粉末，以料液比1∶25于80℃加热浸提120min，离心取上清液，（按照2.3.2的方法）测定吸光值，计算总皂苷提取率。

试验组：在水提法的基础上，加入纤维素酶，提取绞股蓝皂苷。

2、绞股蓝皂苷含量、提取率测定的计算公式：
(1)、绞股蓝总皂苷含量的测定：分别吸取100μL（V1）样液置于10 mL试管中，按上述方法测其吸光值A，代入回归方程可得所测样液绞股蓝总皂苷的含量C。

再根据公式2-1计算各部分样液的绞股蓝总皂苷含量M1。

(2)、绞股蓝皂苷提取率的测定
乙醇提取的单因素实验和正交试验
三、绞股蓝皂苷的分离纯化
（华南理工大学硕士学位论文《绞股蓝皂苷的提取、分离纯化及抗氧化
作用的研究》洪秀云）
※D101大孔吸附树脂纯化绞股蓝皂苷
1、树脂的预处理方法：足量的D101 大孔吸附树脂用
80 %乙醇浸泡溶胀24 h 后，用80 %乙醇反复清洗数次，
再用蒸馏水洗涤至无醇味，于 4 ℃冰箱中保存备用。

2、上样浓度的确定：精确称取湿态大孔树脂每份
各20 g（等于干重 5.5 g）,加入适量水填柱(17 mm×
200mm)后，待树脂沉底后，测柱体积（约22 mL）。

称
取生药各200.0 mg、400.0 mg、600.0 mg、800.0 mg、
1000.0 mg 分别溶解于水，定容至100 mL（即浓度分
别为 2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL、10 mg/mL）配成初始液，分别并测总皂苷含量。

将以上 5 种不同
浓度的初始液以 2 mL/min 的流速重复上柱 2 次，再
以蒸馏水洗脱至无糖，将水洗脱液浓缩至100 mL 测其
吸光值。

通过初始液与水洗脱液中绞股蓝总皂苷含量计
算的比较，确定最佳上样浓度。

以上实验重复 3 次。

3、乙醇浓度和体积的确定：精确称取生药600.0
mg，配成浓度6 mg/mL 的初始液各100 mL，重复上
柱 2 次后以蒸馏水清洗至流出液无糖，再以体积分数
为30 %，50 %，70 %，90 %的乙醇梯度洗脱，部分收
集各浓度梯度乙醇的洗脱液，每管40 mL 各 5 管，分
别测其水洗残液及各收集管中绞股蓝总皂苷含量。

重复
3 次。

分别收集各浓度乙醇洗脱的洗脱液，浓缩烘干成
粉末备用，待测。

分别将30 %、50 %、70 %、90 %的
乙醇洗脱出来的绞股蓝总皂苷称为总皂苷A、B、C、D，
以方便后续实验过程与结果的描述。

四、原位凝胶包埋绞股蓝皂苷
（壳聚糖微球/纳米粒的制备及其性能研究——刘慧）
※离子交联法
配制浓度分别为1.0mg/mL、2.0、3.0、4.0、5.0的壳聚糖醋酸溶液，
0.50、0.75、1.0、1.25、1.50、1.75、2.0的三聚磷酸钠（TPP）水溶液。

室温下，在机械搅拌（550rpm）下，将14mLTPP水溶液用滴液漏斗逐滴滴
入35ml壳聚糖醋酸水溶液中，维持反应30min。

反映产物呈现不同状态：
澄清溶液，乳光悬液，沉淀。

其中呈现乳光悬液的是纳米粒子悬浮液。

五、包埋率的测定
(基于壳聚糖的纳米凝胶口服药物输送载体的构建及其透黏膜机理的研
究-冯超)
载药纳米凝胶的药物包封率和载药量测定：
将CS/CMCS-NGs 悬浊液，在4 ℃，30000 rpm，离心30min，取上清液，分光光度计测定在480 nm 波长处的吸光值，根据绞股蓝皂苷在去
离子水中的标准曲线计算上清液中绞股蓝皂苷的质量，分别按照公式（3-1）和公式（3-2）计算载药纳米凝胶的包封率（Loading efficiency, LE）和载药
量（Loadingcontent,，LC）[54]：
LE= W2*100 %/W0 公式（3-1）
LC= W2*100%/（W1+W2）公式（3-2）
其中，W0为DOX 的加药质量，W1为纳米凝胶载体材料的质量，W2为
纳米凝胶所包载的DOX 的质量。

问题：
1、测定吸光度值时需不需要绘制标准曲线？
2、需要考虑各种因素对皂苷提取率的影响？需不需要做单因素试验和正
交试验？。